干扰素诱导蛋白10在结核性脑膜炎诊断中的应用

杨红 杨建蓉 陈碧桃 李明琴

（甘孜藏族自治州人民医院传染病院，四川 康定626000）

结核性脑膜炎（Tuberculous Meningitis，TBM）是肺外结核中最常见的临床类型之一，死亡率和致残率较高。近年来，利用结核杆菌特有抗原在体外刺激外周血细胞以检测T细胞应答可作为结核分支杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）感染的诊断方法迅速发展，在国外已广泛应用［1～3］。另外有文献报道，干扰素诱导蛋白10 （interferon－inducible protein 10，IP－10）可作为一项新的指标用于结核性胸膜炎等的临床诊断［4，5］。本研究通过ELISA法测定脑脊液中IP－10的浓度，并与IFN－γ的检测结果相比较，探讨其在结核性脑膜炎诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象 病例为2009年8月～2013年6月甘孜州人民医院传染病院收治的脑膜炎患者64例，其中结核性脑膜炎患者32例（结脑组），男19例，女13例，年龄21岁～64岁，平均年龄41.6岁，均符合结核性脑膜炎诊断标准［6］，患者均经抗结核治疗有好转或痊愈。非结核性脑膜炎患者32例（非结脑组）：其中化脓性脑膜炎15例，男9例，女6例，年龄21～62岁，平均年龄39.2岁，患者均经抗生素治疗均痊愈出院；病毒性脑膜炎17例，男10例，女7例，年龄23～67岁，平均年龄43.5岁，患者经抗病毒药物治疗后均痊愈出院。所有诊断建立在病史、脑脊液检查（细胞学、生化、微生物学）、头颅CT及治疗效果的基础上。

1.2 方法 治疗前采集脑脊液样品，2500r／min离心5min，留取上清液5ml，－70℃冻存待测。采用ELISA法检测受试者IP－10和IFN－γ浓度，测定过程严格按照产品说明书进行操作。试剂盒均为美国Cloud－Clone Corp公司产品。

1.3 统计学分析 数据以均数±标准差（±s）表示，由SPSS 17.0软件分析处理。应用t检验进行统计学分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 脑膜炎患者IP－10、IFN－γ水平的比较 结核性脑膜炎组中IP－10和IFN－γ的水平分别为（1164.06±450.23）pg／ml和（469.10±208.57）pg／ml，均显著高于非结核性脑膜炎组IP－10和IFN－γ的水平（237.02±161.37）pg／ml和 （90.77±61.40）pg／ml（P＜0.001），见表1。

表1 两组患者脑脊液中IP－10和IFN－γ含量测定结果Table 1 Levels of IP－10and IFN－γin cerebrospinal fluid

2.2 IP－10、IFN－γ诊断结核性脑膜炎的 ROC曲线分析 以敏感性为纵坐标、1－特异性为横坐标绘制IP－10和IFN－γ的ROC曲线（见图1）。SPSS 17.0计算IP－10的曲线下面积P＜0.001、95%CI＝0.839～1.000，IFN－γ的曲线下面积P＜0.001、95%CI＝0.925～1.000，IP－10与IFN－γ 的 ROC 曲 线 下 面 积 分别 为0.932和0.968，提示IP－10与IFN－γ对结核性脑膜炎的诊断效能相近，且两者可信区间均不包括0.5，表明都对结核性脑膜炎有一定诊断价值。从ROC曲线得出IP－10和IFN－γ的诊断临界值分别为605.63pg／ml和177.48pg／ml；取临界值时，两者诊断结核性脑膜炎的敏感性分别为87.5%和93.8%，特异性分别为96.9%和90.6%。

3 讨论

结核性脑膜炎是结核病死亡的最主要原因之一。现在对于结核性脑膜炎的诊断仍依赖于脑脊液常规、生化结果结合典型的亚急性起病，有头痛、呕吐、发热、脑膜刺激征阳性等临床表现，缺乏高敏感性、高特异性的早期诊断检测方法。欧美各国将早期分泌抗原靶－6（ESAT－6）和培养滤液蛋白10（CEP－10）两个蛋白作为特异性刺激抗原体外检测IFN－γ释放水平诊断结核疾病已在临床上得到广泛应用［7］。

IP－10属于趋化因子中CXC亚家族，又称为CXCL10，可趋化单核细胞、T细胞和NK细胞等多种特异表达CXCR3受体的炎性细胞进入炎症部位，进而介导Th1型炎症疾病［8］。IP－10与冠心病、免疫性肝病等Th1型炎症疾病关系密切。在抗结核免疫中，Th1型免疫应答占优势，有研究表明肺结核患者血浆中IP－10的水平显著高于健康对照［9］。

