不同粘结剂对烤瓷冠边缘致龋菌定植变化的影响研究

茹菲亚.祖拉提,张蕾,排黑尔丁.凯赛尔,阿丽娜.阿布都吉力力,马慧,康雯

.齿科美容.

不同粘结剂对烤瓷冠边缘致龋菌定植变化的影响研究

茹菲亚.祖拉提,张蕾,排黑尔丁.凯赛尔,阿丽娜.阿布都吉力力,马慧,康雯

(新疆医科大学第一附属医院口腔修复科新疆乌鲁木齐830054)

目的:研究不同粘结剂、不同民族对烤瓷冠修复前后不同时期冠边缘龈上菌斑中变形链球菌的定植变化影响.方法:随机选择下颌第一磨牙行钯银合金烤瓷冠修复的维吾尔族、汉族患者30例,根据使用粘结剂的不同分为两组,采用荧光定量聚合酶链反应测定冠修复前后的变形链球菌定量值,并观察其菌斑指数.结果:修复后,两组的菌斑指数均较修复前明显升高(P<0.05);与修复前比较,玻璃离子粘结剂组1、3个月的变形链球菌相对定量值减小(P<0.05),聚羧酸锌粘结剂组1、3个月的变形链球菌相对定量值增加(P<0.05);同组之间,维吾尔族患者的变形链球菌的相对定量值高于汉族患者(P<0.05).结论:玻璃离子粘结剂可能可以降低修复体基牙的致龋风险;冠修复后的维吾尔族患者较汉族患者易患龋病.

粘结剂;烤瓷冠;变形链球菌;荧光定量聚合酶链反应

烤瓷熔附金属全冠于20世纪50年代在美国首次用于临床,取得了很好的修复效果,后在世界范围内不断推广[1],近年来在我国已经成为临床上最常用的修复体之一.研究表明,修复体材料的不同对基牙牙体及牙周组织的影响不同[2-3],就致龋性来说,目前国内外的研究集中于修复体材料的不同对牙体组织边缘微渗漏影响的研究[4-5].本实验旨在研究不同粘结剂材料对修复体周围的微生物学影响.实时荧光定量PCR是目前比较常用的定量检测技术,具有较强的特异性和灵敏度.本研究用此技术检测玻璃离子粘结剂和聚羧酸锌粘结剂及不同民族对烤瓷冠边缘龈上菌斑中变形链球菌的定植变化影响,以了解这种粘结剂对烤瓷冠基牙患龋的影响.

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1细菌菌种:变形链球菌ATCC25175由武汉大学口腔医学院实验室提供.

1.1.2主要试剂与仪器:而至富士Ⅰ(而至齿科有限公司),聚羧酸锌水门汀(日本株式会社松风SH0FU INC),钯银合金烤瓷冠(东莞定远陶齿制品有限公司),细菌基因组DNA提取试剂盒(天根生化科技有限公司,北京),2*TaqPCR MasterMix(天根生化科技有限公司,北京),琼脂糖(Biowest,Hongkong),Maxima SYBR Green qPCR Master Mix(Thermo,American),PCR仪(Bio-Rad,美国),荧光定量PCR仪(Bio-Rad,美国),凝胶成像及分析(Bio-Rad,美国).

1.1.3引物:根据相关文献设计引物及细菌通用引物[6],引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成(见表1).

1.2研究对象

1.2.1病例来源:收集2013年12月-2014年2月就诊于新疆医科大学第一附属医院口腔修复科,下颌第一磨牙要求行冠修复的维吾尔族、汉族门诊患者,从中随机选择行钯银合金烤瓷冠修复的维吾尔族,汉族患者30例,向患者讲明试验目的及过程,并得到患者的同意.采用自身前后对照,将患者备牙前的受试牙设为对照组,冠修复后的受试牙设为试验组.

受试者纳入标准:患者无烟酒嗜好,无长期接触有毒有害物质史,无口腔慢性疾病及全身疾病,身体状况良好,口内无溃疡,无全冠修复禁忌证;修复前3个月及修复过程中未服用抗生素类药物、激素类药物,未进行放化疗;患牙排列正常,无扭转,无颊舌侧倾斜、伸长;基牙牙周健康,无松动、叩痛,牙龈色泽正常,探诊无出血.

