丹参注射液与多巴胺注射液的配伍稳定性考察

汤姝，温强，朱振峰，张晓坚

(1.郑州大学第一附属医院 药学部，河南 郑州 450052；2.郑州大学临床药理研究所，河南 郑州 450052)



丹参注射液与多巴胺注射液的配伍稳定性考察

汤姝1，温强2，朱振峰1，张晓坚1

(1.郑州大学第一附属医院 药学部，河南 郑州 450052；2.郑州大学临床药理研究所，河南 郑州 450052)

目的 研究丹参注射液与多巴胺注射液在5%的葡萄糖注射液中的配伍稳定性。方法 采用HPLC法考察2药在5%的葡萄糖注射液中配伍后，于5、25、35 ℃避光和光照条件下，6 h内丹参注射液中4个主成分：丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B和多巴胺注射液中的盐酸多巴胺的含量变化；并考察配伍前后配伍液外观、性状、pH及不溶性微粒的变化。结果 在避光条件下，6 h内配伍液的外观、pH值均无明显变化，不溶性微粒均符合中国药典的要求，配伍液中丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和盐酸多巴胺的百分含量均在99%以上(相对于0 h)；在光照条件下，随着温度的升高，放置时间的延长，配伍液中盐酸多巴胺的含量没有明显下降，而丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B的含量下降较明显，配伍液pH值也有一定程度的降低，不溶性微粒则无明显变化。结论 丹参注射液与多巴胺注射液在5%的葡萄糖注射液中在6 h内、于避光环境中可配伍使用；光照及温度可能是影响丹参注射液与多巴胺注射液配伍稳定性的主要因素。

丹参注射液；多巴胺注射液；配伍稳定性；高效液相色谱法

丹参注射液是活血化瘀的常用药物，近年来被广泛用于治疗冠心病等疾病，并取得了较好的临床疗效。该药适用于胸痹血瘀症候，如胸闷、心悸、心绞痛，急慢性心肌梗塞，缺血性脑中风，脑梗塞或中风后遗症等。

多巴胺注射液临床上用于心肌梗死、创伤、内毒素败血症、心脏手术、肾功能衰竭、充血性心力衰竭等引起的休克综合征；补充血容量后休克仍不能纠正者，尤其有少尿及周围血管阻力正常或较低的休克。

近年来丹参注射液和多巴胺注射液在临床上配伍使用取得了一定的疗效[1-2]，有文献报道[3-4]，2药配伍使用有增效作用，且能减少药物的依耐性。但2药配伍的稳定性尚无文献报道，其用药的安全性无确切的理论支持。

根据临床用药习惯，本文考察了2药在5%的葡萄糖注射液中配伍后，在5、25、35 ℃避光和光照条件下6 h内的稳定性，采用HPLC法测定了丹参注射液中4个主成分：丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B和多巴胺注射液中的盐酸多巴胺的含量变化；并考察了配伍前后配伍液外观、性状、pH及不溶性微粒的变化，为临床用药安全提供了保证。

1 材料与方法

1.1 仪器 美国Waters Alliance 2695型高效液相色谱仪；色谱柱：Dikxna Cl8(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；2501型紫外-可见分光光度仪(日本岛津)；XS205DU电子天平(梅特勒-托利多)；868型酸度计(美国奥立龙公司)；C-15型电热恒温水槽(上海比朗仪器制造有限公司)；JHT-DD型单人单面净化工作台(济南杰康净化设备厂)。

1.2 药品与试剂 丹参素钠对照品(批号：110855-200809,中国食品药品检验研究院)；原儿茶醛对照品(批号：110810-201007,中国食品药品检验研究院)；迷迭香酸对照品(批号：111871-201001,中国食品药品检验研究院)；丹酚酸B对照品(批号：111562-201313,中国食品药品检验研究院)；盐酸多巴胺对照品(批号：100070-201006,中国食品药品检验研究院)；丹参注射液(四川升和药业股份有限公司， 规格：10 mL/支， 批号：150718/1)；多巴胺注射液(上海禾丰制药有限公司，规格：2 mL:20 mg，批号：150507)；5%葡萄糖注射液(国内某厂家生产，规格: 250 mL)；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