图1 结核性脑膜炎IP－10和IFN－γ的ROC曲线Fig.1 The ROC curves of IP－10and IFN－γ

本试验中结核性脑膜炎患者的IP－10含量为（1164.06±450.23）pg／ml，高于非结核性脑膜炎组（237.02±161.37）pg／ml，差 异 具有 显 著性 （P＜0.001）；IP－10的 ROC曲线下面积95%可信区间为（0.839～1.000）；以IP－10≥605.63pg／ml为临界值，其诊断结核性脑膜炎的敏感性为87.5%、特异性为96.9%，表明IP－10可作为结核性脑膜炎的诊断指标。IP－10与IFN－γ相比较，ROC曲线下面积分别为0.932和0.968，提示两者对结核性脑膜炎的诊断效能相近。Okamoto［4］研究报道IP－10的检测结核杆菌的效能与IFN－γ相近，与本研究结果一致。IP－10因子位于IFN－γ下游，由IFN－γ诱导表达，且升高幅度较IFN－γ更加明显，Ruhwald等［10］研究表明，肺结核患者的血浆中IP－10的水平显著高于IFN－γ。因此，对于IFN－γ升高不明显未达诊断临界值的病例，IP－10可能会具有更大的诊断作用［11］。

4 结论

本研究显示，IP－10在结核性脑膜炎患者中的水平显著高于非结核性脑膜炎，可作为两者鉴别诊断的指标，且具有较高的敏感性和特异性。ROC曲线分析，提示IP－10的诊断效能与IFN－γ相近；但对于免疫反应较弱的患者，IP－10可能有更高的诊断价值。

［1］Ravn P，Munk M E，Andersen A B，etal.Prospective evalua－tion of a whole－blood test using Mycobacterium tuberculosis－specific antigens ESAT－6and CFP－10for diagnosis of active tuberculosis［J］.Clin Diagn Lab Immunol，2005，12（4）：491－496.

［2］Madariaga M G，Jalali Z，Swindells S.Clinical utility of interferon gamma assay in the diagnosis of tuberculosis［J］.J Am Board Fam Med，2007，20（6）：540－547.

［3］Lalvani A.Diagnosing tuberculosis infection in the 21st century：new tools to tackle an old enemy［J］.Chest，2007，131（6）：1898－1906.

［4］Okamoto M，Kawabe T，Iwasaki Y，etal.Evaluation of interferon－gamma inducing cytokines and interferon－gamma inducible chemokines in tuberculous pleural effusions ［J］.J Lab Clin Med，2005，145（2）：88－93.

［5］Supriya P，Chandrasekaran P，Das S D.Diagnostic utility of interferon－gamma－induced protein of 10kDa （IP－10）in tuberculous pleurisy［J］.Diagn Microbiol Infect Dis，2008，62（2）：186－192.

［6］Dignan F L，Evans S O，Ethell M E，etal.A nearly CT－diagnosis－based treatment strategy for invasive fungal infection in allogeneic transplant recipients using caspofung in first line：an ef－fective strategy with low mortality［J］.Bone Marrow Transplant，2009，44（1）：51－56.

［7］钱福初，何建方，沈轶群，等.γ－干扰素体外释放试验在结核性脑膜炎诊断中的应用［J］.中国卫生检验杂志，2012，22（5）：1037－1038，1041.

［8］Villatoro－Hernandez J，Loera－Arias M J，Gamez－Escobedo A，et al.Secretion of biologically active interferon－gamma inducible protein－10（IP－10）by Lactococcus lactis［J］.Microb Cell Fact，2008，7：22.

［9］Azzurri A，Sow O Y，Amedei A，etal.IFN－gamma－inducible protein 10and pentraxin 3plasma levels are tools for monitoring inflammation and disease activity in Mycobacterium tuberculosis infection［J］.Microbes Infect，2005，7：11－18.

［10］Ruhwald M，Bodmer T，Maier C，etal.Evaluating the potential of IP－10and MCP－2as biomarkers for the diagnosis of tuberculosis［J］.Eur Respir J，2008，32（6）：1607－1615.

［11］Whittaker E，Gordon A，Kampmann B.Is IP－10abetter biomarker for active and latent tuberculosis in children than IFN gamma［J］.PLoS One，2008，3（12）：3901.