不同产地辽细辛质量比较

吴艳蓉，王庆，孙启时

(1.沈阳市肛肠医院 药剂科，辽宁 沈阳 110002；2.辽宁泰阳医药科技开发有限公司，辽宁 本溪 117004；3.沈阳药科大学 中药学院，辽宁 沈阳 110016)

·基础研究·

不同产地辽细辛质量比较

吴艳蓉1，王庆2，孙启时3*

(1.沈阳市肛肠医院 药剂科，辽宁 沈阳 110002；2.辽宁泰阳医药科技开发有限公司，辽宁 本溪 117004；3.沈阳药科大学 中药学院，辽宁 沈阳 110016)

目的：比较不同产地中药材辽细辛的质量。方法：用水蒸气蒸馏法提取并测定挥发油的含量，GC-MS法测定挥发油中甲基丁香酚、黄樟醚和榄香脂素的相对含量，HPLC测定马兜铃酸A的含量，原子分光仪等测定药材中无机元素的含量，并用SPSS统计分析系统进行聚类分析。结果：化学试验测定与聚类分析的结果基本一致，5个产地的辽细辛药材聚为3类。结论：应把挥发性成分(挥发油总量、甲基丁香酚、榄香脂素)、有益的无机元素含量高，毒副作用成分黄樟醚、马兜铃酸A和重金属元素含量低作为评价中药材辽细辛质量的依据。将化学试验与聚类分析相结合，使结果分析更为快速、准确。

辽细辛；不同产地；质量比较；化学实验测定；聚类分析

辽细辛的主要有效成分为挥发油，挥发油中主要含甲基丁香酚、黄樟醚和榄香脂素。甲基丁香酚有麻醉和镇痛作用，黄樟醚为广谱抗菌成分，但同时有较大毒副作用，两者可作为药材细辛的品质评价指标[1]。马兜铃酸可造成严重的肾脏损害，亦是一种潜在的致癌物质[2]。细辛含有四十多种微量元素，其药理活性与微量元素的含量特征有一定的相关性[3-4]。笔者分别测定了辽细辛中挥发性成分、马兜铃酸A和无机元素的含量，并用SPSS统计分析系统进行聚类分析，用数量分类法对其质量进行评价，为辽细辛的质量控制提供参考。

1 材料与仪器

1.1 样品

辽细辛样品分别采自辽宁省桓仁县、新宾县和清原县，吉林省汪清县和富江乡，经沈阳药科大学孙启时教授鉴定为辽细辛的根及根茎，样品来源详见表1。

1.2 仪器与试剂

GCMS-QP5050A型气质联用仪、DB-1MS石英毛细管色谱柱、LC-10AT型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；Kromasil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特有限公司)；EST 210-4型电子天平(沈阳龙腾电子称量仪器有限公司)；DL_180型超声仪(35±5 KHz，180 W，浙江省象山石浦海天电子仪器厂)；万能粉碎机(10 000 r·min-1，200 W，河北省齐家务科学仪器厂)。

马兜铃酸A对照品(中国食品药品检定研究院，批号：0746-200103)；试验用水为纯净水(杭州娃哈哈集团)；乙腈(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)；环己烷(色谱纯，天津市博迪化工有限公司)。

2 方法与结果

2.1 挥发油的含量测定

辽细辛挥发油的含量测定按《中华人民共和国药典》2010版一部附录ⅩD中挥发油测定法[5]进行。各产地辽细辛的挥发油含量测定结果见表2。

表2 不同产地辽细辛的挥发油含量

2.2 甲基丁香酚、黄樟醚和榄香脂素的相对含量测定

2.2.1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；起始柱温为55 ℃，保持5 min后，10 ℃·min-1升温至260 ℃，气化室温度为270 ℃；载气为氦气；进样量为0.4 μL；分流比为10∶1；电离方式为EI；电子能量为70 eV；离子源温度为230 ℃；扫描频率为1000 amu·s-1。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密吸取2.1项下各产地挥发油1.5 μL，置于15 mL量瓶中，加入环己烷溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 精密度试验 取同一份样品溶液，重复进样5次，记录各主要共有峰的峰面积，计算相对标准偏差，RSD均小于1.6%。结果表明，仪器的精密度良好。