受试者排除标准:实验前3个月或实验过程中,患呼吸系统疾病者或口腔软硬组织疾病者,全身系统性疾病者;妊娠期妇女;无合作意愿的患者;其他一切修复治疗的禁忌证.

1.2.3临床分组:根据粘结剂的选择不同,将研究对象随机编入玻璃离子粘结剂组和聚羧酸锌粘结剂组.

1.3方法

1.3.1菌斑指数检查:观察基牙修复前、修复后1个月及修复后3个月时冠边缘菌斑附着情况,并进行菌斑指数评分及记录,记分标准[7]:0=龈缘区无菌斑;1=龈缘区的牙面有薄的菌斑,但视诊不易见,若用探针尖的侧面可刮出菌斑;2=在龈缘或邻面可见中等量菌斑;3=在龈沟内或龈缘区及邻面有大量软垢.由同一名医生检查并记录患牙的PLI.

1.3.2临床样本采集:初诊时患者均进行牙周基础治疗,以去除牙石.受试牙牙体预备前,嘱患者用清水漱口1min,以去除口内残余的食物残渣,采集部位以棉卷隔湿,取样时受试牙用无菌牙签刮除舌侧边缘龈上菌斑,受试牙牙体预备均由同一位医师完成,舌侧均制备成龈上肩台;修复后1、3个月的样本采集部位均为烤瓷冠舌侧边缘与牙体组织接合处.冠粘结前均行严格抛光,以确保一定的光滑度.将采集完成的菌斑样本立即置入含1mlPBS的EP管内,冰浴下转送实验室并于-20℃冰箱内冻存备用.为了保证实验的准确性,烤瓷冠粘结材料的选择与调拌,烤瓷冠粘结的临床操作,实验室部分的操作均由不同的技术人员完成.

1.3.3标准菌株:将变形链球菌ATCC25175菌株37℃厌氧复苏48h,各自挑选1个单菌落行次代培养(牛心脑液培养基),厌氧条件下(37℃,24h)用生理盐水分别洗菌,用于DNA提取.

1.3.4DNA的制备:牙菌斑样本、变形链球菌的DNA提取方法均参照细菌基因组DNA提取试剂盒的操作步骤进行,提取的DNA用核算定量仪检测纯度, D260/D280比值为1.7～1.9.-20℃保存备用.在对临床样本进行定量检测前的短期时间内,需将所有样本DNA用无菌dd水稀释至同一个浓度,将稀释后的样本DNA用于定量PCR反应.

1.3.5标准品的制备:将提取备用的变形链球菌DNA用无菌水连续5倍稀释,共稀释7个梯度,即:101、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5,10-6、10-7,备用.

1.3.6 Real-time PCR的定量检测:用备好的标准品,进行变形链球菌及内参基因标准曲线的制备.将稀释后的样本DNA进行定量检测并得到CT值.总反应体系为20μL:细菌标准品或样本DNA 2μL,上、下游引物各0.5μL,SYBR mixture 10ml,灭菌ddH20 7μL.循环参数:95℃10min;95℃15s; 60℃30s;72℃30s,进行39个循环.所有反应在荧光定量PCR仪(Bio-Rad,美国)上进行,每个样本检测均设副管,取其平均值,每次反应均设空白对照.

1.4统计学方法

运用Microsoft Excel软件对玻璃离子粘结剂组与聚羧酸锌粘结剂组修复前后变形链球菌的相对定量值进行线性回归分析,检验水准α=0.05.对每个患者修复前后的菌斑指数做方差分析.

2　结果

2.1统计结果

比较两组修复前与修复后1、3个月的菌斑指数(见表2),差异有统计学意义(P<0.05);与修复前比较,玻璃离子粘结剂组1、3个月的变形链球菌相对定量值减小(P<0.05),聚羧酸锌粘结剂组1、3个月的变形链球菌相对定量值增加(P<0.05);同组中,维吾尔族患者修复前后变形链球菌相对定量值高于汉族患者(P<0.05),见表4.

2.2变形链球菌及内参基因的标准曲线标曲图

本实验通过对引物及反应条件的不断优化,使得变形链球菌及内参基因的扩增效率基本达到一致,可以用相对标准曲线法对样本中变形链球菌的表达进行相对定量分析(如图1～2).

2.3临床样本real-time PCR结果检验

将样本进行实时荧光定量检测之后行电泳试验,电泳图显示产物均为单一亮带,未见引物二聚体(如图3～4).

