HPLC法测定益气养阴合剂中厚朴酚和厚朴酚和延胡索乙素的含量

刘传统 祁红

摘要：目的 建立测定益气养阴合剂中厚朴酚、和厚朴酚和延胡索乙素含量的方法。方法 采用高效液相色谱法.色谱柱为HypersiIODS2（150 mm×4.6 mm，5μm），流动相分别为甲醇：水（75：45，v/v）、甲醇-0. 1010磷酸溶液（用三乙胺调至6.0）（55：45 .V/V），流速为1.0mL/min.检测波长为294 nm，280 nm。结果 厚朴酚、和厚朴酚和延胡索乙素的的进样量分别在0.208～0. 624μg，0.272～0.816μg，0.212～0.636μg范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系（r分别为0.9999、0.9998、0.9998）；二者精密度、稳定性、重复性试验的RSD <2%；平均加样回收率分别为98.26%（ RSD=0.55%，n=9），98. 18%RSD=0.80%，n=9），98.47%（ RSD =0.75%，n=9）。结论该方法简单、准确、重复性好，可用于益气养阴合剂的质量控制，.

关键词：益气养阴合剂；厚朴酚和厚朴酚；延胡索乙素；高效液相色谱法；含量测定

中图分类号：R284

文献标志码：A

文章编号：1007 - 2349（ 2015） 01 - 0059 - 03盏气养阴合剂处方源于本院中医的临床有效经验方，由黄先，人参，黄精，枸杞子，女贞子，车前子（包），菟丝子，延胡索，乳香，没药，姜厚朴，甘草，粉丹皮等中药组成，临床上主要JH下治疗带状疱疹神经痛后遗症。为控制产品质量，确保临床疗效，采Hj高效液相色谱法对主要药味姜厚朴的主要成分厚朴酚、和厚朴酚的含量进行含量测定，对主要药味延胡索的主要成分延胡索乙素的含量进行含量测定。1 材料1.1 仪器岛津LC - 10AT高效液相色谱仪，SPD - 10Avp紫外检测器，CLASS - VP色谱T作站。Meter AE240电子天平。1.2 药品与试剂 益气养阴合剂（自制，批号：140122、140214，140220）；厚朴酚（中国药品生物制品检定研究院，批号：110729 - 200412，供含量测定用用）；和厚朴酚（中国药品生物制品检定研究院，批号：110730 - 201313，供含量测定用）；延胡索乙素（中国药品生物制品检定研究院，批号：110726 - 201112，供含量测定用）甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。2方法与结果2.1 厚朴酚、和厚朴酚的含量测定2.1.1 色谱条件[1]色谱柱：大连依利特Hypf：rs11ODS2（ 150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇：水（75：25，v/v）；流速：1.0mL/ min；检测波长：294 nm；柱温：35℃；进样最：对照品10 μL，供试品10μL。理论塔板数按厚朴酚汁算心小低于5000。2.1.2供试品溶液的制备取本品10 mL，用稀乙醇溶液稀释至25 mL，离心，取上清液，置棕色量瓶中，即得。2.1.3对照品溶液的制备 取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含厚朴酚54.4 vg的溶液，含和厚朴酚41.6 Vg的溶液，即得。2.1.4缺姜厚朴阴性对照溶液的制备 取本处方中缺姜厚朴的其余药材，按本品制法制成阴牲样品，再按“2.1.2”项下.的方法制备缺姜厚朴的阴性对照溶液。2.1.5线性关系考察精密吸取厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液5、8、10、12、15μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进样测定，记录峰面积。以厚朴酚、和厚朴酚的进样量（x）为横坐标，峰面积积分值（y）为纵坐标，进行线性回归，得和厚朴酚回归方程为y= 2178123x+ 22078. 39（r=0.9999）。结果表明，和厚朴酚的进样量在0.208～0.624μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系。得厚朴酚回归方程为y= 2066916x+ 2525. 511（r=0. 9998）。结果表明，厚朴酚的进样量在0.272～0.816 μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系。2.1.6精密度试验精密吸取厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液10 μL，重复进样5次，按上述色谱条件测定，记录峰面积。结果显示，RSD=1.27%（n=6），表明仪器精密度良好。2.1.7稳定性试验取同一供试品溶液适量，分别于0，l，2，4，8，2.1.9加样回收率试验精密量取已知含量的同一批样品适量，分别精密加入厚朴酚、和厚朴酚对照品，按”2.1.2”项下方法制备供试品溶液，再按上述色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果见表1.12，24 h按上述色谱条件进样测定，记录峰面积。