冠心病患者可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1的表达变化及临床意义

王韶屏，廖 玮，王 健，李世英，李 芳，程姝娟

(1.首都医科大学附属北京安贞医院心内科28病区，北京市心肺血管疾病研究所，北京 100029；2.四川省医学科学院·四川省人民医院，四川 成都 610072)

冠心病患者可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1的表达变化及临床意义

王韶屏1，廖 玮2，王 健1，李世英1，李 芳1，程姝娟1

(1.首都医科大学附属北京安贞医院心内科28病区，北京市心肺血管疾病研究所，北京 100029；2.四川省医学科学院·四川省人民医院，四川 成都 610072)

目的 观察冠心病患者血浆可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1(sLRP1)浓度的变化，并分析其与基质金属蛋白酶9(MMP-9)和高敏C反应蛋白(hsCRP)浓度变化的相关性。方法 选取2013年8～10月北京安贞医院心内科住院的12例稳定型心绞痛(SAP)、32例急性冠脉综合征(ACS)，同期冠脉造影阴性的患者8例为对照组。于介入术前空腹检测血浆sLRP1、MMP-9和hsCRP的浓度，比较三组之间差异。介入术后第一天空腹检测患者血浆sLRP1，并与术前相比较，分析冠心病患者sLRP1与MMP-9、hsCRP的相关性。结果 术前ACS组sLRP1、MMP-9和hsCRP浓度显著高于SAP组和对照组，差异有统计学意义(均P< 0.01)，而SAP组和对照组比较差异无统计学意义(P> 0.05)。ACS组患者介入术前和术后sLRP1差异无统计学意义(P> 0.05)。ACS患者sLRP1与hsCRP浓度显著正相关(r=0.713，P= 0.000)，与MMP-9浓度无相关性。结论 sLRP1可能是反映ACS炎症状态的一个指标。

急性冠脉综合征；炎症；可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1；基质金属蛋白酶9；C反应蛋白

冠状动脉内不稳定粥样斑块破裂后导致急性血栓形成是急性冠脉综合征(ACS)的病理基础，常伴随着大量的单核-巨噬细胞的激活，炎症因子的释放，如C反应蛋白(CRP)[1]和基质金属蛋白酶9(MMP-9)[2]。低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP1)是低密度脂蛋白受体(LDLR)家族的成员之一，具有抗炎作用，可保护血管的完整性[3]。除了锚定于细胞膜的LRP1外，在人的血浆和脑脊液中还发现有可溶性的LRP1(sLRP1)[4]。研究显示，sLRP1是一种与炎症相关的蛋白，可在慢性炎症性疾病，如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮患者血浆中显著增高，而sLPR1本身也可能具有一定的炎症调控作用[5]。目前尚不清楚sLRP1是否和冠心病，尤其是ACS具有相关性。本研究观察了冠心病患者血浆sLRP1浓度的变化，探讨sLRP1与MMP-9和CRP的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年8～10月北京安贞医院心内科28病房收治的12例稳定型心绞痛(SAP)和32例ACS组。诊断均符合2012年中国经皮冠状动脉介入治疗指南[6]，所有患者均接受了介入治疗。对照组8例为冠脉造影阴性，排查冠心病的患者。所有入选患者均排除2周内急慢性感染、风湿免疫系统疾病史、恶性肿瘤、严重肝脏疾病、严重肾脏疾病、心肌炎、心肌病、严重的心力衰竭(纽约心脏病协会分级IV级)以及近一个月内他汀类药物服用史者。三组一般资料比较差异无统计学意义(表1)。本试验符合伦理委员会相关规定，入选患者均签署知情同意书。

