奥曲肽联合复合辅酶对化脓性阑尾炎患者Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg失衡影响

谭子方，吴文利，王健，景生虹

(1.宁夏回族自治区人民医院 药剂科，宁夏 银川 750021；2.宁夏回族自治区人民医院 普外科，宁夏 银川 750021)



奥曲肽联合复合辅酶对化脓性阑尾炎患者Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg失衡影响

谭子方1，吴文利1，王健1，景生虹2Δ

(1.宁夏回族自治区人民医院 药剂科，宁夏 银川 750021；2.宁夏回族自治区人民医院 普外科，宁夏 银川 750021)

目的 探讨奥曲肽联合复合辅酶对化脓性阑尾炎患者辅助性T细胞17/ CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg)失衡的影响。方法 选取宁夏回族自治区人民医院已确诊为急性化脓性阑尾炎患者150例，随机分为实验组和对照组，每组各75例。2组均行腹腔镜阑尾炎切除术，术后实验组在常规治疗基础上加用奥曲肽皮下注射，检测治疗前后Th17、CD4+CD25+Foxp3+Treg相关指标，进而对Th17/Treg平衡状态进行分析。结果 与对照组比较，实验组患者Th17/Treg失衡状态恢复较好，表现为：Th17比例、Treg比例、Th17/Treg比值下降(P<0.05)；相关转录因子RORγt、Foxp3的mRNA表达水平降低(P<0.05)；血清细胞相关因子(IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β)、C反应蛋白(CRP)含量降低(P<0.05)；血清干扰素-γ(IFN-γ)含量升高(P<0.05)。结论 奥曲肽联合复合辅酶可以纠正化脓性阑尾炎患者Th17/Treg的失衡状态，提高患者的免疫功能，影响患者预后。

化脓性阑尾炎；奥曲肽；辅助性T细胞17；调节性T细胞

急性阑尾炎是外科常见病，居于急腹症的首位，据最新统计，每1000人中有1.17人患病，男性风险发生率为8.6%，女性为6.7%，可发生于各个年龄段，发病与梗阻、感染、内脏神经功能反射有关[1]。化脓性阑尾炎属炎症反应性疾病，其发病过程存在多种细胞因子及免疫细胞的参与，近年来研究发现[2]，化脓性阑尾炎患者体内存在辅助性T细胞17(Th17)/CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)失衡，可导致免疫功能紊乱，影响患者预后。奥曲肽是一种生长抑素[3]，能够抑制胃肠分泌，在阑尾炎术后一般用来预防早期炎性肠梗阻，有资料显示[4]，生长抑素还具有免疫调节作用，能够调节Th1/Th2细胞的平衡，影响免疫功能，但关于其对于Th1/Treg细胞平衡是否有作用，目前研究还较少。因此，本研究对化脓性阑尾炎患者用药前后免疫相关指标分析比较，探讨奥曲肽联合复合辅酶对化脓性阑尾炎患者Th17/Treg失衡的影响，为化脓性阑尾炎寻求更好的治疗方案。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集宁夏回族自治区人民医院2013年6月～2015年4月的确诊为急性化脓性阑尾炎的患者150例。其中男性82例，女性68例，年龄20～71岁，平均年龄(45.34±7.16)岁。诊断标准：诊断依据《2011年老年急性阑尾炎患者的临床特征及外科诊疗方案》[5]，并经术后病理检查确诊为化脓性阑尾炎[6]。排除标准：①合并严重的心、脑慢性疾病；②肝、肾功能衰竭；③合并恶性肿瘤；④凝血功能障碍，具有严重出血倾向；⑤合并妊娠；⑥有手术禁忌症的患者。本研究获得患者知情同意，并得到医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 分组及治疗方法：将患者随机分为实验组和对照组，实验组75例，其中男40例，女35例，年龄20～71岁，平均年龄(45.56±7.11)岁；对照组75例，男41例，女34例，年龄20～70岁，平均年龄(44.74±7.56)岁；2组患者的年龄、性别、病程无明显差异。所有患者均在全麻下行腹腔镜阑尾切除术，术后所有患者常规禁食、补液，予氨甲环酸(成都倍特药业有限公司，国药准字H20030625)止血，头孢哌酮钠舒巴坦钠(苏州东瑞制药有限公司，国药准字H20034146)、奥硝唑(南京圣和药业有限公司，国药准字H20030277)联合抗感染，复合辅酶(北京双鹭药业股份有限公司，国药准字H11020001)2支溶于2 mL 0.9%氯化钠溶液，每天1次肌内注射支持治疗；实验组在对照组治疗的基础上予注射用醋酸奥曲肽(长春金赛药业股份有限公司，国药准字H20051860，生产批号：20050919)0.1 mg，每天3次皮下注射，连续7 d，对照组给予等量生理盐水皮下注射。

