心可舒胶囊溶出度的研究

陈勇，王爱民

(1.贵州省黔东南州食品药品检验所，贵州 黔东南 556003；2.贵阳医学院，贵州 贵阳 550001)



心可舒胶囊溶出度的研究

陈勇1，王爱民2

(1.贵州省黔东南州食品药品检验所，贵州 黔东南 556003；2.贵阳医学院，贵州 贵阳 550001)

目的 建立心可舒胶囊溶出度实验方法，考察心可舒胶囊中丹参素钠、 原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素的溶出行为。方法 采用《中国药典》2010年版二部溶出度测定第一法，参照日本《医疗用药品品质情报集》中的溶出度试验条件，分别考察了心可舒胶囊在pH 1.2的人工胃液、pH 4.0醋酸盐缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液及水中的溶出行为，采用HPLC法梯度洗脱测定心可舒胶囊中丹参素钠、 原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素的溶出度。结果 心可舒胶囊中各厂家样品中的丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素溶出情况良好，45 min时的溶出度均在80%左右，且溶出均一性好。结论 该方法简便、准确, 重复性好, 可用于该胶囊的溶出度测定。

心可舒胶囊；溶出行为；HPLC；梯度洗脱

心可舒胶囊由山楂、丹参、葛根、三七、木香5味中药组成[1]，临床上用于冠心病引起的诸多病症及高血脂、高血压的治疗，是一种安全、无毒副作用，且疗效确切的纯中药制剂，现收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第15册。

“心可舒胶囊”现行质量标准对于该制剂只限于检测崩解时限, 崩解时限仅能反映药物是否崩解完全, 却不能反映出药物的生物利用度，而溶出度检测是评价常规口服固体制剂生物利用度的重要指标之一[2]。本文参考日本“药品品质再评价”工程在溶出度研究中所拟定的人体消化道内体液的4种基本溶出介质及相关文献[3～7]，构建了适宜的溶出条件, 采用高效液相色谱法梯度洗脱程序测定了心可舒胶囊中的4种有效成分[4]丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素的溶出度,结果证明，该方法简便、准确, 重复性好, 可用于心可舒胶囊的溶出度测定。

1 材料与方法

1.1 仪器 LC-20A高效液相色谱仪，配备四元泵、DAD检测器、威玛龙色谱工作站(日本岛津公司)；Luna C18柱(4.6×250 mm，5 μm)；RCZ-5A智能药物溶出仪(天津大学仪器厂)；AB135S型电子天平(梅特勒-托利多)。

1.2 药品与试剂 丹参素钠(批号：110855-201210，含量：98%)、原儿茶醛(批号：110810-201007，含量：98%)、丹酚酸B(批号：111562-201009，含量：98%)、葛根素(批号：110752-200912，含量：98%)均购自中国食品药品检定研究院；心可舒胶囊由全国4个生产企业提供(重庆希尔安药业有限公司，批号：141103;山西德元堂药业有限公司，批号：140506;四川龙人药业有限公司，批号：140708;西安天一秦昆制药有限责任公司，批号：140907)，规格均为0.3g/粒。乙腈、三氟乙酸均为色谱纯；水为超纯水。

1.3 方法

1.3.1 溶出介质的配制[7]：纯净水；pH1.2的人工胃液：取氯化钠2.0 g，加适量水溶解后，加7 mL盐酸，再加水稀释至1000 mL，混匀，即得；pH4.0醋酸盐缓冲液：将0.05 mol/L醋酸溶液与0.05 mol/L醋酸钠溶液按16.4︰3.6(V/V)的比例混合，即得；pH 6.8磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾1.7 g和无水磷酸氢二钠1.775 g，加水溶解并定容至1000 mL，即得。

1.3.2 溶出介质的选择：取心可舒胶囊样品(重庆希尔安药业有限公司 批号：141103), 通过比较4种待测成分在 1000 mL水、pH1.2的人工胃液、pH4.0醋酸盐缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液中的溶出曲线。

