可逆性输卵管节育器干预大鼠子宫内膜异位症的实验研究

王哲，路芳，陈佃红，张平

·论著·

可逆性输卵管节育器干预大鼠子宫内膜异位症的实验研究

王哲，路芳，陈佃红，张平

目的：逆流法建立大鼠子宫内膜异位症（EMs）模型，观察可逆性输卵管节育器对大鼠EMs的预防作用。方法：30只大鼠随机分为3组，每组各10只，实验组逆流造模同时放置可逆性输卵管节育器，阴性对照组逆流造模，空白对照组不做处理。术后8周检测血清中抗子宫内膜抗体（EmAb）和CA125，观察组织形态学变化。结果：实验8周后3组大鼠血EmAb、CA125浓度差异有统计学意义（均P＜0.05）。阴性对照组血EmAb、CA125浓度高于空白对照组和实验组（均P＜0.05）。空白对照组无1例发病，阴性对照组8例发病，异位病灶体积（74.20±6.32）mm3，实验组1例发病，异位病灶体积为1.50mm3。结论：可逆性输卵管节育器可预防大鼠EMs的发生。

子宫内膜异位症；避孕器械；输卵管；动物实验；大鼠，Wistar；CA-125抗原Corresponding author：WANG Zhe，E-mail：jnwz63_@126.com；ZHANG Ping，E-mail:761298071@qq.com

【Abstract】Objective:To build the rat model of endometriosis by reflux method，observed the preventive effect of reversible oviduct synthetic on endometriosis in rats.Methods:The rats were divided into three groups randomly，experimental group（molding by reflux method and placement reversible oviduct synthetic），negative control group（molding by reflux method），blank control group（no processing）.Then tested EmAb and CA125 in serum，and observed the tissue morphological variations in eight weeks after operation.Results:There were difference in EmAb and CA125 in serum between three group（P＜0.05），and the negative control group was significantly higher than the experimental group and blank control group（P＜0.05）.There were also no obvious difference in histomorphology between the experimental group and the blank group.Neither of them developed endometriosis.In histomorphology observation，there is none in blank control group，8 cases in negative control group，ectopic lesions volume（74.20±6.30）mm3，1 case in experimental group，volume for the onset of ectopic lesions 1.50mm3.Conclusions: The reversible oviduct synthetic could prevent endometriosis in rats.

【Keywords】Endometriosis；Contraceptive devices；Fallopian tubes；Animal experimentation；Rats，Wistar；CA-125 antigen

（J Int Obstet Gynecol，2015，42：54-56）

子宫内膜异位症（EMs）是常见多发的妇科良性疾病，以痛经、不孕为主要表现，具有周期性发作、进行性加重、久治不愈等特点，是妇科疑难病症。该病多发生于生育期妇女，发病率呈逐年上升趋势，严重影响妇女的身心及生殖健康，目前尚无有效的预防方法。EMs发病机制复杂多样而又深奥，确切病因不明，既需宏观综合又需细致深入研究，目前较公认的学说为经血逆流学说。临床中常有引起子宫内膜逆流的操作，如液体膨宫下子宫内膜电切、纵隔切除、内膜息肉摘除、异物取出、输卵管插管等宫腔操作，腹腔镜下输卵管通液等，是否因此导致盆腔EMs有待商榷。本研究根据统计学原理及动物实验研究样本量要求设计实验，将可逆性输卵管节育器置于大鼠输卵管，阻止大鼠子宫内膜组织逆行进入盆腔，达到干预EMs的目的，为临床进一步研究EMs的发病机制奠定理论基础，对指导临床规范操作，预防医源性疾病，探寻预防EMs的方法提供依据。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物健康性成熟雌性未交配Wistar大鼠，体质量160～190 g，由山东大学动物实验中心提供。许可证号：SCXK（鲁）20090001。

1.1.2实验试剂水合氯醛，实验室自备；注射用青霉素钠，山东鲁抗医药有限公司，批号：S130401；戊酸雌二醇，拜耳医药保健有限公司广州分公司，批号：202A2。

1.2方法

1.2.1分组30只大鼠随机分为3组，每组各10只，实验组逆流造模同时放置可逆性输卵管节育器，阴性对照组逆流造模，空白对照组不作处理。3组大鼠实验前后体质量比较差异无统计学意义（均P＞0.05），见表1。

