利拉鲁肽联合胰岛素治疗对1型糖尿病患者糖化血红蛋白、T淋巴细胞亚群及胰岛功能的影响研究

王震宇，张军，程洁，刘小曼，李向团

(唐山市中医医院 内分泌一科，河北 唐山 063000)



利拉鲁肽联合胰岛素治疗对1型糖尿病患者糖化血红蛋白、T淋巴细胞亚群及胰岛功能的影响研究

王震宇，张军，程洁，刘小曼，李向团

(唐山市中医医院 内分泌一科，河北 唐山 063000)

目的 探讨利拉鲁肽联合胰岛素治疗对1型糖尿病患者糖化血红蛋白、T淋巴细胞亚群及胰岛功能的影响。方法 收集唐山市中医医院收治的1型糖尿病患者46例，随机分为对照组和实验组，每组各23例。对照组根据患者的血糖水平给予重组人胰岛素控制血糖，实验组在对照组基础上予以利拉鲁肽治疗。治疗结束后，对所有患者的血清糖化血红蛋白、T淋巴细胞亚群、C肽(C-Peptide，CP)以及血糖水平进行检测。结果 治疗后与对照组相比，实验组患者的血清糖化血红蛋白水平较低(P<0.05)；CD4+T水平较高、CD8+T水平较低、CD4+/CD8+T比值较高(P<0.05)；实验组患者的空腹血糖(fasting plasma glucose，FPG)、餐后2 h血糖(2-hour postprandial blood glucose, 2 hPG)水平较低，CP、餐后2 hC肽(2-hour postprandial C-Peptide，2 hCP)水平较高(P<0.05)。2组患者肝肾功能比较差异无统计学意义。结论 利拉鲁肽联合胰岛素治疗能够显著降低1型糖尿病患者血清糖化血红蛋白水平、上升CD4+T水平、降低CD8+T水平，改善血糖水平，从而改善其胰岛功能。

利拉鲁肽；1型糖尿病；糖化血红蛋白；T淋巴细胞亚群；胰岛功能

糖尿病(diabetes mellitus，DM)严重威胁人类健康，已成为继肿瘤和心脑血管疾病之后的第三大重要杀手[1]，不仅严重影响患者生活质量，还给患者家庭带来了巨大的经济负担。目前普遍认为1型糖尿病(type1 diabetes mellitus，T1DM)是在遗传和环境因素共同作用下，由T淋巴细胞介导的器官特异性自身免疫性疾病，主要是由于免疫系统的异常，CD4+T和CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞对胰岛的浸润，引发胰岛炎症并导致对胰岛β细胞的损伤，使胰岛素分泌绝对减少，引起体内胰岛素绝对缺乏从而导致血糖持续升高，使机体产生胰岛自身抗体，从而使自身的胰岛细胞发生凋亡，最终导致该病的发生[2]。T1DM具有起病急、病情重、进展快、预后差等特点，且发病机制尚不明确，给治疗带来了很大困难。利拉鲁肽是一种人胰高糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)类似物[3]，GLP-1是正常机体所分泌的一种胃肠道激素，可以与靶器官结合而发挥作用，包括增强胰岛素敏感性、抑制餐后胰高血糖素的不适当升高、保护血管内皮等。美国临床内分泌医师协会第23届科学年会(AACE2014)上发布的2项研究显示，利拉鲁肽既可作为胰岛素的联合用药治疗1型糖尿病，也可作为非糖尿病肥胖患者的减肥用药[4]。研究显示[5]，GLP-1对高糖状态下的胰岛β细胞的重新定向分化具有一定的促进作用。本研究应用利拉鲁肽联合胰岛素治疗1型糖尿病患者，观察患者糖化血红蛋白(GHbAlc)、T淋巴细胞亚群及胰岛功能变化，探讨利拉鲁肽对于1型糖尿病的治疗作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集唐山市中医医院2014年9月～2015年6月收治的1型糖尿病患者患者46例，随机分为实验组和对照组。实验组23例，其中男性13例，女性10例，平均年龄(31.08±5.27)岁；对照组23例，男性12例，女性11例，平均年龄(32.11±5.15)岁。所有患者均符合2013年中华医学会糖尿病学分会，《中国1型糖尿病诊治指南》关于1型糖尿病的诊断标准[6]。本实验于2014年8月12日获得本院伦理协会许可，允许进行人体实验。2组患者一般资料相比无统计学意义。