1.2.2 血液指标检测：所有患者分别于入院时(治疗前)和治疗后，采取空腹静脉血9 mL。其中3 mL血液加入肝素抗凝，分离淋巴细胞，采用流式细胞分析仪(BD FACSCanto II)分析Th17细胞、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及2者比值；另外3 mL血液加入肝素抗凝后，分离淋巴细胞，采用流式细胞法测定RORγt(Th17细胞转录因子)、Foxp3(Treg细胞转录因子)水平；其余3 mL促凝后采用离心机离心，取上清液，采用全自动化学发光免疫分析仪(UniCel DxI 800，贝克曼库尔特)，利用酶联免疫双抗夹心法(ELISA)检测血清中白细胞介素-4(IL-4)、IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、转化生长因子-β(TGF-β)、干扰素-γ(IFN-γ)、C反应蛋白(CRP)含量。

2 结果

2.1 2组患者治疗前后Th17、Treg细胞比例比较 治疗后，2组患者的Th17比例、Treg比例、Th17/Treg比值均较治疗前下降(P<0.05)。与对照组比较，实验组Th17比例、Treg比例、Th17/Treg比值明显下降(P<0.05)。见表1。

表1 2组患者治疗前后Th17、Treg细胞比例比较Tab.1 Comparison of Th17 and Treg ratios before and after treatment between two groups ±s)

#P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group before treatment；*P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group after treatment

2.2 2组患者治疗前后RORγt、Foxp3因子水平比较 治疗后，2组患者的RORγt、Foxp3因子水平均较治疗前下降(P<0.05)。与对照组比较，实验组RORγt、Foxp3因子水平较低(P<0.05)。见表2。

表2 2组患者治疗前后RORγt、Foxp3因子水平比较Tab.2 Comparison of expression levels of RORγt and Foxp3 before and after treatment between two groups ±s)

#P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group before treatment；*P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group after treatment

2.3 2组患者治疗前后血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量比较 治疗后，2组患者血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量均较治疗前明显降低(P<0.05)。与对照组比较，实验组血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量明显较低(P<0.05)。见表3。

表3 2组患者治疗前后血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量比较Tab.3 Comparison of IL-6， IL-10， IL-17， IL-23 and TGF-β contents before and after treatment between two groups ±s)

#P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group before treatment；*P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group after treatment

2.4 2组患者治疗前后血清IL-4、IFN-γ、CRP含量比较 治疗后，2组患者血清IL-4、IFN-γ、CRP含量均较治疗前明显改善(P<0.05)。与对照组比较，实验组血清IL-4、CRP含量明显较低，IFN-γ含量明显较高(P<0.05)。见表4。

表4 2组患者治疗前后血清IL-4、IFN-γ、CRP含量比较Tab.4 Comparison of IL-4， IFN-γ and CRP contents of before and after treatment between two groups ±s)

#P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group before treatment；*P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group after treatment

