CD31、CD34在结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤的表达及其与超声造影的相关性

张红丽，姜 珏，周 琦，李 苗，雷小莹

（西安交通大学医学院第二附属医院超声研究室，陕西 西安 710004）

结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤是甲状腺良性结节中最常见的病理类型，两种疾病性质不同，治疗原则也不同，因此，对二者的鉴别诊断具有重要的临床意义。超声造影（CEUS）作为超声医学研究的热点，已广泛应用于甲状腺结节的诊断和鉴别诊断[1-3]。本研究通过回顾性分析30例结节性甲状腺肿和30例甲状腺腺瘤的CEUS特征，并与术后石蜡标本免疫组化染色结果对照，旨在提高CEUS对二者的鉴别诊断正确性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集 2010年 2月—2012年 5月在我院行CEUS并经手术切除病理证实的结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤患者各30例，男20例，女40例，年龄23～49 岁，平均（46±4.5）岁。30 例结节性甲状腺肿大小 6.9～29.8 mm，平均（17.9±4.2）mm；30 例甲状腺腺瘤大小 15.4～27.5 mm，平均（21.3±3.9）mm。

1.2 仪器和方法

采用配备有对比脉冲序列CEUS成像技术（Contrast puls sequencing，CPS） 的 Siemens Acuson Sequoia 512彩色多普勒超声诊断仪，15L8w宽频线阵探头，发射频率7 MHz，造影时机械指数0.32。造影剂使用Bracco SonoVue，使用前加入注射用生理盐水5 mL，振荡后配成微泡混悬液，造影时经肘部浅静脉团注2.4 mL，并随即推注5 mL生理盐水冲洗。造影剂注入的同时按下动态存储键及记时键，连续扫查2 min，整个成像过程的所有影像均存储于硬盘中。

1.3 图像分析

通过TomTec软件在动态图像的病灶内和周围正常实质内勾画感兴趣区（Region of interest，ROI），分析注入造影剂后的增强过程，绘制时间-强度曲线（TIC）。强度比为纵坐标，时间为横坐标，同时显示病灶与周围实质的两条TIC。TIC的参数意义如下：始增时间（Rise time，RT）是指从造影剂开始注入到最大峰值强度（Maximum intensity，IMAX）增高到50%所需要的时间，与血供类型有关；达峰时间（Time to peak，TTP）是从开始增强到造影剂最浓聚瞬间所需的时间；平均渡越时间（Mean transit time，mTT）是从开始增强至IMAX下降到一半所需的时间，与血流速度有关；IMAX是灌注过程中ROI内增强的最高水平，以周围实质的最高增强水平为100%，病灶的增强水平为与周围实质强度的百分比。

1.4 微血管密度测定

将60例患者的石蜡包埋组织以4 μm厚度连续切片，分别采用鼠抗人CD31、CD34两种单克隆抗体（购自福州迈新生物技术开发有限公司），按免疫组化SP法常规操作技术进行处理，DAB显色，苏木素复染，常规脱水、透明、封片。

微血管密度（Micro vascular density，MVD）计数参照Weidner等的计数方法，染成棕黄色的单个内皮细胞或内皮细胞簇作为一根可计数的血管，可能源于同一根血管，只是位置不同的血管内皮细胞均作为独立的血管进行计数；与邻近微血管、肿瘤细胞或其他结缔组织成分不相连、标记为棕黄色的内皮细胞或内皮细胞簇均可作为一根可计数的微血管；而管腔＞8个红细胞直径，带有较厚肌层或硬化区、肿瘤细胞稀少区及接近正常组织区域的微血管不进行计数。由2名病理医师以双盲法进行结果统计，每张切片先在100倍光镜下寻找病灶MVD最高的区域，即“热点”，然后在200倍光镜下进行微血管计数，记录5个视野内的微血管数，计算平均数，然后再取二者的平均值作为该例标本的MVD计数。

1.5 统计学分析

应用SPSS 16.0统计分析软件，所有计量资料用均数±标准差（）表示，计量资料比较采用 t检验，CEUS定量参数与MVD的相关性应用Spearman秩相关检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 CEUS增强特征及TIC参数比较

30例结节性甲状腺肿23例表现为与周围甲状腺实质等增强（图1），4例表现为高增强，3例表现为低增强，内部增强回声多均匀。30例腺瘤29例表现为高增强，1例表现为等增强（图2），以均匀增强为主（表1）。

Table 1.Comparison of CEUS in thyroid nodules

结节性甲状腺肿与甲状腺腺瘤两组比较：甲状腺腺瘤组mTT、IMAX大于结节性甲状腺肿组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；而定量参数 RT、TTP 无统计学差异（P＞0.05）（表2）。

Table 2. Comparison of CEUS quantitative parameters in nodular goiter and thyroid adenoma