1.2 纳入标准 所有患者符合1型糖尿病的诊断标准：从高血糖到出现酮症<1周以内；血糖>16 mmol/L；糖化血红蛋白水平<8.5%；空腹C肽小于100 pmol/L，餐后2 h C肽水平<170 pmol/L；BMI<25 kg/m2；所有患者无高血压、肾脏疾病以及心血管疾病；无合并其他影响糖代谢的疾病；患者年龄范围在18～49岁之间；所有患者同意进行试验措施，并签署知情同意书。

1.3 排除标准 排除不符合诊断标准的患者；排除合并有心脑血管疾病以及肝肾功能不全的患者；排除合并有其他免疫系统疾病以及造血系统疾病的患者；排除妊娠及哺乳期的妇女，排除不愿接受实验措施的患者。

1.4 方法

1.4.1 治疗方法：按照临床用药指南，2组患者均给予饮食治疗，并在此基础上根据患者的血糖水平给予一定重组人胰岛素控制血糖。

胰岛素使用方法：所有患者通过皮下持续泵入短效(R)生物合成人胰岛素[诺和诺德(中国)制药有限公司]，使用公式0.5×体质量(kg)计算患者24 h所需使用的胰岛素总量，监测血糖，并依据监测结果动态调整胰岛素用量。实验组患者在此基础上给予利拉鲁肽1.5 mg/d，皮下注射，1次/天，治疗连续8周，治疗期间注意患者饮食及血糖的控制情况，防治低血糖事件发生。

控制标准：晨起空腹血糖(fasting plasma glucose，FBG)3.9～6.1 mmol/L，餐后2 h血糖(2-hour postprandial blood glucose，2 hPG)4.0～7.8 mmol/L，睡前血糖4.0～6.5 mmol/L。

1.4.2 患者糖化血红蛋白水平检测：治疗前后清晨空腹取所有患者静脉血5 mL，离心后分离血清，在-80 ℃条件下保存待检。采用2000/DCA2000+糖化分析仪(上海雅纯生物科技有限公司)检测，严格按照试剂盒说明书的步骤，对患者外周血糖化血红蛋白水平(glycosylated hemoglobin，HBAlc)进行检测。

1.4.3 T细胞亚群水平检测：所有患者治疗前后取清晨空腹静脉血5 mL，采用G3250荧光法检测系统(南京生兴生物技术有限公司)检测患者血T细胞亚群CD4+T、CD8+T水平，并计算其比值。具体步骤如下：患者血液静置2 h后，3000 r/min离心，取上清，分离出单个核细胞后洗涤2次，稀释1000倍调整细胞浓度，加入单抗体反应5 min，后加入荧光标记抗体，采用γ射线计数器[北京核仪器厂(261厂)]系统计数。CD4+T、CD8+T单抗，单抗鼠荧光标记抗体均购于上海信裕生物科技有限公司。

1.4.4 血糖以及血清C肽水平检测：所有患者治疗前后取空腹以及餐后2 h静脉血5 mL，采用放射免疫法，严格按照C肽放免试剂盒(上海江莱生物科技有限公司)说明书步骤测定患者血清C肽(C-Peptide，CP)水平。采用Selectra E全自动生化分析仪(上海玉研科学仪器有限公司)对患者的治疗前后的FPG以及2hPG水平进行检测。

2 结果

2.1 患者一般情况比较 实验组与对照组患者在男女比例，平均年龄，平均病程以及BMI指数等方面的资料差异无统计学意义，见表1。

表1 2组患者一般情况比较±s)Tab.1 Comparison of baseline between two ±s)