表1　3组大鼠实验前后体质量比较 （g，?s）

表1　3组大鼠实验前后体质量比较 （g，?s）

组别　n　实验前体质量　解剖前体质量空白对照组　10　170.70±10.05　350.22±10.11阴性对照组　10　172.40±10.95　353.21±10.42实验组　10　174.10±13.56　354.50±13.63 F（P）　0.214（0.809）　0.365（0.698）

1.2.2术前准备术前1 d给予造模大鼠灌服戊酸雌二醇，剂量为0.5 mg/kg，使手术时大鼠统一处于动情期。

1.2.3手术步骤以10％水合氯醛（300 mg/kg，腹腔注射）麻醉，将大鼠固定于手术板上，腹部剪毛，常规消毒，在尿道口上约1 cm处切长1.5～2 cm的纵形切口进腹。暴露双侧子宫、输卵管、卵巢，于子宫近输卵管1 cm处行5mm纵向切口，实验组沿子宫切口将可逆性输卵管节育器置于输卵管内阻塞管腔；阴性对照组不放置。然后以特制毛刷搔刮子宫内膜数周，6-0肠线缝合切口，用眼科无齿平钳夹闭子宫下段，经子宫输卵管注射2 mL生理盐水，使搔刮脱落的子宫内膜组织细胞逆行入盆腔，逐层缝合皮肤和皮下组织。术后让其自然苏醒，分笼单放，常规饲养。

1.2.4术后用药术后实验组与阴性对照组连续5 d灌服戊酸雌二醇0.1 mg/kg，腹腔注射青霉素16×104U/kg。

1.3观察指标及方法

1.3.1生化指标术后8周，抽取大鼠腹主动脉血2 mL，用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中抗子宫内膜抗体（EmAb）及CA125。

1.3.2组织形态学观察术后8周，抽血后处死大鼠，立即解剖，观察子宫、输卵管、卵巢、腹膜EMs包块情况，统计盆腔EMs病灶数目并测量最大EMs病灶体积，取下EMs病灶组织，测量EMs病灶的长度（L）与宽度（W），按公式V（mm3）=L× W2×0.5计算体积［1］。取EMs病灶组织，甲醛固定，常规制片，HE染色，在光镜下观察各部位标本组织形态学特点及差异。1.4统计学方法采用SPSS 18.0统计软件进行分析。计量资料符合正态分布的数据用均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用最小显著性差异法（LSD法）。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1生化指标比较实验8周后3组大鼠血EmAb、CA125浓度差异有统计学意义（均P＜0.05）。阴性对照组血EmAb、CA125浓度高于空白对照组和实验组（均P＜0.05），实验组与空白对照组差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表2。

表2　实验8周后各组大鼠EmAb，CA125比较 （±s）

表2　实验8周后各组大鼠EmAb，CA125比较 （±s）

组别　n　EmAb（pg/mL）　CA125（U/mL）空白对照组①　10　1 051.00±27.36　76.98±1.36阴性对照组②　10　1 175.63±26.95　86.25±1.86实验组③　10　1 051.11±33.43　77.51±2.20 F（P）　60.291（0.000）　80.133（0.000）组间比t（P）①：②　125.529（0.000）　9.276（0.000）①：③　1.012（0.939）　0.538（0.519）②：③　124.517（0.000）　8.738（0.000）

2.2组织形态学观察术后第8周，空白对照组无一例发生EMs；阴性对照组8例发病，异位病灶体积（74.20±6.32）mm3，病灶多位于卵巢、输卵管、腹膜；实验组1例发病，病灶1.50mm3，位于卵巢、输卵管。

2.3病理变化空白对照组与实验组大鼠子宫内膜上皮细胞排列完整，肌层较厚，结构完整，腺体和血管丰富。阴性对照组异位内膜的上皮细胞扁平，呈长柱状或增生呈假复层结构，大部分有分泌现象，少数可见腺体分布，肌层较薄，结构不清。见图1～3（见后插一）。

