用加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸去氧肾上腺素中杂质C的含量

徐亮亮，朱小林，苏　丽

（江苏先科药业有限公司，江苏　南通　226200）

用加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸去氧肾上腺素中杂质C的含量

徐亮亮，朱小林，苏丽

（江苏先科药业有限公司，江苏南通226200）

目的建立加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸去氧肾上腺素中杂质C的含量。方法采用C18柱（4.6mm×250 mm，5 μm），以乙腈∶0.325％磺酸钠（用磷酸调节pH值为2.8）（10∶90）为流动相，梯度洗脱，流速为1.5mL·min-1，柱温为45℃，检测波长为215 nm，进样量为20 μL。测定杂质C相对于盐酸去氧肾上腺素的相对出峰时间及校正因子，并计算其含量。结果杂质C在0.065 1～1.626 9 μg·mL-1，盐酸去氧肾上腺素在0.064 7～1.618 4 μg·mL-1浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系；杂质C相对于盐酸去氧肾上腺素的相对保留时间为1.3，校正因子为0.50。结论本方法专属性强，结果准确可靠，无需提供杂质对照品，能够准确测定盐酸去氧肾上腺素中杂质C的含量。

盐酸去氧肾上腺素；杂质C；校正因子

盐酸去氧肾上腺素为拟肾上腺素药物，用于防治脊椎麻醉、全身麻醉、外科手术延长局疗麻醉时间，鼻黏膜充血的消炎、眼科的扩瞳以及急性低血压的升压、感冒等，为急救常备药品［1～3］。为确保药物的安全性，降低不良反应，需对药物的杂质进行有效的检测和控制［4～7］。本文主要对盐酸去氧肾上腺素的杂质C［1-（3-hydroxyphenyl）-2-（methylamino）ethanone］进行研究，建立了测定杂质C含量的加校正因子的主成分自身对照法。经验证，本文建立的方法专属性强，重复性好，准确度高，可用于盐酸去氧肾上腺素杂质C的质量控制，并减少盐酸去氧肾上腺素质量控制过程中对杂质C对照品的依赖。

1　仪器与试药

1.1仪器Dionex P680高效液相色谱仪（UV检测器，美国戴安公司），色谱柱（Wonda Cract ODS-2C18，4.6mm×250 mm，5 μm）组成色谱系统 1；Agilent 1260高效液相色谱仪（DAD检测器，美国安捷伦公司），色谱柱（Agilent Zorbax Eclipse Plus C18，4.6mm×250 mm，5 μm）组成色谱系统2；DV215CD电子天平（美国Ohaus公司）；STARTER3100型pH计（美国Ohaus公司）。

1.2试药盐酸去氧肾上腺素（批号：140601、140602、140603，赤峰艾克制药科技股份有限公司）；盐酸去氧肾上腺素对照品（批号：100261-201403，含量：99.9％，中国药品生物制品检定所）；杂质C对照品（批号：03045191C，含量：98.6％，英国LGC）；乙腈为色谱纯（德国 Merck公司），水为超纯水，其它试剂为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件C18柱（4.6mm×250 mm，5 μm），流动相A：乙腈∶0.325％磺酸钠（用磷酸调节pH值为2.8）（10∶90），流动相B：乙腈∶0.325％磺酸钠（用磷酸调节 pH值为2.8）（90∶10），梯度洗脱（见表1），流速为1.5mL·min-1，柱温45℃，检测波长为215 nm，进样量10 μL。

2.2溶液的制备供试品溶液配制：取盐酸去氧肾上腺素，加混合溶剂［流动相B∶流动相A（20∶80，V/V）］制成每1 mL中约含盐酸去氧肾上腺素1 mg的溶液。

对照品溶液配制：取杂质C对照品，加混合溶剂［流动相B∶流动相A（20∶80，V/V）］制成每1 mL中约含0.001 mg杂质C的溶液。

2.3专属性试验用混合溶剂配制盐酸去氧肾上腺素供试品溶液，分别注入仪器系统1、系统2，结果见图1～4和表2。结果显示杂质C相对于盐酸去氧肾上腺素的保留时间确定为1.3，杂质C峰前后峰分离度均大于1.5，系统适用性良好，专属性试验符合要求。

表2　盐酸去氧肾上腺素和杂质C在不同系统中的出峰时间和分离度

2.4精密度、重复性试验取“2.2”项下杂质C对照品溶液，在仪器系统1与仪器系统2中各连续进样6次，测得杂质C峰面积的RSD分别为0.6％、0.4％。取同一批样品，平行配制6份，测定含量，测得杂质C平均含量分别为0.035％，RSD=0.9％（n =6）、0.036％，RSD=1.0％（n=6）。