2.2.4 稳定性试验 取供试品溶液，分别在0、2、4、8、16 h测定，记录各主要共有峰的峰面积，计算相对标准偏差，RSD均小于2.1%。结果表明，样品在16 h内稳定。

2.2.5 重复性试验 精密量取供试品5份，分别制成供试品溶液，测定主要共有峰的峰面积，计算相对标准偏差，RSD均小于0.98%。结果表明，该方法的重复性良好。

2.2.6 样品测定 吸取供试品溶液，进样分析，经计算机检索并与标准图谱对照，鉴定出挥发油的主要组成成分，见图1。并计算相对含量，结果见表3。

1.黄樟醚；2.甲基丁香酚；3.榄香脂素。图1 辽细辛挥发油的GC-MS图谱

2.3 马兜铃酸A的含量测定

2.3.1 色谱条件 流动相为乙腈-水(40∶60)；流速为1.0 mL·min-1；柱温为30 ℃；进样量为20 μL；检测波长为390 nm。理论塔板数按马兜铃酸A峰计算不低于5000[6]。

表3 不同产地辽细辛挥发性成分GC-MS含量测定结果

2.3.2 样品含量测定 精密称取辽细辛药材粉末各1 g，加甲醇-水(3∶1)溶液25 mL，浸泡15 min，超声处理20 min，滤过，滤液再以0.45 μm微孔滤膜滤过[7]。精确吸取20 μL，注入液相色谱仪进行测定，记录马兜铃酸A的峰面积，计算出含量，结果见表4。

表4 不同产地辽细辛中马兜铃酸A的含量

2.4 无机元素含量分析

2.4.1 依据标准和使用仪器 依据标准：JY/T015-1996，DB21-617-1991；使用仪器：等离子体发射光谱仪，分光光度计。

2.4.2 样品测定 笔者委托中国科学院林业土壤研究所对五个产地的辽细辛样品进行检测，结果见表5。

表5 不同产地辽细辛中无机元素的含量

3 聚类分析

以5个不同产地辽细辛药材为分类单位，以挥发油、甲基丁香酚、黄樟醚、榄香脂素、马兜铃酸A、无机元素等24项试验数据为分类特征，进行聚类分析[8]，结果见图2。

图2 不同产地辽细辛化学成分的聚类分析结果

4 讨论

4.1辽细辛中的有效成分主要是挥发油。《中华人民共和国药典》2010版规定，本品含挥发油不得少于2.0%(mL·g-1)。甲基丁香酚、榄香脂素和黄樟醚3种物质存在于31种细辛属植物中，故可认为是中国细辛属植物挥发油的特征性成分[9]。甲基丁香酚对支气管有显著的松弛作用，其与榄香脂素有明显的麻醉镇痛作用[10]。黄樟醚虽为广谱抗霉菌的有效成分，但毒性较大，可使呼吸中枢麻痹[11]，对肝细胞损伤尤为严重，是致癌物质。由挥发油的含量测定结果可知，5个产地的辽细辛挥发油含量均达到《中华人民共和国药典》要求。就挥发性成分而言，以吉林省汪清县辽细辛的挥发油总量最高，主要有效成分甲基丁香酚含量最高，毒副作用成分黄樟醚含量最低。榄香脂素在有的产地的药材中虽有检出，但含量都很低。