图1　变形链球菌标准曲线图

图2　内参基因标准曲线图

图3　样本变形链球菌q-PCR产物电泳图

图4　样本内参基因q-PCR产物电泳图

表1　引物序列表

表2　菌斑指数(±s)

表2　菌斑指数(±s)

注:与修复前比较,玻璃离子组与聚羧酸锌组修复后菌斑指数均明显升高(P<0.05)

组别玻璃离子组聚羧酸锌组例数15 15 0个月0.81±0.65 0.87±0.84 1个月1.62±0.72 1.63±0.81 3个月1.50±0.73 1.56±0.96

3　讨论

为研究烤瓷冠粘结剂的防龋性能,在众多致龋菌中,我们选择变形链球菌作为研究重点,是由于它在致龋菌群中显现出的特性及代表性.目前关于变形链球菌的研究有很多,实验表明,变形链球菌是主要致龋菌,它对牙体表面的黏附,是形成牙菌斑及致龋的关键.它能以蔗糖为底物合成胞外葡聚糖和果聚糖,它们参与牙菌斑生物膜基质的形成,促进菌斑成熟,延长产酸时间,以增加变形链球菌的致龋性[8].

表3　玻璃离子粘结剂与聚羧酸锌粘结剂组冠修复后S.mutans相对定量结果(±s)

表3　玻璃离子粘结剂与聚羧酸锌粘结剂组冠修复后S.mutans相对定量结果(±s)

注:与修复前比较,玻璃离子粘结剂组1、3个月的变形链球菌相对定量值减小(P<0.05),聚羧酸锌粘结剂组1个月、3个月的变形链球菌相对定量值增加(P<0.05)

粘结剂种类玻璃离子粘结剂聚羧酸锌粘结剂修复后1个月0 . 7 0 ± 0 . 1 9 1 . 4 0 ± 0 . 1 5修复后3个月0 . 5 0 ± 0 . 2 3 2 . 2 3 ± 0 . 4 5

表4　维吾尔族、汉族患者冠修复后S.mutans相对定量结果(±s)

表4　维吾尔族、汉族患者冠修复后S.mutans相对定量结果(±s)

注:A组为玻璃离子组,B组为聚羧酸锌组.同组中比较,维吾尔族患者冠修复后1、3个月的变形链球菌相对定量值高于汉族患者(P<0.05)

组别A组B组民族维吾尔族汉族维吾尔族汉族修复后1个月0 . 6 4 ± 0 . 2 0 0 . 7 6 ± 0 . 1 8 1 . 4 4 ± 0 . 1 0 1 . 3 6 ± 0 . 2 0修复后3个月0 . 4 1 ± 0 . 2 2 0 . 5 8 ± 0 . 2 3 2 . 3 4 ± 0 . 3 5 2 . 1 1 ± 0 . 6 2

口内修复体与预备后的基牙牙体组织间存在一定的间隙,此间隙内易积存唾液及食物残渣,影响修复体固位,造成修复体松动、脱落及腐蚀变质,使用粘结剂材料粘结,则可以有效减少边缘微渗漏,从而避免对修复体的不良影响[9].玻璃离子水门汀与聚羧酸锌水门汀是目前临床上较常用的两种烤瓷冠粘结剂.玻璃离子粘结剂可以释放阳离子和氟离子,完全凝固时是由被离子桥交联的聚阴离子基质中的硅凝胶包裹玻璃粉而形成的复合物,在基质内是含有氟化物晶体的硅凝胶小颗粒,从而具有抑菌和杀菌作用.本研究结果显示,与修复前比较,玻璃离子粘结剂组的变形链球菌在修复后1、3个月的相对定量值呈减小趋势,聚羧酸锌粘结剂组呈增加趋势,此结果可能表示玻璃离子粘固剂可以抑制菌斑中致龋菌的聚集,降低基牙的致龋风险.在冠内修复体的相关研究中,研究者们曾得到相似的结论.贺玺、李江等[10]研究了3种不同粘结剂对修复体冠边缘的微渗漏影响,结果显示,玻璃离子粘固剂的修复冠边缘抗微渗漏能力要优于聚羧酸锌粘固剂,导致龋病及其他不良的牙体牙周病变的可能性相对较低.Christian Apela等[11]的研究显示,将含有抗菌基质的物质加入修复材料中,可以有效的在初始阶段将龋病、牙周病及其他疾病的发生控制在最小范围内.因此,在对待不同的临床患者时,医师可以有预防性的选择,如对于龋敏感性较高,或者对侧同名牙已患龋的患者,可以优先考虑玻璃离子粘结剂进行粘冠.