3 讨论

阑尾由于解剖结构特殊，极易出现梗阻致粘膜受损，细菌趁机侵入形成化脓性阑尾炎，引起阑尾肿胀、渗出，甚至波及腹膜，病情进展迅速，给患者带来很大痛苦[6]。近年来研究发现[7]，阑尾炎症状的出现不仅与细菌感染有关，还与其激发的细胞免疫，T淋巴细胞功能紊乱关系密切。资料显示[8]，Th17细胞是近年发现的细胞亚型，属于辅助型T细胞，其表型为CD4+RORγt+IL23R+CCR6+，能够促进IL-17、IL-21、IL-26等细胞因子的产生，参与加强炎症反应过程，同时诱导中性粒细胞聚集；CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)，起到抑制性免疫调节的作用，与Th17的作用相互拮抗，使炎症反应不至过度，感染状况下，机体内炎症反应与抗炎症反应同时存在，使得Th17/ Treg细胞失衡，免疫调节功能紊乱。奥曲肽为人工合成的八肽生长抑素类似物，目前多用于抑制胃肠道分泌，防止术后肠梗阻[9]，最新研究表明[10]，生长抑素类药物还具有免疫调节作用，调节Th细胞分化，影响Th1、Th2细胞间的比例，在自身免疫性疾病中具有治疗作用。

本研究结果显示，治疗后实验组Th17比例、Treg细胞比例、Th17/Treg 比值与对照组比较明显下降(P<0.05)，证实了奥曲肽确实能够改善Th17/Treg细胞失衡状态。曾有研究报道显示[11]，炎症发生时，Th17水平升高，能够促进IL-17的分泌，IL-17具有加强炎症反应的作用，Treg细胞对Th17细胞具有抑制作用，能够分泌IL-10因子来限制T细胞的活性，从而抑制过度炎症反应，因此炎症发生时Th17,Treg细胞会代偿性上调，而Th17上调更明显，使得Th17/Treg比值升高。奥曲肽具有免疫调节作用，一方面影响T细胞向Th17、Treg分化，另一方面对T细胞炎症因子的分泌也有抑制作用，能够调节Th17/Treg，使免疫功能恢复，防止机体损伤[12]。

RORγt因子是促进T细胞向Th17转化的主要转录因子，Foxp3是Treg细胞特异性的转录因子[13]。本研究结果显示，实验组RORγt、Foxp3因子mRNA表达水平明显降低(P<0.05)，提示奥曲肽可以通过下调RORγt、Foxp3因子的表达，来控制Th17细胞和Treg细胞的分化、增殖。

炎症因子直接参与炎症过程，本研究结果显示，实验组血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量与实验组明显较低(P<0.05)，提示奥曲肽能够通过调节相关细胞因子的分泌抑制炎症反应。资料显示[14]，IL-17是由Th17细胞分泌的细胞内粘附因子，IL-23对于其功能维持有重要作用，IL-10是由Treg细胞分泌的，2者均为功能性细胞因子；IL-6具有促进T细胞向Th17细胞分化的作用，而TGF-β作用正好相反，可以促进T细胞向TGF-β转化，直接影响Th17细胞和Treg细胞的平衡。

CRP与机体的免疫功能有关，能够反映炎症反应的程度。IL-4可以诱导Th2细胞的生成、IFN-γ则可以由Th1分泌，2者通常用来反映Th1/Th2细胞漂移情况。本实验结果显示，与对照组比较，实验组血清IL-4、CRP含量明显较低(P<0.05)，IFN-γ含量明显较高(P<0.05)，提示奥曲肽可以降低炎症反应的强度，抑制Th1/Th2细胞转移现象，促进Th17细胞/Treg细胞平衡的恢复。

本实验通过对急性化脓性阑尾炎患者Th17细胞、Treg细胞治疗前后相关指标的检测结果进行分析，证实了奥曲肽联合复合辅酶可以纠正化脓性阑尾炎患者Th17细胞/ Treg细胞的失衡状态，提高患者的免疫功能，影响患者预后。在下一步研究中，本课题组将对患者的预后进一步研究，为本实验所反映的现象做出全面论证和分析。

[1] Sammalkorpi HE,Mentula P,Leppäniemi A.A new adult appendicitis score improves diagnostic accuracy of acute appendicitis-a prospective study[J].BMC Gastroenterol,2014(14):114.

[2] 刘媛.小儿重症阑尾炎细菌移位早期干预的临床研究[D].太原：山西医科大学，2012.

