132例女性不孕患者细胞遗传学分析*

周伟 李新伟 许世敏

不孕不育是常见的生育异常疾病，目前，不孕不育问题已经成为世界性的医学和社会问题，在中国保守的传统观念以及家庭、社会因素的压力之下，不但严重影响患者的身心健康， 而且会带来诸多社会问题[1-2]。据统计，已婚育龄夫妇中由女性因素引起的不孕症占50%~60%[3]。造成女性不孕的病因包括生殖系统病变、内分泌及免疫异常以及遗传因素等[4-5]，其中遗传因素主要是由染色体异常造成。本文对132例女性不孕患者进行染色体核型分析，探讨女性不孕与染色体异常之间的关系，从而为相关疾病诊断和治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 根据不孕不育症诊断标准，2010-2014年在附属医院确诊为不孕不育症的患者中随机选取132例女性患者作为研究对象，女性患者的配偶均正常，患者年龄23~46岁，平均（31.7±6.6）岁。临床表现为闭经、自然流产、畸胎、早产、新生儿不明原因死亡史或原发不孕等。

1.2 研究方法 首先征得患者同意并签署知情同意书之后，在无菌条件进行常规方法采外周血2 mL，然后进行肝素抗凝，接种于RPMI1640培养基中（小牛血清20%，PHA 4%），置于37 ℃恒温箱培养72 h，终止培养前40 min加入秋水仙素至终浓度为0.06 μg/mL，常规方法制片，胰酶法G显带。每个患者计数30个染色体中期分裂相，分析5个核型，对异常核型者加倍进行核型分析，必要时做C显带分析，核型异常按《人类细胞遗传学国际命名体制（ISCN）（1995）》的有关规定加以描述。

2 结果

在本次调查的不孕不育患者中共检出10例染色体核型异常患者，检出率为7.57%。其中包括7例性染色体异常和3例常染色体异常，在患者中分别占5.30%和2.27%（具体畸变情况见表1）。其中，性染色体异常中以特纳综合征最常见，占异常核型40.0%，另有1例超雌综合征嵌合体，X染色体结构畸形包括短臂缺失和等臂染色体各1例，在常染色体异常核型中，3例均为结构畸变。

3 讨论

不孕不育是指在夫妻婚后有正常性生活，未采取避孕措施，同居1年后依然未怀孕者或者未获得存活的婴儿的疾病。快速发展的社会，造成人们的生活压力增加、环境恶化严重，加之日益增多的人为流产患者[6-7]，造成不孕不育的发生率有逐年上升的趋势[3]。受孕生育是一个复杂的生理过程，夫妻双方均可造成不孕，其中由女方因素十分复杂[8]，主要包括内分泌调节轴调节异常、生殖系统发育异常以及月经周期异常等生理因素[9-10]，此外，遗传因素也是造成女性不孕的重要原因，一般临床上较常见的是染色体畸变。染色体畸变是指染色体数目的增减或结构的改变，所以分为染色体数目异常和结构畸变两大类[11]，虽然染色体畸变发生率不高，但机制复杂，常常涉及多种临床表现。女性生殖细胞中染色体结构和数目的改变，往往导致女性卵巢发育不全、闭经、女性第二性征发育异常等，据统计，不孕不育患者中染色体异常的发生率为0.8%~12.5%之间[12]，本文的检出率为7.75%，属于正常水平。染色体异常在女性不孕不育中所占比例虽然不高，但由于涉及遗传物质的改变，往往很难根治，并且有可能将畸变的染色体传递给后代，造成后代患病，所以对患者及后代影响很大。

表1 染色体异常发生情况表

正常女性有44条常染色体和2条X染色体，其中X染色体是女性性分化与成熟的决定因素，当不良因素造成X染色的数目或结构发生异常时，则影响女性生殖腺以及第二性征的发育，从而造成不同程度的生殖障碍和畸形。本研究共检出7例X染色体结构异常核型，占总异常的70.0%，患者性腺发育以及第二性征均异有不同程度的异常，普遍表现为闭经、性腺发育不全以及异常体征等。X染色体异常核型中最常见的是特纳综合征，其发生机制在于减数分裂过程中X染色体发生不分离，造成部分卵子中X染色体丢失，与精子结合后形成单体型的合子，一般常见核型为45，X单体型，如果X染色体不分离发生在胚胎期，则或形成45，X/46，XX的嵌合型，嵌合型特纳综合征患者临床症状的轻重取决于嵌合细胞的比例，嵌合型细胞愈多，则症状越严重。本研究检出的4例均为单体型，在全部异常核型中占40.0%，在性染色异常中占57.14%，是检测到的所有的异常核型中数量最多的核型。特纳综合征患者一般表现为原发闭经，身材矮小，第二性征和性腺发育不全，索状卵巢等特征等[13]。从理论上推测，该病患者妊娠结果正常的可能性占一半，另外一半往往由于核型异常造成流产、死胎、畸形等。

在X染色体着丝粒附近的长臂和短臂区域，有决定女性性征的基因，若该区域结构发生改变，则患者的性征发育也会出现异常[14]，一般常见的X染色体结构异常包括重复和缺失，患者的体征以及不孕不育的异常程度与发生重复和缺失片段的长短及位置有关。其中，X染色体着丝粒异常分裂会形成等臂X染色体，其中以等长臂X染色体较为常见，常导致女性患者身材矮小，性腺发育不全[15]。本研究中发现1例等长臂患者，核型为46，X，i（Xq），患者因原发闭经就诊。有学者研究发现[4]，决定性腺发育的基因在Xp11和Xq27-28，决定体征的基因在Xp和Xq21-26，这些区段基因丢失将会造成与特纳综合征患者相似的体征，本研究发现1例短臂缺失，核型为46，XX，del（X）（p21），患者表现为原发闭经、性腺发育不全。

女性不孕不育也有可能是由常染色体异常造成的，其中最常见的畸变类型是染色体易位和倒位，由于遗传物质数量未发生明显变化，所以一般无遗传学效应，患者表型正常。但是由于其染色体本身发生了结构重排，所产生的配子携带了异常的染色体，从而导致患者生育异。易位染色体可以干扰正常染色体减数分裂的配对或分离，形成核型异常的卵子，其中平衡异位患者所产生的生殖细胞有18种核型，与正常配子结合后，除1种为完全正常核型外，其余胚胎核型均异常，其中包括1种平衡易位核型。平衡易位患者在临床上常表现为反复的早期流产或胚胎停育，少数患者能够生育，但一般都是染色体异常胎儿[16]。曾有研究指出，群体中的罗伯逊易位以 der（13；14）和 der（14；21）居多[17]，本文2例染色体易位均为der（14；21），临床表现为反复的自然流产。9号染色体易位在男女不孕不育患者中均属较常见核型，有学者认为在9号染色体的p24.1位点上有松弛素，该基因既与女性的卵泡发育与成熟过程，也能影响男性的精子运动与穿卵能力，从而影响妊娠，一般临床表现为原发不孕、流产和胚胎停育等。本研究检出1例inv（9），表现为多次习惯性流产。

研究结果表明，女性不孕不育与染色体畸变关系密切，当患者有原发性闭经、性腺发育异常及反复流产等临床症状时，应进行细胞遗传学检查，并为患者者提供相应的生育指导。

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