健康的牙龈呈淡粉色,是修复体美观的重要组成部分,牙龈与烤瓷冠的颜色形态同等重要,是产生良好的美观效果的重要条件[12].然而,口腔内烤瓷冠修复治疗之后,基牙患牙龈炎的发生率很高. Taiji 0gawa等[13]研究表明,口腔内修复体的存在,为细菌微生物的粘附与聚集及菌斑形成提供了生存的温床,并且为龋病的发生提供了潜在的内环境.修复体粘结后,龈上边缘的缝隙由粘结剂填满,菌斑即可以在此处形成.还有研究者认为,表面粗糙度对菌斑的集聚作用最大,表面粗糙度越大,微生物的黏附量越大[14].菌斑指数为临床上较常用且能综合准确判断牙周病的重要指标,本研究的菌斑指数检查结果显示,与冠修复前相比较,冠修复后的菌斑指数均明显升高.孔亚阁者[15]通过烤瓷冠修复前后牙周指标的变化及龈沟液的炎症介质水平的研究,得出冠修复后6个月的牙周指标都要明显高于修复前,与本实验结果一致.冠修复后,修复体表面很容易有细菌聚集,菌斑形成,因此,在冠戴入后要重视口腔卫生保健,可以有效预防继发龋和牙龈炎的发生.

新疆是一个多民族聚居的具有民族特色的地域,乌鲁木齐的主要组成民族为汉族和维吾尔族,两个民族在生活习俗和饮食习惯上有很大的不同.本研究结果示,冠修复前后维吾尔族患者较汉族患者的菌斑中变形链球菌定植为多,即患龋风险要高于汉族.这应该与不同民族饮食习惯的差异是密切相关的,维吾尔族的饮食主要以牛羊肉为主,烹饪方式以煮、烤为主[16],营养摄入量较均衡;汉族主要以蔬菜为主,食肉较少.除了与饮食习惯相关,还与口腔保健意识,口腔卫生习惯等因素有关.

有研究显示,在烤瓷冠修复中,患者的口腔卫生保健起着举足轻重的作用[17].因此,在行烤瓷冠修复后,需要非常重视修复体和牙周组织的健康,养成良好的口腔卫生习惯,按时复诊,与口腔医师一同关注修复后的口腔维护,预防牙体牙周疾病的发生.

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编辑/何志斌

Study on different cements impacting on the changes of caries bacteria colonized on the edge of PFM crown

Rufiya.Zulati,ZHANG Lei,Paiheirdin.Kaiyser,Alina.Abdujilil,MA Hui,KANG Wen
(Department of Prosthodontics,The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University,Urumqi 830054,Xinjiang,China)

ObjectiveTo determine the different cements that impact on the changes of caries bacteria colonized on the edge of PFM crown before and after restoration for different nationalities. Methods Randomly select thirty Han and Uygur nationality patients whose mandibular first molar palladium needs to be repaired by the silver alloy PFM crown.And then,the patients are divided into two groups according to the different cements used in the repair.We measured the quantitative values of streptococcus mutans before and after restoration by using quantitative fluorescence of polymerase chain reaction.Simultaneously,we observed the plaque indices in repairing process. Results The PLI of the two groups were significantly increased compared with the PLI before repair (P<0.05).The quantitative value of S.mutans in Glass-ion cement group after restoration in one and three months decreased compared with the value before restoration(P<0.05).And the quantitative value increased in polycarboxylic cements group compared with the value before restoration(P<0.05). Although in the same group,the quantity of S.mutans of Uygur nationality patients was higher than Han nationality patients(P<0.05).ConclusionGlass-ion cement may be able to reduce the caries risk of repaired-abutment teeth,the Uygur nationality patients are more likely to suffer tooth decay than Han nationality patients.

cements;PFM;S.mutans;Poly-merace Chain Reaction

R783

A

1008-6455(2015)06-0056-05

新疆医科大学第一附属医院院级青年科研专项基金(项目基金号:2012QN03)

迪丽努尔.阿吉,副教授,硕士生导师;研究方向:口腔修复学;E-mail:dili106@hotmail.com

2014-12-20

2015-01-16