图1　系统1：盐酸去氧肾上腺素供试品图谱

图2　系统1：杂质C对照品图谱

图3　系统2：盐酸去氧肾上腺素供试品图谱

2.5溶液稳定性试验按“2.2”项下方法配制供试品溶液，室温放置，分别于0、1、2、4、6、8、12、24 h进样，记录色谱图。结果杂质C峰面积RSD为0.4％，盐酸去氧肾上腺素峰面积RSD为0.8％。

2.6检测限和定量限采用逐步稀释法，在仪器系统1和仪器系统2中测得盐酸去氧肾上腺素的检测限（S/N=3）均为0.39 ng，定量限（S/N=10）均为1.29 ng；杂质C的检测限和定量限分别为0.20 ng、0.65 ng。

图4　系统2：杂质C对照品图谱

2.7回收率试验取本品适量，精密称定，置100 mL量瓶中，分别精密加入杂质C 26.13、52.26、78.39 μg各3份，加混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，进样测定，计算得杂质C的平均加样回收率为99.29％，RSD为0.66％（n=9），结果见表3。

表3　杂质C回收率试验结果

2.8线性试验取杂质C对照品2.20 mg，用流动相溶解并依次稀释制成浓度分别为0.065 1、0.271 2、0.542 3、1.084 6、1.626 9 μg·mL-1的线性溶液；取盐酸去氧肾上腺素对照品2.15mg，用流动相溶解并依次稀释制成浓度分别为0.064 7、0.269 7、0.539 5、1.078 9、1.618 4 μg·mL-1的线性溶液。

按“2.1”项下方法进行测定。由峰面积对浓度进行线性回归，得线性方程：杂质C：Y=268 621X-422.49，r=1。杂质C浓度为0.0651 ～1.626 9 μg·mL-1时，峰面积与浓度呈良好的线性关系；盐酸去氧肾上腺素：Y=134 166X-424.83，r =0.999 9。盐酸去氧肾上腺素浓度为0.064 7～1.618 4 μg·mL-1时，峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.9杂质C校正因子的确定由杂质研究技术指导原则可知，由于特定杂质的不易取得，可采用加校正因子的方式对特定杂质进行定量，参考《中国药典》2010年版（二部）附录药品杂质分析指导原则，可采用校正因子法对杂质进行定量分析，采用斜率的比值确定并验证杂质C的相对校正因子［8］，结果见表4。

表4　校正因子测定结果

2.10样品测定取盐酸去氧肾上腺素，按“2.1”、“2.2”项下的方法分别用外标法和加校正因子（f= 0.50）的主成分自身对照法测定杂质C的含量，结果见表5。

表5　样品（杂质C）测定结果

3　讨论

以上研究结果显示，本文建立的杂质C色谱系统具有良好的专属性，相对出峰时间和校正因子在不同仪器系统有较好的重现性，因此可作为测定杂质C的有效方法。

本文建立了盐酸去氧肾上腺素杂质C的加校正因子（f=0.50）的主成分自身对照法，为控制盐酸去氧肾上腺素中杂质C的含量提供了有效的检测方法，并为解决产品质量控制过程中杂质C对照品的不易获得性问题提供了一个可行的解决方案。

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Determination of the impurity C in phenylephrine hydrochloride by main constituent own control method with correction factor

XU Liang-liang，ZHU Xiao-lin，SU Li
（Jiangsu Ascendia Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nantong 226200，China）

Objective To establish a method for the determination of impurity C in phenylephrine hydrochloride by main constituent own control method with correction factor.Methods The assay was carried out on a C18column（4.6mm ×250 mm，5 μm）with the mobile phase of acetonitrile-0.325％sodium sulfonate solution（with phosphoric acid to adjust pH value of 2.8）（10∶90）at a flow rate of 1.5 mL·min-1.The column temperature，the detection wave length and the injection volume were set at 45℃，215 nm，and 20 μL.The relative retention time and the correction factor between impurity C and phenylephrine hydrochloride were determined.Results The linear ranges of impurity C and phenylephrine hydrochloride were 0.065 1～1.626 9 μg·mL-1，0.064 7～1.618 4 μg·mL-1，respectively.The relative retention time between impurity C and phenylephrine hydrochloride was 1.3，the correction factor between impurity C and phenylephrine hydrochloride was 0.50.Conclusion This method was simple，accurate and reliable to determine impurity C in phenylephrine hydrochloride.without standard substances.

Phenylephrine hydrochloride；Impurity C；Correction factor

R927.11

A

2095-5375（2015）12-0706-004

徐亮亮，男，主管药师，研究方向：药物制剂开发与质量研究，E-mail：XLL@assendia.cn