表1 三组患者一般资料比较

BMI：体重指数；SBP：收缩压；DBP：舒张压；FBS：空腹血糖；eGFR()：肾小球滤过率。

1.2 方法 ①常规术前检查，术前生化指标包括高敏C反应蛋白(hsCRP)(免疫比浊法)。②术前以及介入术后第一天空腹抽取肘静脉血，置于含肝素抗凝剂的离心管中，离心(3000 r/min，10 min)，取血浆分装至EP管中，-80 ℃保持备用。sLRP1 96孔检测试剂盒(Corning Inc.，Corning，NY，USA)包埋有0.5 μg/孔的GST-RAP，5%BSA孵育1小时阻断非特异性结合位点。每孔加入不同浓度的sLRP1(1～500 ng)，4 ℃孵育1小时后，20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，pH 7.4，and 0.1%Tween-20洗涤5次，加入LRP1特异性抗体8 g1，4 ℃孵育1小时，再次洗涤5次后，与HRP标记的二抗4 ℃孵育1小时，彻底洗涤后加入底物显色。酶标仪450 nm波长读取OD值。标准曲线在20～500ng呈线性(r2>0.95)。患者血浆样本稀释后进行检测分析。③术前空腹采血检测MMP-9，操作步骤按照试剂盒说明进行。

1.3 统计学方法 采用SPSS 18.0 统计软件包进行。计量资料以均数±标准差表示，符合正态分布的两组间比较采用t检验，多组间比较选用方差分析及SNK法；不符合正态分布的计量资料组间比较采用非参数检验。计数资料比较采用卡方检验。相关分析时，服从双变量正态分布的计量资料采用Pearson方法，不服从双变量正态分布资料采用Spearman法。P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组sLRP1、hsCRP及MM-9比较 ACS组术前MMP-9、hsCRP及血浆sLRP1浓度显著高于SAP组和对照组，术后sLRP1浓度显著高于SAP组，差异均有统计学意义(P< 0.01)。SAP组和对照组血浆sLRP1、MMP-9和hsCRP浓度差异均无统计学意义(P> 0.05)，见表2。

2.2 ACS患者sLRP1与MMP-9、hsCRP的相关性 ACS组患者血浆sLRP1与MMP-9浓度无相关性 (r=-0.317，P= 0.077)，见图1a；而与hsCRP显著正相关 (r=0.713，P= 0.000)，见图1b。

表2 三组sLRP1、hsCRP及MMP-9比较

*与ACS组比较，P< 0.01

图1 ACS组介入术前血浆sLRP1与MMP-9、hsCRP的相关性分析

3 讨论

sLRP1被发现于20世纪末，其生物学意义一直备受关注。近年的研究表明，sLRP1可能是急慢性炎症性疾病的一个生物标记物。如Wygrecka等[7]发现，在急性呼吸窘迫征患者的支气管肺泡灌洗液中有sLRP1浓度的显著增高，并与疾病的严重程度相关。Gorvoy等[5]也证实，与正常对照和骨性关节炎患者相比，风湿性关节炎和系统性红斑狼疮患者的血浆sLRP1浓度显著增高。ACS的病理机制涉及不稳定斑块的破裂、血栓形成和大量炎症因子的释放。已有多个炎症因子已被证实与其密切相关。我们的实验结果首次证实，sLRP1浓度也与ACS密切相关，但与SAP无关联。但是在SAP和ACS患者行经皮冠状动脉血管成形术后sLRP1水平较术前无显著增高，说明斑块破裂本身并不能引起sLRP1增高，而提示sLRP1的增高可能是触发斑块破裂的原因。

与对照组和SAP患者相比，ACS患者血浆hsCRP和MMP-9浓度显著升高，该结果与之前的研究报道一致。CRP是一种急性期蛋白，可反应患者体内炎症的活动程度，包括动脉粥样硬化斑块的急性炎症过程，是预测未来急性心血管事件发生的独立危险因子，是ACS预后的一个指标[1]。MMP-9是基质金属蛋白酶家族中的一个蛋白分子，可降解斑块处的纤维帽，促使斑块破裂发生。MMP-9水平反映了斑块的稳定性，是冠心病患者危险分层的一个指标[2]。既往的研究发现，ACS患者MMP-9的升高水平与发病当时hsCRP的升高水平无相关性，与之后的hsCRP峰值水平也无相关性[2]。hsCRP和MMP-9可能是与动脉粥样硬化斑块发生、发展及破裂有着不同关系两个蛋白分子。进一步分析ACS患者sLRP1与hsCRP和MMP-9浓度的相关性发现，sLRP1和hsCRP具有显著的相关性，而与MMP-9无关。该结果提示sLRP1的生物学意义可能与hsCRP类似，是反映机体炎症状态的一个指标。由于研究样本量有限，尚不明确sLRP1对冠心病患者远期预后的影响。