1.3 方法

1.3.1 含量测定[5]：色谱条件：流动相(A)： 0.05%磷酸溶液、(B)：乙腈，按照表1的程序进行梯度洗脱，洗脱时间为85 min；流速：1.0 mL/min；检测波长：286 nm; 柱温：30 ℃；进样量:10 μL。

表1 梯度洗脱程序Tab.1 Gradient elution program

1.3.2 溶液的配制

① 对照品混合溶液的配制：分别精密称取于五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h以上的丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B对照品及于105 ℃干燥至恒重的盐酸多巴胺对照品适量，用5%的甲醇稀释制成含0.7 mg/mL丹参素钠、0.3 mg/mL原儿茶醛、0.06 mg/mL迷迭香酸B及 0.06 mg/mL丹酚酸和0.8 mg/mL多巴胺的对照品储备液。

② 配伍液的配制：模拟临床用药浓度在层流净化台上进行配制[2]，将丹参注射液3支(10 mL)与多巴胺注射液1支(2 mL/20 mg)分别溶解到250 mL 5%的葡萄糖注射液中，摇匀，分为若干份。各配伍液分别在下列条件中放置：避光(5、25、35 ℃)和光照(5、25、35 ℃)。每种条件下均平行配制样品各3份(n=3)，在0、1、2、4、6 h时分别检查外观，测定pH值、不溶性微粒数及丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B和盐酸多巴胺的含量。

1.3.3 标准曲线的绘制：精密量取“1.3.2”项下的对照品储备液1、3、5、8、10 mL于50 mL量瓶中加流动相至刻度，配成系列浓度的对照品混合溶液。按“1.3.1”项下的色谱条件分别进样测定，记录色谱图。

1.3.4 精密度试验：取“1.3.3”项下对照品储备液的10倍稀释溶液(即5→50 mL稀释液)，按“1.3.1”项下色谱条件连续进样6次，记录色谱图。

1.3.5 重复性试验：分别取丹参注射液与多巴胺注射液同一批样品，按“1.3.2”项下配伍溶液配制方法平行制备6份，精密量取配伍液10 μL，按“1.3.1”项下色谱条件分别进样分析，记录色谱图。

1.3.6 回收率试验：配制低、中、高丹参素钠(56、70、84 μg/mL)、原儿茶醛(24、30、36 μg/mL)、迷迭香酸(4.8、6、7.2 μg/mL)、丹酚酸B(4.8、6、7.2 μg/mL)及多巴胺(64、80、96 μg/mL)系列浓度的对照品溶液，重复进样10 μL(n=5)。测定其峰面积，代入回归方程计算浓度，并计算回收率。

1.3.7 配伍液中药物含量测定：按照“1.3.1”项下色谱条件，于0、1、2、4、6 h取避光和光照情况下不同温度条件(5、25、35 ℃)的配伍液分别进样10 μL，记录色谱图；以0 h时含量为100%，考察以上配伍液中各主成分的百分含量变化。

1.3.8 外观观察：取洁净的20 mL 具塞纳氏比色管数支，分别加入15 mL上述配伍液，并用配伍前的两种注射液作对照，于0、1、2、4、6h分别检查外观变化。

1.3.9 pH测定：取上述配伍液于0、1、2、4、6 h测定pH值，每个样本连测3次，取平均值。

1.4 不溶性微粒 取“1.3”项下的配伍液及配伍前的丹参注射液与多巴胺注射液在上述时间点按中国药典微粒检测法中的光阻法检查微粒[6]。

2 结果

2.1 含量测定结果

2.1.1 标准曲线：以峰面积A为纵坐标，浓度C(μg/mL)为横坐标，进行线性回归，得丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B及多巴胺的回归方程分别为A=4.31×106C-1.14×102,r=0.9996(n=5)；A=7.56×106C-3.82×102,r=0.9998(n=5)；A=6.97×106C-1.6 3×102,r=0.9992(n=5)；A=3.21×106C-2.31×102,r=0.9997(n=5)和A=6.33×106C-1.59×102,r=0.9994(n=5)。结果表明，丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B及多巴胺分别在14～140 μg/mL、6～60 μg/mL、1.2～12 μg/mL、1.2～12 μg/mL及16～160 μg/mL的范围内线性关系良好。对照品及样品各峰分离度良好，见图1、图2。