结果显示.RSD=1.45%（n=7），表明供试品溶液24 h内稳定性良好。2.1.8重复性试验 取同一批样品适量，共6份，分别按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，再按上述色谱条件进样测定，记录峰面积，以外标法计算样品中厚朴酚、和厚朴酚的含量。结果显示，每1mL样品平均含和厚朴酚0.0624 mg，厚朴酚0.143 mg，RSD=1.34% （n =6），表明本方法重复性良好。2.1.9空白试验取阴性样品溶液10 mL，按2.1.2项下进行测定，结果缺姜厚朴的阴性样品溶液在厚朴酚、和厚朴酚对照品色谱峰相同保留时间处未显色谱峰，表明：阴性样品没有干扰（见图1）。2.1.10样品含量测定 取3批益气养阴合剂各适量，分别按“2. 12”项下制备供试品溶液，冉按上述色谱条件进样测定记录峰面积，以外标法计算样品中厚朴酚、和厚朴酚的含量，每批样品平行测定3次，结果见表2.色谱图见图1.2.2延胡索乙素的含量测定2.2.1 色谱条件[2]色谱柱：大连依利特Hypersi10DS2（150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇：0.1%磷酸溶液（用三乙胺调PH至6.0）（55：45，v/v）；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：35℃；进样量：10μL。理论塔板数按延胡索乙素计算应不低于6000。2.2.2供试品溶液的制备取本品10 mL，加甲醇溶液至25 mL稀释，离心，取上清液，置棕色量瓶中，即得。2.2.3对照品溶液的制备取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含42.4μg的溶液，即得。2.2.4缺延胡索阴性对照溶液的制备取本处方中缺延胡索的其余药材，按本品制法制成阴性样品，再按“2.2.2”项下的方法制备缺延胡索的阴性对照溶液。2.2.5线性关系考察精密吸取延胡索乙素对照品溶液5、8、10、12、15μL，，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进样测定，记录峰面积。以延胡索乙素的进样量（x）为横坐标，峰面积积分值（y）为纵坐标，进行线性同归，得同归方程为Y=889408. 3x+ 10557. 46（r=0.9998）。结果表明，延胡索乙素的进样量在0. 212～0.636μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系。2.2.6精密度试验 精密吸取延胡索乙素对照品溶液10μL，重复进样6次，按上述色谱条件测定，记录峰丽积。结果显示，RSD=1.17（n=6），表明仪器精密度良好。2.2.7稳定性试验取同一供试品溶液适量，分别于0，2，4，6，8，10，12 h按上述色谱条件进样测定，记录峰面积。结果显示，RSD=1.45%（n=7），表明供试品溶液12 h内稳定性良好。2.2.8重复性试验 取同一批样品适量，共6份，分别按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，冉按上述色谱条件进样测定，记录峰面积，以外标法计算样品中延胡索乙素的含量，结果显示，每1mL样品平均含延胡索乙素0.089 mg，RSD=1.23%（n=6），表明本方法重复性良好。2.2.9空白试验取阴性样品溶液10 ml，按2.2.2项F进行测定，结果缺延胡索的阴性样品溶液在延胡索乙素对照品色谱峰相同保留时间处未显色谱峰，表明：阴性样品没有干扰（见图2）。2.2. 10加样回收率试验 精密量取已知含量的同一批样品适量，分别精密加入延胡索乙素对照品，按”2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按上述色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果见表1.2.2. 11样品含量测定取3批益气养阴合剂各适量，分别按“2.2.2”项下制备供试品溶液，再按上述色谱条件进样测定记录峰面积，以外标法计算样品中延胡索乙素的含量，每批样品平行测定3次，结果见表2.色谱图见图2.3讨论

笔者在本质量控制中建立了厚朴酚、和厚朴酚的含量测定方法。在流动相的选择中，笔者比较了甲醇一水（ 75：25.v/v）与乙腈一水（45：55，v/v）的分离效果，结果表明后者分离度不符合要求，而后者对应的咖啡酸保留试剂与分离度均符合要求。故选择甲醇一水（75：25，v/v）为流动相，笔者为测定延胡索中延胡索乙素含量，在流动相选择中，比较了甲醇：0.1%磷酸溶液（用三乙胺调PH至6.0）（55：45，v/v）、乙腈-0. 6%冰醋酸溶液（用三乙胺调PH至6.0）（41：59，v/v），结果表明后分离度不符合要求，而甲醇：0.1%磷酸溶液系统分离效果好，故选择甲醇：0.1%磷酸溶液（用三乙胺调PH至6. 0） （55：45，v/v）为流动相，

综上所述，本方法简单、准确、重复性好，可用于益气养阴合剂的质量控制。参考文献：[I]国家药典委员会.中华人民共和国药典[s]（一部）.中国医药科 技出版礼，2010：1235.[2]国家药典委员会，中华人民共和国药典[S]（一部）中国医药科 技出版社，2010：882.（收稿日期：2014-08-12）