2.2 CEUS定量参数与MVD的相关性

CD31、CD34两种抗体染色结果无统计学差异，甲状腺腺瘤MVD丰富（图3），结节性甲状腺肿微血管相对较少（图4），两组结节MVD比较见表3。甲状腺结节CEUS定量参数与MVD的相关性检验见表4。

Table 3. Comparison of MVD in nodular goiter and thyroid adenoma

Table 4. Relationship between CEUS characteristics and MVD of thyroid nodules

图1 结节性甲状腺肿CEUS图。左侧二维声像图示甲状腺低回声结节，边界不清，内可见强回声光点，右侧CEUS图示增强达峰时，低回声结节与周围甲状腺组织呈均匀等增强。Figure 1.Diagram of CEUS in nodular goiter.The left two-dimensional ultrasound graphic shows hypoechoic thyroid nodule,with unclear border and hyperechoic spot.The right CEUS graphic shows hypoechoic nodule and the surrounding thyroid tissue shows homogeneous iso-enhancement.

图2甲状腺腺瘤CEUS图。左侧二维声像图示甲状腺低回声结节，内部回声不均匀，右侧CEUS图示增强达峰时，低回声结节较周围甲状腺组织呈均匀高增强。Figure 2. Diagram of CEUS in thyroid adenoma.The left two-dimensional ultrasound graphic shows hypoechoic thyroid nodule with inhomogenous echo.The right CEUS graphic shows the degree of enhancement of hypoechoic nodule is higher than the surrounding thyroid tissue.

图3 结节性甲状腺肿CD34免疫组化染色。Figure 3. Nodular goiter with CD34 immunohistochemical staining.

图4 甲状腺腺瘤CD34免疫组化染色。Figure 4. Thyroid adenoma with CD34 immunohistochemical staining.

3 讨论

结节性甲状腺肿是一种良性增生性疾病，术后复发率高。甲状腺腺瘤属于肿瘤性增生，有恶变的可能，临床建议早期手术切除。两种疾病的治疗原则不同，故两者的鉴别诊断具有重要的临床意义。目前，已有不少学者对其进行了研究[4-6]，但由于二者二维和彩色多普勒声像图有一定的交叉重叠，不易鉴别。

CEUS的出现弥补了常规超声的不足，使超声评价组织微循环血流灌注成为可能。第二代声学造影剂SonoVue是一种微泡造影剂，仅停留在血管内，不进入组织间隙，被誉为真正的血池造影剂[7]，理论上可以准确地反映组织的血流灌注状态。本研究采用SonoVue和CPS技术对各30例结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤患者进行CEUS检查，研究结果发现13.3%的结节性甲状腺肿表现为高增强，76.7%表现为等增强，10.0%表现为低增强；而96.7%的甲状腺腺瘤呈高增强，多数结节周边呈环形高增强，内部增强较均匀。结节性甲状腺肿是由于缺碘等多种因素引起甲状腺组织反复增生和退缩，结节性甲状腺肿CEUS表现较复杂，增强程度不一，可能与结节处于不同的病理变化过程有关。但是结节性甲状腺肿是在原有腺体基础上反复增生修复所致，结节内部血管分布与周围甲状腺组织无明显差别，血流状态与周围正常甲状腺组织相近，CEUS表现以等增强为主。甲状腺腺瘤虽然为良性肿瘤，但其血供较丰富，镜下微血管数目较多，呈典型的富血供表现。定量参数分析结果显示，甲状腺腺瘤的mTT、IMAX大于结节性甲状腺肿，考虑与甲状腺腺瘤血供丰富，进入病灶的造影剂微泡数量较多，停留时间较长有关。

CEUS通过向外周静脉注入造影剂，增强肿瘤微血管的显示，以完成对微循环血流的评价从而达到诊断目的，提高肿瘤的检出率，微血管是其应用的病理学基础。MVD是表示血管生成活动效应的量化指标，是衡量肿瘤血管生成的金标准。本研究分别采用血管内皮标记物CD31、CD34对石蜡标本免疫组化染色，结果发现结节性甲状腺肿的MVD显著低于甲状腺腺瘤，差别具有统计学意义（P＜0.05），与本研究CEUS结果一致，与顾继英等[8]的研究结果相似。结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤的MVD不同，为鉴别甲状腺结节的性质提供了病理学依据。虽然MVD是评价肿瘤血管生成最直接的量化指标，但是MVD计数只适用于术后标本的回顾性评估，不能在术前对甲状腺结节的血流丰富程度做出评价，对临床的指导作用具有滞后性。本研究将CEUS参数与MVD进行相关性分析发现，随着结节MVD的升高，RT、TTP和mTT逐渐缩短，IMAX逐渐升高。CEUS为评价甲状腺结节的血管生成和血流动力学研究提供了新的手段。

综上所述，结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤的CEUS增强特征不一致，CEUS定量参数与MVD具有一定的相关性，有助于二者的诊断和鉴别诊断，具有重要的临床意义。

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