图1 对照品混合溶液色谱图1.盐酸多巴胺；2.丹参素钠；3.原儿茶醛；4.迷迭香酸；5丹酚酸BFig.1 HPLC chromatogram of reference substance1.Dopamine hydrochloride; 2.Salvia;3.Protocatechuic aldehyde;4.Rosmarinic acid;5.Salvianolic acid B

图2 配伍液色谱图1.盐酸多巴胺；2.丹参素钠；3.原儿茶醛；4.迷迭香酸；5丹酚酸BFig.2 HPLC chromatogram of compatibility solution1.Dopamine hydrochloride; 2.Salvia;3.Protocatechuic aldehyde;4.Rosmarinic acid;5.Salvianolic acid B

2.1.2 精密度试验：丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B及多巴胺峰面积的RSD分别为0.81%、0.96%、1.01%、0.72%和0.83%(n=6)，表明仪器的精密度良好。

2.1.3 重复性试验：丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B及多巴胺峰面积的RSD分别为0.89%、0.92%、0.98%、0.80%和0.85%(n=6)，表明方法的重复性良好。

2.1.4 回收率试验：丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B及多巴胺的平均回收率分别为101.19%、100.26%、99.73%、99.61%和98.27%，RSD分别为2.78%、3.26%、2.15%、3.03%和2.17%。

2.1.5 配伍液中药物含量：6 种放置条件中5、25、35 ℃避光条件下该配伍液中丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和盐酸多巴胺的百分含量在0～6 h内均无明显变化；5 ℃及25 ℃光照条件下该配伍液中各主成分的含量在0～4 h 无明显变化，在4～6 h内配伍液中丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的含量有所降低；35 ℃光照条件下该配伍液中丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的含量在0～4 h 略有下降；而在4～6 h内配伍液中丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的含量明显降低，各成分在6 h的含量相对0 h降低接近10%；而配伍液中盐酸多巴胺的含量则无明显变化，见表2。

表2 配伍液6种放置条件下各成分相对百分含量变化(n=3，%)Tab.2 The relative percentages of each component in compatibility solution under 6 different conditions(n=3，%)

续表

2.2 外观检查 结果表明，6 h内各种放置条件下配伍液的外观与配伍前的2种注射液相比无明显差异。

2.3 pH测定 结果表明，6 种放置条件中5、25、35 ℃避光条件下该配伍液pH值在0～6 h均无明显变化；而在光照条件下该配伍液pH值在0～1 h无明显变化，1～2 h，pH值有下降的趋势，2 h后趋于稳定，见表3。

表3 6种放置条件下配伍液的pH变化(n=3)Tab.3 pH change of compatibility solution in 6 conditions(n=3)

2.4 不溶性微粒 结果表明，2药配伍并未使配伍液微粒数明显增加，见表4。

表4 2药配伍不同时刻的不溶性微粒数Tab.4 Insoluble particles of compatibility solution at different time

A.丹参注射液；B.巴胺注射液

3 讨论

为了排除单个药物成分在5%葡萄糖注射液中的不稳定因素，本实验分别测试了丹参注射液与多巴胺注射液在5%葡萄糖注射液中的稳定性。实验证明，2种药物在5%葡萄糖注射液中的稳定性明显高于2者共存于5%葡萄糖注射液中的稳定性，2种药物(分别溶解于5%葡萄糖注射液)在避光条件(5、25、35 ℃)和光照条件(5、25、35 ℃)下6 h内的外观、 pH值、不溶性微粒数及各主成分的含量均无明显变化(相对于0 h)。

