大黄素在结肠靶向护肠清毒微丸中的体外释放研究

马传江，孙　萍，刘乐洋

（1.山东中医药大学附属医院，山东　济南　250011；2.山东中医药大学，山东　济南　250355）

大黄素在结肠靶向护肠清毒微丸中的体外释放研究

马传江1，孙萍1，刘乐洋2

（1.山东中医药大学附属医院，山东济南250011；2.山东中医药大学，山东济南250355）

目的建立高效液相色谱法测定护肠清毒微丸中大黄素含量方法，探讨微丸中大黄素的体外释放特性。方法以甲醇-0.1％冰醋酸溶液（80∶20）为流动相，检测波长为254 nm，Phenomenex C18（4.6mm×150 mm，10 μm）为分析柱，采用恒温振荡法考察微丸中大黄素的体外释放规律。结果微丸在人工胃液的2 h中，几乎无释放；在人工肠液中5 min后可以检出，40 min内释药达到80％，至220 min几乎全部释放。结论所制备的微丸具有结肠靶向的作用。

护肠清毒；微丸；大黄素；结肠靶向；体外释放

1　试药与仪器

1.1仪器 Waters600高效液相色谱仪；高压微射流纳米均质机（美国Microfludics公司）；D800C智能药物溶出仪（天津大学无线电厂）；85B-2型磁力加热搅拌器（南通科学仪器厂）；Biofuge Stratos全能台式高速冷冻离心机（德国Heraeus公司）。

1.2试药大黄素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110756-200110）；护肠清毒微丸（自制，批号：20100314、20100316、20100318）；果胶钙（郑州郑亚化工产品有限公司）；聚丙烯酸树脂（MCC）S100型（德国Rohm公司）。

2　方法与结果

2.1微丸的制备［5］采用水煎煮提取，将药液经喷雾干燥得药粉。以低脂果胶与氯化钙制备果胶钙，超微粉碎，备用。将果胶钙、药粉和MCC按一定比例混合，加入粘合剂制成软材，经挤出-滚圆机挤出软材，高速滚圆微丸丸芯，采用聚丙烯酸树脂S100型［4］，pH 6.8～7.4，肠溶包衣材料进行包衣，既得结肠靶向控释微丸。

2.2体外释放规律考察

2.2.1试验方法分别精密称取3批微丸，以药粉制得的胶囊剂作为对照，采用恒温振荡法，于pH= 6.8的人工肠液和pH=2的人工胃液（2 h）各1 000 mL中，水浴温度（37±0.5）℃，转速100 rpm，分别于不同时间吸取溶液1 mL，经0.22 μm微孔滤膜过滤后测定含量，同时补加同体积同温度人工肠液或人工胃液，由于大黄素的水溶性较差，为增强其溶出度和检测性，在人工胃液和人工肠液中添加0.5％的十二烷基硫酸钠，以大黄素累计释放百分率计算［5］。

2.2.2色谱条件流动相：甲醇-0.1％冰醋酸溶液（80∶20），色谱柱：Phenomenex C18柱（4.6mm× 250 mm，10 μm），流速：0.8mL·min-1，检测波长：254 nm。

2.2.3溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品适量，置于50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成含大黄素77.20 μg·mL-1的溶液作为对照品储备液。

供试品溶液的制备：精密吸取释放溶液1 mL，经0.22 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

阴性对照溶液的制备：取不含大黄的处方药材，同法制备缺大黄阴性对照液。

2.2.4检测波长的选择参照《中国药典》2015年版大黄项下，选择254 nm作为检测波长。

2.2.5专属性试验取对照品、供试品和阴性对照溶液各10 μL，进行样品测定，样品与对照品在相同的保留时间内有相同的色谱峰，而阴性对照品无此色谱峰，表明测定无干扰。图谱见图1。

2.2.6标准曲线的制备分别精密量取对照品储备液0.1、0.3、0.5、1 mL于10 mL容量瓶中，再精密量取对照品储备液0.1mL至25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，进样，分别测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，线性回归后得A=76 825C +3 567.8，r=0.999 4（n=5）。大黄素在0.308 8～7.72 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好。