1.3.3 溶出方法和时间的选择：2010年版《中国药典》(二部)溶出度检测方法有3种：转篮法、浆法、小杯浆法，心可舒胶囊样品的规格为每粒0.3 g, 淘汰对小杯法的试验研究, 在转篮法与浆法中进行研究和筛选。采用转篮法，转速分别为50、75、 100 r/min；在“1.3.2”项下确定的溶出介质中，考察4种待测成分的溶出量。同时采用浆法，在溶出介质与时间不变的条件下，考察4种待测成分的溶出量。

1.4 溶出度测定方法的建立[4]

1.4.1 色谱条件：色谱柱：Thermo C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相：以乙腈为流动相A ，0.1%三氟乙酸为流动相B，梯度洗脱条件为0～20 min，5%A; 20～30 min，5%～9%A；30～60 min，9%A；60～80 min，9%～22%A；80～120 min，22%A；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：287 nm；进样量20 μL。

1.4.2 混合对照品溶液的配制：分别精密称取丹参素钠、 原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素对照品适量，加70%甲醇溶液制成每1 mL含丹参素钠0.25 mg、 原儿茶醛0.1 mg、丹酚酸B 0.5 mg和葛根素0.75 mg的混合溶液，即得。

1.4.3 供试品溶液的制备：取心可舒胶囊样品，按《中国药典》2010年版二部附录XC溶出度测定法第一法，以pH 6.8磷酸盐缓冲液1000 mL为溶出介质，转速为100 r/min，依法操作，于45 min时取样5 mL，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

1.4.4 阴性样品溶液的制备：按心可舒胶囊处方比例与制备工艺，制备缺丹参、 葛根的阴性样品，加溶出介质1000 mL，在37 ℃水浴中超声(200 w，45 kHz)15 min，放至室温，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得。

1.4.5 线性关系考察：精密吸取1.4.2项下丹参素钠、 原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素混合对照品溶液1、8、10、12、20 mL置100 mL 棕色量瓶中，分别加溶出介质定容，摇匀，即得不同浓度的标准品溶液。取上述标准品溶液，按1.4.1项下的色谱条件分别进样20 μL。以峰面积(y)为纵坐标，样品浓度(x，mg/L)为横坐标，进行回归分析，得出各组分的回归方程。

1.4.6 精密度试验：量取用溶出介质稀释制成的25 μg/mL的丹参素钠、10 μg/mL的原儿茶醛、50 μg/mL的丹酚酸B和75 μg/mL的葛根素对照品溶液，分别连续进样6次，记录色谱图，计算各组峰面积的RSD。

1.4.7 稳定性试验：取同一供试品溶液，室温放置，分别于0、4、8、10、15、24 h进样20 μL，记录色谱峰面积，计算各组峰面积的RSD。

1.4.8 重复性试验：取心可舒胶囊(山西德元堂药业有限公司 批号：140506)，按照1.4.3项下方法制备6份供试品溶液，并按1.4.1项下色谱条件分别进样分析，计算各组峰面积的RSD。

1.4.9 加样回收率试验：精密称取已知含量的本品内容物3组，每组2份，3组分别精密加入一定量的丹参素钠、 原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素对照品，按供试品溶液的制备方法制备并测定, 计算加样回收率。

1.5 溶出曲线的均一性 取心可舒胶囊样品(西安天一秦昆制药有限责任公司，批号：140907)6粒, 按溶出度测定法进行试验, 考察溶出均一性。计算丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素在pH 6.8磷酸盐缓冲液中的溶出度。

1.6 溶出度试验 取4批心可舒胶囊样品进行溶出度试验(重庆希尔安药业有限公司，批号：141103；山西德元堂药业有限公司，批号：140506；四川龙人药业有限公司，批号：140708；西安天一秦昆制药有限责任公司，批号：140907)，按《中国药典》2010年版二部溶出度测定法第一法[8]，以pH 6.8磷酸盐缓冲液1000 mL为溶出介质，转速100 r/min，依法操作，于45 min时取样5 mL，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液按“1.4.1”项下色谱条件测定心可舒胶囊的溶出度。