3　讨论

EMs指具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔被覆内膜及宫体肌层以外部位，以增生、浸润、转移、复发等恶性行为造成痛经、慢性盆腔痛、性交痛、月经异常、不孕等症状的疾病，是一种常见、多发、难治性妇科疾病，严重影响育龄妇女的生活、工作和生殖健康。对EMs的发病机制及中西医治疗报道甚多，是妇科学研究的热点，如何有效预防亟待深入研究。

1860年Von Rokitansky首次描述EMs的病名，1899年Russell最早提出子宫内膜的腺体可以由卵巢中残余的副中肾细胞产生这一体腔上皮化生学说，后来又出现了子宫内膜种植学说、免疫学说、干细胞分化学说、遗传学说及子宫内膜在位学说等各种假说。目前较认同的EMs发病机制包括种植学说（经血逆流、医源性种植、淋巴及静脉传播）、体腔上皮化生学说、诱导学说。

EmAb是以子宫内膜为靶抗原，并引起一系列免疫病理效应的自身抗体［2］，是临床诊断常用的生化指标，被认为是EMs标志性抗体。EMs患者中EmAb的检出率可达70％～80％［3］。CA125是肿瘤标记物之一，是一种高分子质量的糖蛋白抗原，主要来自分泌期子宫内膜，内膜细胞产生CA125的量代表细胞的活性。EMs患者在位内膜细胞产生的CA125是正常人子宫内膜细胞的2～4倍［4］。血清CA125测定对EMs有较理想的诊断价值［4-6］。CA125测定可用于监测EMs病变活动情况，若药物或手术治疗有效时CA125下降，复发时又升高［7］。检测CA125对评价EMs治疗疗效具有一定意义，CA125可作为发现EMs复发的检测指标［8］。血清CA125诊断EMs的敏感度为66.04％，特异度为 90％；EmAb诊断 EMs的敏感度为69.81％，特异度为88％；两项均为阳性的敏感度为58.49％，特异度为100.00％［9］。曾有学者经动物实验验证经血逆流学说［10］，本实验将动物在体子宫内膜逆行入盆腔制作EMs动物模型，阴性对照组的血EmAb、CA125浓度均高于空白对照组和实验组（均P＜0.05），与上述研究相符。本实验镜下病理观察3组亦有差异，经组织病理学及生化指标显示造模成功，表明输卵管节育器阻塞输卵管可阻止子宫内膜逆行，再次验证了经血逆流种植学说。

可逆性输卵管节育器对子宫内膜病理学改变不明显，具有可复性［11］；可适时放置和取出；对子宫内膜的组织病理结构无影响，放置后相对稳定，脱落率低［12］，适用范围广；可阻止炎性因子经输卵管上行感染引起盆腔腹膜炎症［13］，减轻放置后并发症。是兼具避孕、预防盆腔腹膜炎、预防EMs等多功能为一体的器械，本研究用该器械阻塞动物输卵管达到预防盆腔EMs的作用，经生化及组织病理学观察显示获得成功。因EMs发病机制具有多样性，该器具未能阻断淋巴、血液等途径，免疫因素及其他相关因素尚需进一步研究。但该器具用于生育期妇女，市场需求量大，具有广阔的应用前景，将来人体研究，利用临床上具有宫腔操作史可致内膜损伤流入腹腔致病风险的人群做定期随访深入研究其发病及病因的内在联系，无需二次损伤试验；调查有临床表现的患者经超声、腹腔镜检查即可确诊，获得研究结果及结论，对提高女性生殖健康、生活质量具有重大的临床意义。本研究探索主动预防EMs的医学方法，具有重要的临床意义。为进一步的临床研究开阔了思路，奠定了理论基础。

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Experimental Research about Reversible Oviduct Synthetic Therapy for Endometriosis in Rats

WANG Zhe，LU Fang，CHEN Tian-hong，ZHANG Ping.
Shandong University Hospital of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250011，China（WANG Zhe，ZHANG Ping）；Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250014，China（LU Fang，CHEN Tian-hong）

2014-07-07）

［本文编辑王琳］

山东省中医药科学研究项目（2010-093）

250011济南，山东中医药大学附属医院（王哲，张平）；山东中医药大学（路芳，陈佃红）

王哲，E-mail：jnwz63_@126.com；张平，E-mail:761298071@qq.com