4.2马兜铃酸广泛存在于马兜铃科植物中，是中药具有肾毒性的主要原因。20世纪60年代对马兜铃酸的动物实验研究结果表明，其有抗肿瘤活性和增强机体白细胞吞噬能力的作用[12]。随着对马兜铃酸和含马兜铃酸中药的进一步研究及临床应用的推广，发现其有较强的致突变、致癌作用及一些不良反应，特别是肾毒性[13]。笔者对5个产地的辽细辛样品进行马兜铃酸A含量检测，结果显示辽宁清原的药材样品中未检出马兜铃酸A，辽宁桓仁产辽细辛中马兜铃酸A的含量较高。

4.3现代药理实验证明，辽细辛具有解热、镇痛、抗炎以及较强的心血管系统作用。将辽细辛的药理活性与其道地药材中含量较高的几种微量元素的生理活性进行比较，可初步推测辽细辛的某些药理作用可能与其中几种微量元素的含量有关[4]。

4.4应把挥发性成分(挥发油总量、甲基丁香酚、榄香脂素)和有益的无机元素含量高，毒副作用成分黄樟醚、马兜铃酸A和重金属元素含量低作为评价中药材辽细辛质量的依据。

4.5聚类分析结果显示，5个产地的辽细辛聚为3类。产地3、4、5为第一类，产地1为为第二类，产地2为第三类。化学试验的结果显示，第一类样品的挥发油、甲基丁香酚以及某些有益微量元素的含量相对较高，毒性及不良反应成分黄樟醚、马兜铃酸A的含量很低或没有，质量相对较好。聚类分析的结果与化学分析数据基本吻合，因此，以化学试验与聚类分析相结合的方式获得中药材的质量分析结果，可为中药材质量控制提供更为科学准确的参考依据。

[1] 周长征，杨春澍，马长华，等.气相色谱法测定细辛挥发油中甲基丁香酚和黄樟醚的含量[J].中国药学杂志，1999，34(12)：836-839.

[2] 关文秋，李晓蒙，肖佳尚.可逆高效液相色谱法测定细辛药材及其制剂中马兜铃酸的含量[J].中国药物与临床，2005，5(4)：283-285.

[3] 米秋雯，杨春澍.细辛属植物金属元素的研究[J].中国药学杂志，1989，24(12)：712-717.

[4] 周长征，李银，杨春澍.细辛道地药材与微量元素[J].中草药，2000，31(4)：292-295.

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Quality Comparison ofAsarumheterotropoidesvar.mandshuricumfromdifferentproducingplaces

WU Yanrong1，WANG Qing2，SUN Qishi3*

(1.Pharmacy Department，Shenyang ColoproctologicalHospital，Shenyang 110002，China；2.Liaoning Tai yang Pharmaceutical Technology Development Co.，Ltd.，Benxi 117004，China；3.School of Traditional Chinese Materia Medica，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China)

Objective：To compare the quality ofAsarumheterotropoidesFr.Schmidt var.mandshuricum(Maxim.)Kitag.produced in different places.Methods：Steam distillation was used to extract and determine the content of the essential oil.The relative content of methyleugenol，safrole and elenicin was determined by GC-MS.Aristolochic acid A was determined by HPLC.The content of inorganic elements was determined by atomic absorption spectrometer.Fuzzy cluster was used to analyze the results by SPSS.Results：Chemical experiment results and cluster analysis results were basically accordant.The medicinal materials from five places were divided into three categories.Conclusion：The high content of the volatile components(total essectial oils，methyleugenol，and elemicin)and inorganic element，and low content of the harmful safrole，aristolochic acid A and heavy metal elements should be used for quality evaluation ofA.heterotropoidesvar.mandshuricum.The analytical chemistry experiment combined with cluster analysis of the results is more rapid and accurate.

AsarumheterotropoidesFr.Schmidt var.mandshuricum(Maxim.)Kitag.；different produced places；comparison of quality；chemical experiment analysis；cluster analysis

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.2.007

2014-07-22)

*

孙启时，男，教授，博士生导师，研究方向：中药资源开发和利用；E-mail：sunqishi@sina.com