大剂量二甲双胍对卵巢癌患者血清HE4、LPA与Tr的影响研究

黄宇，杨年，周飞

(四川省人民医院城东病区 妇产科，四川 成都 610041)



大剂量二甲双胍对卵巢癌患者血清HE4、LPA与Tr的影响研究

黄宇，杨年，周飞

(四川省人民医院城东病区 妇产科，四川 成都 610041)

目的 探讨大剂量二甲双胍对卵巢癌患者血清人附睾分泌蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)、溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid，LPA)与调节性T细胞(regulatory T cell，Treg)的影响。方法 选取已确诊为单侧卵巢癌患者80例，根据单次二甲双胍服用剂量分为4组：A组：0.85克/次，B组：0.5 克/次，C组：0.25 克/次；D组：仅常规治疗。4组均给予手术及常规化疗，配合3次/天口服二甲双胍，连续2周，治疗前后检测各组患者血清HE4、LPA、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)、白细胞介素-10(interleukin-10，IL-10)含量，以及CD4+CD25+CD127调节性T细胞百分比。结果 分别与C、B、D组相比较，A组患者的疗效更好，表现为：血清HE4含量明显下降(P<0.05)；血清LPA含量明显降低(P<0.05)；血液CD4+CD25+CD127调节性T细胞百分比明显下降(P<0.05)；血清TGF-β1、IL-10含量明显下降(P<0.05)。结论 大剂量的二甲双胍能够降低卵巢癌患者血清HE4、LPA含量，减少调节性T细胞百分比及其相关细胞因子含量，对抑制癌细胞的增殖浸润起到积极作用。

二甲双胍；卵巢癌；人附睾分泌蛋白4；溶血磷脂酸；调节性T细胞

卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，其发病率仅次于宫颈癌及宫体癌，但其死亡率却居于首位[1]。 卵巢癌多发生于50岁以上妇女，在发达国家(除日本外)其发病率为9～17/10万[2]，在所用生殖系统恶性肿瘤中占23%，病死率高达47%，而我国卵巢癌的发病率为7.1/10万，并有逐年上升的趋势。因此，早期采用合理的治疗方法尤为重要。二甲双胍是一种传统的降糖药物，近年来，研究发现，二甲双胍还具有抗卵巢癌等抗肿瘤的作用，其可以降低卵巢癌发病率、提高患者生存率[3]。体外研究亦表明，二甲双胍能抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖并诱导其凋亡[4]。近年来有体外研究和动物实验发现二甲双胍对多种肿瘤细胞具有一定程度的抑制作用，并可显著增强化疗药物的抗肿瘤作用[5]。然而，目前关于二甲双胍应用于卵巢癌的临床研究较少。因此，本研究对采用二甲双胍配和治疗的卵巢癌患者进行研究，观察其血清人附睾分泌蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)、溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid，LPA)与调节性T细胞(regulatory T cell，T)及相关因子变化，探讨二甲双胍对卵巢癌的治疗作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集四川省人民医院城东病区2013年1月～2015年5月的确诊为单侧卵巢癌拟行手术治疗的患者80例，年龄在30～82岁，平均年龄(58.2±7.4)岁。诊断标准：诊断依据根据2012卵巢癌包括输卵管癌和原发腹膜癌临床实践指南第2版[6]并经术后病理学检查确诊，肿瘤分期为Ⅰ-Ⅱ期；排除标准：①合并有糖尿病；②合并其他恶性肿瘤；③合并严重的心脑血管疾病；④肝、肾功能衰竭；⑤非首次发病，经过手术、化疗、放疗等治疗的画着；⑥不能耐受二甲双胍。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法：将患者随机分为A组、B组、C组、D组，各20例。所有患者均经腹腔镜行手术切除患侧卵巢及周围淋巴结，术后配合TP化疗方案(术后第1天静滴泰素220 mg溶于500 mL 50 g/L葡萄糖注射液，第2天将顺铂80 mg溶于2000 mL 0.9%氯化钠注射液进行腹腔灌注)联合治疗，常规水化、解毒、止吐、维持电解质平衡。A、B、C 3组患者在术后常规治疗的基础上加用盐酸二甲双胍片(中美上海施贵宝制药有限公司，国药准字J20080067)3次/天，口服治疗，连续服用2周，单次剂量：A组：0.85 g/次，B组：0.5 g/次，C组：0.25 g/次；D组作为对照组。

