衍生化GC法测定乙酰氧基丙酰氯中R型含量

兰红梅　王 伟　陈小君　怀哲明

（浙江海洲制药有限公司，浙江 台州 318000）

衍生化GC法测定乙酰氧基丙酰氯中R型含量

兰红梅王 伟陈小君怀哲明

（浙江海洲制药有限公司，浙江 台州 318000）

目的 R-乙酰氧基乙酰氯和S-乙酰氧基乙酰氯与L-α-苯甲基甲胺衍生化，形成非对映异构体产物，在GC中达到分离。方法 衍生产物在DB-FFAP 30 m×0.53 mm×1.0 µm色谱柱中分离，测定R型对映体含量。结果 在选定色谱条件下，回收率为95.8%～99.8%；精密度为3.9%；R型对映体的LOQ为0.017 ng，LOD为0.005 ng；在固定S型质量下，R型和S型峰面积比值与R型对映体的量呈良好线性关系，R=0.9995。结论 该法是测定R-乙酰氧基乙酰氯中S-乙酰氧基乙酰氯的含量的一种灵敏、准确、可靠地分析方法。

衍生化GC法；R-乙酰氧基乙酰氯；含量

S-乙酰氧基丙酰氯（CAS No. 36394-75-9）是一种医药中间体，可由三光气法合成［1］，用于合成对比剂碘帕醇等原料药，分子式C5H7ClO3，无色透明发烟液体，有强烈的刺激性气味，遇水分和醇极易分解。普通色谱法不能将R-型乙酰氧基丙酰氯和S-型乙酰氧基丙酰氯分离，而直接进样法又会对色谱系统易造成严重腐蚀性，虽然气相色谱法对酰卤类物质分析已有报道［2-3］，也有利用手性酰化试剂对胺及氨基酸拆分［4］，但对于手性拆分后定量测定乙酰氧基丙酰氯国内尚无报道。本文以L-α-苯甲基甲胺在吡啶条件下与乙酰氧基丙酰氯进行衍生化，将衍生产物采用气相色谱法分离测定，该法简单、准确、重现，是S-乙酰氧基乙酰氯中R型对映体含量测定的一种可靠的分析方法。

1　试验部分

1.1仪器和试药：FOCUS气相色谱仪（Thermo Fisher），FID检测器，Triplus自动进样器。无水吡啶、L-α-苯甲基甲胺、甲醇和二氯甲烷均为分析纯，R-乙酰氧基乙酰氯和S-乙酰氧基乙酰氯对照品均为公司自制。

1.2色谱条件。色谱柱：DB-FFAP 30 m×0.53 mm×1.0 µm；载气：高纯氮气；气化室温度：200 ℃；柱温：200 ℃；检测器温度：250 ℃；流速：2.5 mL/min；分流比：1∶5；进样量：0.5 µL。

1.3试验方法

1.3.1样品衍生化：精密量取20 µL样品至5 mL量瓶中，冰浴条件下加1 mL无水吡啶，再精密加入100 µL的L-α-苯甲基甲胺，反应趋于平稳后摇匀，静置2 h，再加入0.25 mL甲醇和1 mL二氯甲烷，摇匀。

1.3.2衍生化样品测定：精密吸取0.5 µL衍生化后的试液，进样，记录色谱图。计算R-型对映体含量。

1.3.3专属性和灵敏度：同“1.3.1”项下分别配制R-乙酰氧基乙酰氯对照品衍生化溶液和S-乙酰氧基乙酰氯对照品衍生化溶液，平行配制空白溶液，进样分析，结果在空白溶液色谱图（图1）中，R-乙酰氧基乙酰氯衍生物和S-乙酰氧基乙酰氯衍生物峰位处均无干扰峰；在样品溶液色谱图（图2）中，R-乙酰氧基乙酰氯衍生物保留时间约31 min，S-乙酰氧基乙酰氯衍生物保留时间约33 min，二者前后均无干扰峰，分离度＞1.5，以R-乙酰氧基乙酰氯衍生物计，N≥8000。

将R-乙酰氧基乙酰氯对照品衍生后试液逐步稀释，s/n=10相当于配样时所含R-乙酰氧基乙酰氯的量为0.017 ng，s/n=3相当于配样时所含R-乙酰氧基乙酰氯的量为0.005 ng。

1.3.4标准曲线和线性范围：取20.0 mL S-乙酰氧基乙酰氯对照品，分别精密加入25、50、100、250、500 µL R-乙酰氧基乙酰氯对照品，摇匀，精密量取20 µL按 “1.3.1”项下配制溶液，进样，测定。以每20 µL样品种所含R-乙酰氧基乙酰氯的量（µg）对所测得的R-乙酰氧基乙酰氯与S-乙酰氧基乙酰氯峰面积比值进行线性回归，得线性方程：Y=59237X-1.548，相关系数r=0.9998。

图1　空白溶液色谱图

图2　样品溶液色谱图

1.3.5加样回收率：取20.0 mL S-乙酰氧基乙酰氯样品，分别加入50、100、250 µL R-乙酰氧基乙酰氯对照品，摇匀，精密量取20 µL按“1.3.1”项下配制溶液，进样，测定，计算回收率，见表1。

表1　加样回收率结果

1.3.6精密度试验：同一样品平行配样并测定6次，结果见表2。

表2　精密度结果

2　小结和讨论

乙酰氧基乙酰氯和L-α-苯甲基甲胺反应剧烈，常温操作会溅出反应液甚至会爆炸，故衍生化步骤必须在冰浴条件下进行。由于本品极易挥发，整个反应过程需快速、密封。防止在空气中吸潮分解。

衍生化所用碱性试剂吡啶，必须用无水吡啶，防止其中所含水分会和本品反应。

衍生化时间需要放置2 h，以达到充分衍生的目的。试验还考察了衍生化后的溶液的稳定性，结果表明放置24 h之内仍稳定。

［1］章庆新，曾青峰，邱远星，等.三光气法合成2-乙酰氧基丙酰氯的研究［J］.广东化工，2013，40（1）:48-49.

［2］叶余原，贾文平，李芳，等.柱前衍生气相色谱法测定2-乙酰氧基异丁酰溴［J］.科学技术与工程，2007，7（10）:1671-1819.

［3］付磊，张桃芝.2，4-二氯苯氧乙酰氯的气相色谱分析［J］.分析测试学报，2003，22（6）:104-105.

［4］黄可新，马梅玉，尹承烈.L-α-三氟乙酰氧基丙酰氯对外消旋胺及氨基酸的气相色谱拆分［J］.有机化学，1995，15（2）:145-149.

O657.7+1

B

1671-8194（2015）20-0050-01