综上所述，丹参注射液与多巴胺注射液配伍后的变化所涉及的问题主要是由光照和温度引起的。以上实验结果说明，丹参注射液与多巴胺注射液配伍后，在避光条件下的3种温度情况，6 h内配伍液的pH值、外观及不溶性微粒均无明显变化，各主成分的百分含量也没有明显下降；而在光照条件下，随着温度的升高，放置时间的延长，配伍液中丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的含量下降较为明显(4 h后)，可见在影响丹参注射液与多巴胺注射液配伍变化的因素中，光照是最主要的。考虑到配伍液中丹参注射液中各主成分的相对含量有下降趋势，为保障临床用药的安全性，建议临床最好在丹参注射液与多巴胺注射液配伍后的4 h内滴完，且尽量避光。

在进行液相色谱检测波长选择时，本实验参考文献[5,7]考察了2种波长，考虑到丹参注射液中的检测成分较多，成分较复杂，选择了文献5中的检测波长；在进行梯度洗脱时，本实验发现当按照参考文献的条件进行梯度洗脱时，各主成分色谱峰有重叠现象，对洗脱条件进行了一定程度的改善，将洗脱时间延长，并对45 min后的流动相洗脱比例进行了调整。经过优化，各主成分色谱峰实现了完全分离，峰型较理想。

[1] 马友凤，唐义丽.复方丹参注射液与多巴胺联合治疗新生儿重度硬肿症30例疗效观察[J].河南大学学报(医学版)，2005，24(1)：59-60.

[2] 陈海棠.丹参注射液联合多巴胺治疗肺心病心力衰竭72例疗效分析[J].中华现代内科学杂志，2008，5(5)：458-459.

[3] 吴学军，那顺白，乙拉.丹参注射液与临床常用药物配伍[J].中华误诊学杂志，2011，11(6)：1505-1505.

[4] 徐德生.中药的合理应用[M].上海：上海科技教育出版社，2007：213.

[5] 李婧, 刘汉清, 孙小芬.丹参注射液多成分定量测定和指纹图谱研究[J].中成药，2011，33(4)：553-556.

[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].2010 年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录：71-73.

[7] 吴燕琼，梁洁雯.HPLC测定盐酸多巴胺注射液的含量[J].广东药学，2005，15(3)：15-17

(编校：王冬梅)

Study on compatible stability of Danshen injection and dopamine injection

TANG Shu1, WEN Qiang2, ZHU Zhen-feng1, ZHANG Xiao-jian1

(1.Department of Pharmacy,The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China; 2.Clinical Pharmacology Research Institute of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China)

ObjectiveTo study compatibility stability of Danshen injection combined with dopamine injection in 5% glucose injection.MethodsThe relative contents of tanshinol sodium, protocatechuic aldehyde, rosmarinic acid,salvianolic acid B in Danshen injection and Dopamine hydrochloride in dopamine injection were determined by HPLC in 6h after the compatibility in the above infusion at 5 ℃,25 ℃,35 ℃ under dark and light,and the changes in pH value,appearance and insoluble particles were also observed.ResultsThere were no significant changes in appearance and pH value at 5 ℃,25 ℃,35 ℃ under dark,insoluble particles were in line with Chinese Pharmacopoeia,and the relative content of tanshinol sodium, protocatechuic aldehyde, rosmarinic acid,salvianolic acid B and Dopamine hydrochloride were above 99%(compared with 0h) in 6h.In the light conditions,as the temperature raised,the extension of storage time,the relative content of Dopamine hydrochloride was not significantly decreased,but the content of tanshinol sodium, protocatechuic aldehyde, rosmarinic acid and salvianolic acid B had declined,while pH value also had a certain degree of reduction,the insoluble particles had no obvious change.ConclusionThe mixture of Danshen injection and dopamine injection in 5% glucose injection is stable under dark conditions in 6h,illumination and temperature maybe the main factor affecting the stability of Danshen injection combined with dopamine injection.

Danshen injection; dopamine injection; compatible stability; HPLC

汤姝，女，博士，主管药师，研究方向：药学，E-mail：2084907457@qq.com。

R969.3

B

1005-1678(2015)07-0145-04