1.2.2 血清指标采集：服用二甲双胍治疗前后，所有研究对象均采集空腹12 h后静脉血10 mL，其中5 mL分离血清，选用HE4、LPA、TGF-β1、IL-10检测试剂盒、试剂盒(郑州安赛生物科技有限公司)，严格按照试剂盒说明，采用F.A.M.E.16/30全自动酶标仪(瑞士哈美顿公司)，通过酶联免疫法(ELISA)检测血清中HE4、LPA、转化生长因子-β1(TGF-β1)、IL-10含量；剩余5 mL静脉血加入肝素抗凝，分离淋巴细胞，采用流式细胞分析仪(BD FACSCanto II)分析CD4+CD25+CD127调节性T细胞所占百分比。

2 结果

2.1 治疗前后各组患者血清HE4含量比较 与治疗前比较，各组血清HE4含量均明显下降(P<0.05)，治疗后，各组血清HE4含量两两比较，A组

表1 治疗前后各组患者血清HE4含量比较， μmol/L)Tab.1 Comparison of HE4 of two groups beford and after ±s， μmol/L)

*P<0.05，与治疗前比较，compared with before treatment；，#P<0.05，与D组比较，compared with D group after treatment；△P<0.05，治疗后与A组比较，compared with A group after treatment；▲P<0.05，治疗后与B组比较，compared with B group after treatment

2.2 治疗前后各组患者血清LPA含量比较 与治疗前比较，各组血清LPA含量均明显下降(P<0.05)；治疗后，各组血清LPA含量两两比较，A组

表2 治疗前后各组患者血清LPA含量比较， μmol/L)Tab.2 Comparison of LPA of two groups before and after ±s， μmol/L)

*P<0.05，与治疗前比较，compared with before treatment；#P<0.05，与D组比较，compared with D group after treatment；△P<0.05，治疗后与A组比较，compared with A group after treatment；▲P<0.05，治疗后与B组比较，compared with B group after treatment

2.3 治疗前后各组患者血液CD4+CD25+CD127调节性T细胞百分比比较 与治疗前比较，各组血液CD4+CD25+CD127调节性T细胞百分比均明显下降(P<0.05)，治疗后，各组血液CD4+CD25+CD127调节性T细胞百分比两两比较，A组

组别例数治疗前 治疗后A组206.48±0.863.11±0.43*#▲B组206.50±0.914.03±0.56*#△C组206.52±0.934.72±0.53*#△▲D组206.47±0.885.36±0.68*△▲F—0.01259.889P—0.9810.000

*P<0.05，与治疗前比较，compared with before treatment；#P<0.05，与D组比较，compared with D group after treatment；△P<0.05，治疗后与A组比较，compared with A group after treatment；▲P<0.05，治疗后与B组比较，compared with B group after treatment

2.4 治疗前后各组患者血清TGF-β1、IL-10含量比较 与治疗前比较，各组血清TGF-β1、IL-10含量均明显下降(P<0.05)，治疗后，各组中血清TGF-β1、IL-10含量两两比较，A组

组别例数TGF-β1(pg/mL)治疗前治疗后IL-10(ng/mL)治疗前治疗后A组20256.64±36.27128.64±15.78*#▲28.05±4.8617.54±2.45*#△B组20249.34±32.67146.36±21.65*△▲28.76±4.5419.16±2.78*#△C组20262.45±37.23164.76±24.87*#△▲27.67±3.2220.98±2.15*#△▲D组20254.66±29.46183.79±26.85*△▲27.99±3.6721.77±3.65*△▲F—0.50621.9130.2489.071P—0.5130.0000.7850.001

*P<0.05，与治疗前比较，compared with before treatment；#P<0.05，与D组比较，compared with D group after treatment；△P<0.05，治疗后与A组比较，compared with A group after treatment；▲P<0.05，治疗后与B组比较，compared with B group after treatment

3 讨论

卵巢癌属于女性生殖器官常见恶性肿瘤，常发于围绝经期妇女，其发病原因尚不明确，其可能与内分泌、免疫功能、精神及遗传等因素有关，该病发病率高，预后差且死亡率高，对患者的生命安全带来严重威胁[7]。二甲双胍是糖尿病一线降糖药物，其降糖效果只作用于糖代谢异常患者，而对健康人群血糖无影响。多项研究显示[8-10]，二甲双胍能够降低糖尿病患者结直肠癌、胰腺癌、膀胱癌等恶性肿瘤的发病率，死亡率也随之降低。许多学者认为[11]，这与二甲双胍激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的信号通路有关，可以促进抑癌基因LKB1的表达，抑制肿瘤细胞增殖，同时还可以减少肿瘤细胞内源性脂肪酸的合成，促进肿瘤细胞凋亡；二甲双胍还具有诱导细胞周期停滞的作用，研究发现[12]，二甲双胍能够增加A 2780/DDP对顺铂的敏感性以及A 2780/TAX对紫杉醇的敏感性，二甲双胍可通过抑制NF-κB信号通路降低P-gp的表达。在本实验中，通过检测卵巢癌患者经不同剂量二甲双胍治疗后血清HE4、LPA与调节性T细胞及相关因子的水平，探讨二甲双胍对卵巢癌的影响。