[3] 刘文建，朱少峰，粱艳，等.奥曲肽联合红霉素治疗非绞窄性肠梗阻的疗效观察[J].河北医药，2013，35(16)：2461-2462.

[4] 冯文明，鲍鹰，费卯云，等.生长抑素对腹腔疾病引起的严重脓毒症双向免疫调节作用的研究[J].中华外科杂志，2010，48(22)：1743-1746.

[5] 孙玉成.老年急性阑尾炎患者的临床特征及外科诊疗方案[J].中国医药指南，2011，9(5)：117-118.

[6] 陈千益，欧敬民.阑尾炎术后切口感染的危险因素及预防[J].中华全科医学，2011，9(8)：1227-1229.

[7] 刘学军，檀碧波，韩杰，等.免疫抑制酸性蛋白与中性粒细胞/淋巴细胞比值及血清 C-反应蛋白检测对急性阑尾炎诊断的意义[J].河北医药，2008，30(11)：1660-1661.

[8] 陈和敏，申婷，游晶，等.Th17 细胞的分化，调节及其主要细胞因子和功能[J].现代生物医学进展，2015(1)：191-194.

[9] 纪璘，夏敏，郭继中.奥曲肽治疗肠梗阻临床观察[J].中国当代医药，2010 (3)：66-67.

[10] 杨清峰，张旭.生长抑素及其类似物在消化系统疾病中的临床应用 [J].淮海医药，2010，28(1)：3-4.

[11] 程正位，郑芳.溃疡性结肠炎患者外周血 Th17/Treg 免疫平衡的研究[J].临床内科杂志，2009 (10)：709-711.

[12] 王兴鹏，陆琪，吴建新，等.奥曲肽对急性坏死性胰腺炎炎症介质的调节作用[J].中华内科杂志，2000，39(3)：156-159.

[13] 庄园，邹全明.Th17：新兴的辅助 T 细胞[J].细胞与分子免疫学杂志，2008，24(9)：935-938.

[14] 施沛青，朱书，钱友存.IL-17 的信号传导及功能研究[J].中国细胞生物学学报，2011，33(4)：345-357.

(编校：王俨俨)

Effect of octreotide combined with compound coenzyme on Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg imbalance in patients with purulent appendicitis

TAN Zi-fang1, WU Wen-li1, WANG Jian1, JING sheng-hong2Δ

(1.Department of Pharmacy, The Ningxia Hui Autonomous Region People’s Hospital, Yinchuan 750021, China; 2.Department of General Surgery, The Ningxia Hui Autonomous Region People’s Hospital, Yinchuan 750021, China)

ObjectiveTo analyse the effect of octreotide combined with compound coenzyme on Th17/CD4+CD25+Foxp3+regulatory T cells imbalance in patients with purulent appendicitis.Methods150 patients with acute suppurative appendicitis were randomly divided into experimental group and control group, 75 cases in each group.Patients of two groups underwent appendicitis laparoscopic resection, then the control group were given conventional treatment and experimental group were given subcutaneous injection of octreotide on the basis of conventional treatment.Th17, CD4+CD25+Foxp3+regulation T cells (Treg), and Th17 /Treg balance were analyzed.ResultsCompared with control group, Th17/Treg imbalance of experimental group recovered better: the proportion of Th17, Treg, and Th17/Treg ratio decreased (P<0.05); the expression levels of related transcription factor, RORγt and Foxp3 mRNA decreased (P<0.05); serum cytokine (IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, IL-23 and TGF beta) and C-reactive protein (CRP) content decreased (P<0.05); serum interferon gamma (IFN-gamma) content increased (P<0.05).ConclusionOctreotide combined with compound coenzyme could correct Th17/Treg imbalance in suppurative appendicitis patients, improve the immune function of patients and affect the prognosis of patients.

suppurative appendicitis; octreotide; T helper 17 cell; regulatory T cell

谭子方，男，本科，副主任药师，研究方向：药品不良反应及临床药学，E-mail：tanzifang930@163.com；景生虹，通讯作者，男，本科，主任医师，研究方向：普外科，E-mail：nxjingshenghong@126.com。

R982

A

1005-1678(2015)07-0095-03