2.2 治疗前后患者糖化血红蛋白水平比较 与治疗前相比，治疗后2组患者的糖化血红蛋白水平均显著下降(P<0.05)。治疗后，实验组患者的糖化血红蛋白水平低于对照组(P<0.05)，见表2。

表2 治疗前后2组患者患者糖化血红蛋白水平比较±s)Tab.2 Comparison of HbA1c between two ±s)

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.3 2组患者治疗前后CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+T水平比较 与治疗前相比，治疗后2组患者的CD4+T水平较高、CD8+T水平较低、CD4+/CD8+T较高(P<0.05)。治疗后，实验组患者的CD4+水平高于对照组、CD8+T水平低于对照组、CD4+/CD8+T高于对照组(P<0.05)，见表3。

表3 治疗前后2组患者CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+T水平比较Tab.

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.4 治疗前后患者FPG、2hPG以及CP、2hCP水平比较 与治疗前相比，治疗后2组患者FPG、2 hPG水平均显著下降，CP、2 hCP水平均显著升高(P<0.05)；治疗后，实验组患者的FPG、2 hPG水平均低于对照组，CP、2hCP水平均高于对照组(P<0.05)，见表4。

表4 治疗前后2组患者FPG、2hPG以及CP、2hCP水平比较Tab.4 Comparison of FPG, 2hPG, CP and 2hCP between two ±s)

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.5 治疗前后患者肝肾功能比较 治疗前后2组患者肝肾功能比较差异无统计学意义，提示利拉鲁肽连续应用8周，并未对机体造成肝肾功能的损害。见表5。

表5 治疗前后2组患者肝、肾功能水平比较±s)Tab.5 Comparison of liver and kidney function between two ±s)

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

3 讨论

据统计，目前我国20岁以上成年人的糖尿病患者比例约为全人口的1/10，是世界上糖尿病患病人数最多的国家，据国际糖尿病联盟估计，到2030年全球将有近5亿的糖尿病患者。糖尿病是严重威胁患者身体健康，影响患者的生活质量的慢性疾病，1型糖尿病是胰岛素绝对缺乏的自身免疫性疾病。研究认为，1型糖尿病的主要发病原因是免疫相关性β细胞的破坏[7]。临床上1型糖尿病的治疗仍然需要立即进行外源性胰岛素替代治疗，并且需要终生治疗。及时的施替代治疗和保护残存胰岛细胞功能免遭进一步破坏已成为糖尿病治疗的首要目的。

本研究表明，经药物治疗后，2组患者的糖化血红蛋白(GHbAlc)水平均显著下降(P<0.05)，与对照组相比，实验组患者的GHbAlc水平较低(P<0.05)。GHbAlc是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物，GHbAlc越高表示血糖与血红蛋白结合越多，糖尿病病情越重。由于GHbAlc比较稳定，能较全面地了解过去一段时间的血糖控制水平，是糖尿病血糖控制监测的指标和主要手段[8]。其与血糖浓度成正比，对GHbAlc水平的检测可以观测到120d之前的血糖浓度，通常可以反映患者近8～12周的血糖控制情况。研究表明，血糖控制良好的糖尿病患者GHbAlc应为<7.0%。本研究结果显示，本实验的治疗措施能够较好的控制血糖水平。