HE4属于酸性蛋白质，是新发现的肿瘤标志物，研究发现，HE4在正常的卵巢组织中较少表达，而在卵巢癌组织中呈高度表达，其表达量和外周血清含量随卵巢癌恶性程度的增高而增高[13]，而且在肺癌、肾癌等其他恶性肿瘤中的表达未见明显升高，是诊断卵巢癌特异性和敏感性较高的指标。本研究结果显示，各组血清HE4含量与治疗前比较均明显下降(P<0.05)，治疗后，各组血清HE4含量比较，A组

LPA是细胞间磷脂类信号分子，可以与G蛋白偶联受体结合，发挥生物学效应。资料显示，LPA 作为细胞间“多功能磷脂信使”，近年来研究发现卵巢癌细胞可以产生LPA，反过来LPA 又可促进卵巢癌细胞的增殖，促进肿瘤细胞浸润和转移，诱导新生血管生成等[14]，卵巢癌上皮存在大量的LPA受体，卵巢癌患者血液和腹水内LPA含量均升高，2者结合，促进癌细胞的生长与增殖，同时提高癌细胞的耐药性。本研究结果显示，各组血清LPA含量与治疗前比较均明显下降(P<0.05)，治疗后，各组血清LPA含量比较，A组

近年来，随着免疫学的发展，人们认为恶性肿瘤的产生于免疫失调关系密切。调节性T细胞是一组具有免疫调控作用的细胞群，对其他免疫细胞的功能具有抑制作用。研究发现调节性T细胞对机体的抗肿瘤免疫反应起到抑制作用[15]，在卵巢癌患者的外周血中，CD4+CD25+CD127调节性T细胞百分比明显升高[16]，其分泌合成的TGF-β1、IL-10含量也明显升高，TGF-β1能够刺激调节性T细胞的增殖转化，IL-10对自然杀伤(NK)细胞及其细胞因子的产生器抑制作用，从而下调机体对肿瘤细胞的免疫能力。本研究结果显示，各组血液CD4+CD25+CD127调节性T细胞百分比、血清TGF-β1、IL-10含量均明显下降(P<0.05)，治疗后，各组血液CD4+CD25+CD127调节性T细胞百分比、血清TGF-β1、IL-10含量比较，A组

本实验通过对80例单侧卵巢癌患者治疗前后血清HE4、LPA含量、调节性T细胞百分比及其相关细胞因子含量的分析，证实了大剂量的二甲双胍能够对抑制卵巢癌患者癌细胞的增殖浸润起到积极作用。在下一步研究中，将研究二甲双胍不良反应的影响因素，为二甲双胍更好的应用于卵巢癌的治疗奠定基础。

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(编校：王冬梅)

Effect of high dose metformin on serum HE4, LPA and regulatory T cells in patients with ovarian cancer

HUANG Yu, YANG Nian, ZHOU Fei

(Department of Obstetrics and Gynecology, East SiChuan Province People’s Hospital Ward, Chengdu 610041, China)

ObjectiveTo analysis the effect of high dose metformin on serum HE4, LPA and regulatory T cells in patients with ovarian cancer.Methods80 cases of unilateral ovarian cancer patients were given surgery and conventional chemotherapy,were divided into four groups according to single metformin dose: (group A: 0.25g each time, B group: 0.25g each time, group C: 0.25g each time; group D: conventional treatment only)and three times a day oral administration of metformin and two weeks in a row, before and after the treatment of detection each serum HE4, LPA, transformation growth factor beta 1 (TGF - beta 1), interleukin - 10 (IL-10) content, and CD4+CD25+CD127 regulating T cell percentage.ResultsCompared with B, C, and D group, the efficacy of patients in group A was better, as follows: Serum HE4 content decreased significantly (P<0.05); serum LPA content decreased significantly (P<0.05); blood CD4+CD25+CD127 regulatory T cell percentage decreased significantly (P<0.05); serum TGF beta 1, IL-10 content decreased significantly (P<0.05).The results were statistically significant.ConclusionHigh dose of metformin can reduce serum HE4, LPA content, reduce the adjusting the percentage of T cells and related cytokines in patients with ovarian cancer, and play a positive role in inhibit cancer cell proliferation and invasion.

metformin; ovarian cancer; HE4; LPA; regulatory T cells

黄宇，男，硕士，主治医师，研究方向：妇科肿瘤和妇科内镜，E-mail：sichuanhyu@163.com。

R737.31

A

1005-1678(2015)07-0076-03