2 结果

2.1 溶出介质的选择 心可舒胶囊在 4 种溶出介质中均具有良好的溶出度；4种待测成分在45 min时溶出量均能达到80%左右 , 但在pH 6.8磷酸盐缓冲液中的溶出速率最快, 且溶出均一性相对较好, 因此选择 pH 6.8磷酸盐缓冲液1000 mL为溶出介质。

2.2 溶出方法和取样时间的选择 以 pH 6.8磷酸盐缓冲液1000 mL 为溶出介质时，45 min时4种待测成分的溶出量均在80%左右，其中以转速100 r/min时的溶出量最多；采用浆法，溶出介质与时间不变，4种待测成分溶出量均未达到80%，且溶出度均一性不好。以测量数据为依据，选择转篮法和转速为100 r/min。

由2.2可知，心可舒胶囊中的4种待测成分45 min时，在 pH 6.8磷酸盐缓冲液中的溶出度均在80%左右，因此，取样时间选择45 min。

综合上述实验结果，确定心可舒胶囊最终的溶出试验条件为：溶出方法选择转篮法，转速为100 r/min，溶出介质为pH 6.8磷酸盐缓冲液1000 mL；取样时间为45 min。

2.3 溶出度测定方法的建立[4]在此色谱条件下测定对照品(见图1A)、 心可舒胶囊样品(见图1B)及阴性样品(见图1C)，心可舒胶囊中的4种有效成分丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素均实现了基线分离，峰型良好，且与其他成分分离度良好；阴性样本对心可舒胶囊溶出度的测定无干扰。

图1 心可舒胶囊的HPLC图谱A.对照品；B.供试品；C.阴性对照1.丹参素钠；2.原儿茶醛；3.葛根素；4.丹酚酸BFig.1 Chromatogram of HPLCA.Reference substances;B.Sample;C.Negative sample1.Danshensu sodium;2.Protocatechuic aldehyde;3.Puerarin ;4.Salvianolic acid B

2.3.1 线性关系考察 丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素混合对照品的标准回归方程，见表1。

表1 标准曲线结果Tab.1 Results of standard curve

2.3.2 精密度试验 丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素峰面积的RSD分别为0.7 %、0.4 % 、0.8 % 和1.1 %, 表明仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性试验 丹参素钠、 原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素峰面积的RSD分别为1.2 %、1.7 %、 1.3 %和1.5 %(n=6)，表明丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素在溶出介质中24 h内基本稳定。

2.3.4 重复性试验 丹参素钠、 原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素的RSD分别为2.71%、1.98%、2.07%和1.56%，表明该方法重复性良好。

2.3.5 加样回收率试验 丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素的加样回收率，见表3～6。

表3 丹参素钠加样回收率(n=6)Tab.3 Result of recovery test of Danshensu sodium(n=6)

表4 原儿茶醛加样回收率(n=6)Tab.4 Result of recovery test of protocatechuic aldehyde(n=6)

表5 丹酚酸B加样回收率(n=6)Tab.5 Result of recovery test of salvianolic acid B(n=6)

表6 葛根素加样回收率(n=6)Tab.6 Result of recovery test of puerarin(n=6)

2.4 溶出曲线的均一性 6粒心可舒胶囊样本中的丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素在pH 6.8磷酸盐缓冲液中的溶出度的RSD均小于2%，表明心可舒胶囊样品溶出度的均一性良好，见图2。

图2 心可舒胶囊中4种主成分的溶出曲线A.丹参素钠；B.原儿茶醛；C.丹酚酸B；D.葛根素Fig.2 The dissolution curves of four principal components in Xinkeshu capsuleA.Danshensu sodium;B.Protocatechuic aldehyde ;C.Salvianolic acid B;D.Puerarin