2.2.7精密度试验取浓度为1.00 μg·mL-1的对照品溶液，重复进样5次，结果RSD为1.63％，表明仪器精密度良好。

2.2.8稳定性试验取供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12 h进样，测定峰面积，计算RSD值为2.90％，表明样品稳定性良好。

图1　高效液相色谱法测定微丸中大黄素的含量

2.2.9重复性试验精密量取样品5份，按上述样品制备方法制备样品溶液，然后测定峰面积，RSD 为1.4％，重复性良好。

2.2.10回收率试验精密称取样品6份，依次加入对照品，按供试品溶液制备方法进行测定。每份进样10 mL。回收率范围：95.34％～104.20％，RSD 为3.28％，回收率良好，结果见表1。

表1　大黄素的加样回收率试验结果

2.3溶出度结果 检测溶出液中大黄素的含量比例，确定药品的溶出速率。以大黄素含量稳定不增加作为药物全部溶出的标准，计为100％，其他时间点的药物含量与最大含量的比值，即为药物累积释放率。结果见表2、图2。

试验结果显示，普通胶囊剂在药物释放过程中，在人工胃液（含0.5％十二烷基硫酸钠）中正常释放，80 min后全部释放。而微丸剂型，在人工胃液的2 h中，测不到大黄素含量。而将微丸转移到人工肠液中后，5 min后可以检出，40 min内释药达到80％，至220 min几乎全部释放完毕。

表2　溶出结果表

图2　护肠清毒微丸样品和胶囊样品中大黄素的溶出曲线

3　讨论

本文对自制的护肠清毒微丸中主要有效成分大黄素的体外溶出度进行了考察。试验结果表明，将中药经过提取干燥后加入果胶钙，制备成结肠靶向控释包衣微丸，因为聚丙烯酸树脂包衣材料只溶于人工肠液，在人工胃液的2 h中，检测不到药物释放。在2 h后，药物从胃排到肠道中，包衣材料在人工肠液中可以较快溶解，使丸芯暴露在溶液中。果胶钙遇水溶胀，从而形成骨架结构［6］，给药物溶出提供溶出通道。微丸中所含大黄素在人工肠液中40 min内释药可达到80％，220 min几乎全部释放，且溶出速率稳定，释药曲线平滑，具有结肠定位释放的效果。

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Study on release rate in vitro of emodion in colon targeting Huchangqingdu Pellets

MA Chuan-jiang1，SUN Ping1，LIU Le-yang2
（1.The Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250011，China；
2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China）

Objective To establish an HPLC method for the determination of emodin in Huchangqingdu Pellets，and to study its release rate in vitro.Methods HPLC method was adopted on Phenomenex C18column with the mobile phase of methanol-0.1％acetic acid（80∶20）.The detection wavelength was 254 nm.The release rule in vitro was studied by temperature oscillation.Results The pellets almost had no release in artificial gastric juice in 2 h，and can be detected after 5 minutes in artificial intestinal juice，and reached 80％of drug release in 40 minutes，and almost all of the release in 220 minutes.Conclusion The pellets had colon targeting effect.

Huchangqingdu；Pellets；Emodin；Colon targeting；Release rate in vitro护肠清毒汤由大黄、赤芍、紫草、黄芩等10味中药水煎提取而成，经临床实践证明，具有健脾清肠、化瘀解毒的功效，作用于肝病和肠源性内毒素血症疗效显著［1，2］。但传统汤剂服用量大，服用和携带不方便，且口服易在小肠部位吸收，到达结肠的药物很少，影响疗效。为使药物在结肠部位直接释药，减少服用量，增加疗效，我们将汤剂进行改造，加入果胶钙，制备结肠靶向控释微丸［3，4］，并对其主要有效成分大黄素的体外释药规律进行了探索。

R945

A

2095-5375（2015）12-0696-003

山东省中医药科技发展计划项目（No.2007-035）

马传江，男，副主任药师，研究方向：中药制剂及饮片质量标准研究，E-mail：mcj77777@126.com