实验和临床研究证明，自身免疫性1型糖尿病是遗传易感个体中T细胞介导的选择性破坏胰腺β细胞引起的一种自身免疫性疾病[9]，Th1和Th2亚群是机体在特异性抗原的刺激下，发生相对优势转化的结果，其过程是可逆性的，多数Th细胞尚处于Th0阶段，这种转化满足了机体对不同抗原刺激应答的需要。1型糖尿病中，Th1细胞介导了对胰岛β细胞的破坏作用，还伴有细胞免疫与体液免疫的异常。有研究表明，1型糖尿病患者体内存在多种针对胰岛细胞自身抗原的自身抗体，可作为l型糖尿病的免疫诊断标记物。临床目前最为常用的是胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛素自身抗体(IAA)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)和胰岛细胞瘤相关蛋白(IA)-2抗体，此外，新近发现ZnT8A和胰岛特异性的葡萄糖及一磷酸酶催化亚基相关蛋白抗体(IGRPA)可能在诊断上也具有重要的价值[10]，对于1型糖尿病早期诊断和早期治疗具有重要意义。本研究表明，1型糖尿病患者中体液免疫与细胞免疫的异常关系密切，这与之前的研究结果一致[11-14]。研究证明，T1DM患者的胰岛细胞周围有CD4+和CD8+T细胞以及自然杀伤细胞等单个核细胞的浸润，这也是自身免疫性疾病的一个特征[15]，CD4+细胞能够诱发胰岛细胞发生免疫应答，并分泌细胞因子，使β细胞发生，并介导自身免疫性胰岛炎。同时，CD4+还能够辅助B淋巴细胞产生抗体。研究表明1型糖尿病发病过程始终存在淋巴细胞亚群失衡，CD4+Th1细胞异常激活和CD8+T细胞缺陷在1型糖尿病病理改变中起重要作用[16]。本研究表明，治疗后，2组患者的CD4+水平均显著上升、CD8+水平均显著降低、CD4+/CD8+显著上升，与治疗前相比，差异具有统计学意义(P<0.05)；与对照组相比，实验组患者的CD4+水平上升较为显著、CD8+水平下降较为显著、CD4+/CD8+上升显著，差异具有统计学意义(P<0.05)，表明利拉鲁肽联合胰岛素能够显著的抑制自身免疫的发生，抑制对胰岛β细胞的破坏，对1型糖尿病的治疗起到了重要的作用。

综上所述，利拉鲁肽联合胰岛素治疗能够显著降低1型糖尿病患者血清糖化血红蛋白水平、上升CD4+水平、降低CD8+水平，改善血糖水平，改善其胰岛功能。

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(编校：吴茜，王俨俨)

Effect of liraglutide combined with insulin on HbA1c, T lymphocyte subsets and islet function in patients with type 1 diabetes

WANG Zhen-yu, ZHANG Jun, CHENG Jie, LIU Xiao-man, LI Xiang-tuan

(Department of Endocrinology, Tangshan Traditional Chinese Medicine Hospital, Tangshan 063000, China)

ObjectiveTo investigate the effect of liraglutide combined with insulin on the HbA1c, T lymphocyte subsets and islet function in patients with type 1 diabetes.Methods46 cases from endocrinology department of Tangshan Traditional Chinese Medicine Hospital with type 1 diabetes were selected and randomly divided into two groups each group had 23 patients. Control group were given recombinant human insulin to control blood sugar according to the blood glucose level, and experimental group were given liraglutide on the basis of control group. HbA1c, T lymphocyte subsets, C-Peptide (CP) and islet function were compared after treatment.ResultsCompared with control group after treatment, HBAlc level in experimental group was lower (P<0.05); CD4+T was higher, CD8+T was lower, and CD4+/CD8+T was higher (P<0.05); the fasting plasma glucose (FPG) level was lower (P<0.05); 2-hour postprandial blood glucose (2 hPG) was lower (P<0.05); CP and 2-hour postprandial C-Peptide (2 hCP) were higher (P<0.05). There was no significant difference in liver and kidney function between two groups.ConclusionLiraglutide combined with insulin could significantly reduce serum glycated hemoglobin level, increase CD4+T level and reduce CD8+T level, improve islet function in patients with type 1 diabetic.

liraglutide; type 1 diabetes; glycated hemoglobin; T lymphocyte subsets; islet function

王震宇，男，本科，主治医师，研究方向：内分泌，E-mail：wanginsanity@sina.cn。

R587

A

1005-1678(2015)07-0066-04