2.5 溶出度试验 4批心可舒胶囊样品的溶出度结果见图1B。心可舒胶囊样品在pH 6.8磷酸盐缓冲液中的溶出度结果见表7。

表7 心可舒胶囊溶出度测定结果(n=3)Tab.7 Results of dissolution determination(n=3)

3 讨论

3.1 有效成分的溶出情况 有效成分的溶出对固体制剂内在质量的重要性已毋庸置疑[9]，心可舒胶囊为中成药制剂，本试验对其中的4种主要有效成分进行了溶出度考察，实验结果表明，各厂家心可舒胶囊中的丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B和葛根素溶出情况良好，45min时的溶出度均在80%左右，且溶出均一性好，表明该制剂处方工艺较稳定。

3.2 溶出介质的选择 本实验首先分别考察了心可舒胶囊在pH1.2的人工胃液、pH4.0醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液及水中的溶出行为，实验结果表明心可舒胶囊在pH 6.8磷酸盐缓冲液中的溶出速率最快, 且溶出均一性相对较好。同时考虑到该制剂在30 min内基本释放完全，进入缓慢释放的平台期，考虑到药物在服用30 min后的生理环境，本研究建议选择pH 6.8磷酸盐缓冲液为溶出介质。

[1] 国家药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂第十五册[M]：北京，1997：41-41.

[2] 李丽，周振旗.影响药物制剂溶出度实验的因素[J].西北药学杂志，2010，25(6)：479-480.

[3] 谢沐风.溶出曲线相似性的评价方法[J].中国医药工业杂志，2009，40(4)：308-310.

[4] 赵振霞， 刘永利，王敏，等.HPLC、UPLC法同时测定心可舒胶囊中四种成分的含量[J].中国药科大学学报，2014，45(5)：563-566.

[5] 李瑞芳，程秀民.自制恩替卡韦片与上市对照制剂体外溶出度对比研究[J].药物分析杂志，2011，31(7)：1333-1336.

[6] 刘敏，李玉兰，王铁杰，等.HPLC法测定氟哌啶醇片中主药的含量[J].中国药房，2009，20(4)：298-299.

[7] 张晓伟，李小莉，周园，等.自制与原研头孢呋辛酯片在4 种介质中的体外溶出度比较分析[J].中国药房，2015， 26(4)：544-546.

[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].2010 年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录85-87.

[9] 谢沐风.改善溶出度评价方法，提高固体药物制剂水平[J].中国医药工业杂志，2005，36(7)：447-451.

(编校：王冬梅)

Study on dissolution test of Xinkeshu capsule

CHEN Yong1, WANG Ai-min2

(1.Guizhou Qiandongnan Institute for Food and Drug Control, Qiandongnan 556003, China; 2.Guiyang Medical University, Guiyang 550001, China)

ObjectiveTo establish a method of the dissolution test of Xinkeshu capsule and study the dissolution behavior of sodium Danshensu,protocatechuic aldehyde,salvianolic acid B and puerarin in Xinkeshu capsule.MethodsUsing the dissolution determination first law of Chinese Pharmacopoeia 2010 II edition,according to the dissolution test conditions in Japan′s“quality of medical drugs information set”,different Xinkeshu capsule were inspected in pH 1.2 solution,pH 4.0 acetate buffer, pH 6.8 phosphate buffer and water.The HPLC gradient elution method was adopted to determine the dissolution of sodium Danshensu,protocatechuic aldehyde,salvianolic acid B and puerarin in Xinkeshu capsule.ResultsDissolution of sodium Danshensu,protocatechuic aldehyde,puerarin and salvianolic acid B of Xinkeshu capsule sample from each manufacturer were in good condition, 45min dissolution were 80% and dissolution uniformity.ConclusionThe method is simple, accurate and reproducible for the dissolution determination of this capsule.

Xinkeshu capsule; dissolution behavior; HPLC; gradient elution

陈勇，男，本科，副主任药师，研究方向：食品药品检验与研究，E-mail: 2693444525@qq.com。

R969.3

B

1005-1678(2015)07-0148-04