综上，本研究提示sLRP1可能是反映ACS患者炎症水平的一个指标，其与动脉粥样硬化的发生、发展以及斑块的稳定性有待进一步研究。

[1] Cheng JM，Oemrawsingh RM，Garcia-Garcia HM，et al.Relation of C-reactive protein to coronary plaque characteristics on grayscale，radiofrequency intravascular ultrasound，and cardiovascular outcome in patients with acute coronary syndrome or stable angina pectoris (from the ATHEROREMO-IVUS study)[J].Am J Cardiol，2014，114(10)：1497-1503.

[2] 张清队，蔡力，陶剑虹，等.急性冠脉综合征患者白介素-18及基质金属蛋白酶-9检测的意义[J].实用医院临床杂志，2008，5(3)：39-40.

[3] Wang S，Subramanian V，Lu H，et al.Deficiency of recepto-associated protein attenuates angiotensin II-induced atherosclerosis in hypercholesterolemic mice without influencing abdominal aortic aneurysms[J].Atherosclerosis，2012，220(2)：375-380.

[4] Liang F，Jia J，Wang S，et al.Decreased plasma levels of soluble low density lipoprotein receptor-related protein-1(sLRP) and the soluble form of the receptor for advanced glycation end products(sRAGE) in the clinical diagnosis of Alzheimer’s disease[J].J Clin Neurosci，2013，20(3)：357-361.

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[6] 中华医学会心血管病学分会介入心脏病学组，中华心血管病杂志编辑委员会.中国经皮冠状动脉介入治疗指南2012(简本)[J].中华心血管病杂志，2012，40(4)：271-277.

[7] Wygrecka M，Wilhelm J，Jablonska E，et al.Shedding of low-density lipoprotein receptor-related protein-1 in acute respiratory distress syndrome[J].Am J Respir Crit Care Med，2011，184(4)：438-448.

Expression and clinical significance of soluble low density lipoprotein receptor related protein 1 in patients with coronary artery disease

WANG Shao-ping1，LIAO Wei2，LI Shi-ying1，WANG Jian1，LI Fang1，CHENG Shu-juan1

(1.The 28thWard，Department of Cardiology，Beijing Anzhen Hospital，Capital Medical University & Beijing Institute of Heart，Lung and Blood Vessel Diseases，Beijing 100029，China.2.Sichuan Academy of Medical Sciences & Sichuan Provincial People’s Hospital，Chengdu 610072，China)

CHENGShu-juan

Objective To observe the changes of soluble low density lipoprotein receptor related protein 1(sLRP1) concentration in coronary artery disease and its association with matrix metalloproteases-9 (MMP-9) and C reactive protein (CRP).Methods Patients with stable angina pectoris (SAP，n=12)，acute coronary syndrome (ACS，n=32) and control subjects (n=8) from August to October，2013 in Beijing Anzhen Hospital were enrolled in the study.The plasma concentration of sLRP1，MMP-9 and hsCRP was tested by specific ELISA analysis.Differences in these three markers were compared among the three groups.Furthermore，sLRP1 in fasting plasma was detected on the first day after intervention and compared to before intervention，and explore the correlation between the SLRP1 and MMP-9、hsCRP.Results The plasma concentration of sLRP1 was increased in patients with ACS when compared to patients with SAP (P<0.01) and the control group (P<0.01).However，no significant difference was found between the SAP group and control group.The concentration of MMP-9 and hsCRP were increased in the ACS group compared to the SAP and control groups.However，there is no significant difference between the SAP and control groups.The concentration of sLRP1 was correlated to hsCRP significantly (P= 0.000) but not MMP-9.Conclusion sLRP1 may reflex inflammatory status of patients with acute coronary syndrome.

Acute coronary syndrome；Inflammation；Soluble low density lipoprotein receptor related protein 1；Matrix metalloproteases-9；C reactive protein

国家自然科学基金青年科学基金资助项目(编号：81000131)；北京市自然科学基金资助项目(编号：7122058)

程姝娟

R541.4

A

1672-6170(2015)04-0030-03

2015-04-25；

2015-05-12)