黄芪桂枝五物汤对肩周炎兔模型羟脯氨酸与总蛋白含量测定的实验研究＊

董 琪 昝 强 铁一局西安中心医院 （西安710054）

肩关节周围炎又称粘连性肩关节炎，属中医“肩痹”、“肩凝”范畴，肩周炎好发于40岁以上病患，一般女性多于男性。其特征是肩部疼痛和肩关节活动障碍逐渐加剧。本病起病缓慢，病程较长，一般1年左右，较长者可达1～2年，属自限性疾病，但随着现代生活节奏的加快，尤其是工作学习时电脑的普及，使得该病患者普遍性、年轻化，如果延迟治疗或者治疗不当，都会给患者造成很大痛苦及不便。为了给临床治疗肩周炎提供理论及实验依据，通过对兔子持续冰敷加机械劳损的方法造模［1］，该模型中兔子肩部瘢痕匀浆中的羟脯氨酸、总蛋白等含量升高［2］，我们通过加用黄芪桂枝五物汤，来影响其瘢痕匀浆中羟脯氨酸及总蛋白的含量，达到治疗肩周炎的目的，具体报道如下。

1 材料及方法 1.1 药 物 黄芪桂枝五物汤组成：黄芪、芍药、桂枝各9g，生姜18g，大枣4枚，由陕西中医学院第一附属医院药剂科提供，将药物煎服前先预浸 ，冷水浸泡30min后煎煮，用水量以漫过药面3～5cm，每剂药煎煮2次，每次煎得量约100～150mL，两次混合小于300mL，加蒸馏水至300mL留用。

1.2 实验动物及饲料 健康家兔54只，雌雄不分，兔龄4～6月，体重2.5±0.5g，由中国人民解放军第四军医大学实验动物养殖场提供。基础饲料由大麦粉20%，豆粉20%，玉米粉16%，麸皮16%，脱水菜（除去水分的包心菜）10%，鱼粉10%，食盐2%，酵母1%，其组成基本符合兔子常规饮食，由第四军医大学实验动物养殖场提供。

1.3 动物模型制备 借鉴文献［1－2］的造模方法进行造模。选取4～6月的健康大白兔54只，雌雄不分，体重2.5±0.5kg。除正常组外，各组均取兔右侧肩部外侧以Na2S脱毛，脱毛面积7cm×7cm。使兔俯卧，后肢和左前肢固定于兔台，右前肢上臂与水平摇床固定连接。以280次／min频率、1.5cm振幅平行摇动肩关节，每天持续8h，连续3d；然后将其仰卧固定于免笼上，将肩袖袋（自制）以水浸湿后装冰块（每块3cm×3cm×1.5cm，每袋每次装4块）外敷兔右肩部，当冰块融化将尽，及时更换，每天持续8h，连续3d。兔子左前肢呈轻度“外翻”畸形，左前肢活动明显受限，可见轻度肿胀，疼痛反应增强，局部软组织肉眼可见不同程度的充血，且进食量及活动量减少，毛发有部分脱落。正常组造模期间正常饲养。第一次摇动家兔肩关节当日记为实验第1d。

1.4 实验分组及用药 适应性饲养5d后，随机将54只大白兔随机分为3组，正常组18只、模型组18只、实验组18只。正常组常规饲养，不做干预处理；模型组：造模结束后，常规饲养；实验组：按人和动物间体表面积折算的等效剂量比值计算用量给药。

1.5 标本处理及观察指标 标本处理：分别在造模成功后第7d、第14d、第21d将各组家兔分批处死，每组每批处死6只。用10%水合氯醛按2mL／kg麻醉后，取肱二头肌长头腱、冈上肌、冈下肌靠近关节囊的肌腱部分待检，所取组织块在冰面上用氯化钠液漂洗干净，除去血迹，滤纸吸干，称重，按10%的比例往组织中加入匀浆介质，用眼科剪于冰水浴中剪碎组织块，然后在冰浴中超声匀浆30s，之后用冷冻离心机2000rpm、4℃离心10min，取上清液送检。最后腹腔动脉放血处死。待检标本置于－70℃冰箱中保存留用，待收集所有标本后集中处理。

观察指标：每天称重1次，每日观察兔子的生长情况，并记录每日动物饲料的消耗情况。用生化检测法检测组织中羟脯氨酸及总蛋白的含量。

1.6 统计学方法 数据处理采用SPSS 17.0统计软件进行统计。各组实验数据均采用均数加减标准差（±s）表示，先进行正态分布检验，继而进行方差齐性检验，方差不齐用非参数检验判定组间差异，进行多组样本均数两两之间的比较（P＜0.05两组有统计意义，说明两组有差异）。

2 结 果 2.1 一般情况观察 2.1.1正常组一般情况：实验过程中兔子生长状况良好，毛发光泽，体重变化不明显，动作自如，反应灵敏，排泄物正常，未出现疾病及死亡情况。

2.1.2 模型组一般情况：造模后兔子左前肢呈轻度“外翻”畸形，左前肢活动明显受限，可见轻度肿胀，疼痛反应增强，局部软组织肉眼可见不同程度的充血，且进食量及活动量减少，毛发有部分脱落。

2.1.3 实验组一般情况：造模后一般情况大致同模型组。用药1周后家兔左前肢组织肿胀、活动量、日进食量、疼痛刺激及毛发光泽情况均逐渐好于模型组，而差于正常组。

2.2 检测结果 2.2.1用药1周后，每组随机处死6只，检测其组织羟脯氨酸含量和总蛋白质含量。模型组羟脯氨酸含量和总蛋白质含量明显高于正常组，两组比较有差异（P＜0.05）；实验组羟脯氨酸含量和总蛋白含量明显低于模型组，两组比较有差异（P＜0.05）；实验组羟脯氨酸含量和总蛋白含量明显高于正常组，两组比较有差异（P＜0.05）；见表1。

表1 1周后总蛋白质含量和羟脯氨酸含量比较（±s）

表1 1周后总蛋白质含量和羟脯氨酸含量比较（±s）

注：与正常组比较，△P＜0.05，▲ P＜0.05；与模型组比较，◇P＜0.05

）6 2.53±0.44 18.64±3.27模型组 6 5.32±0.48△ 30.93±3.14△实验组 6 3.98±0.47◇▲ 23.97±3.49正常组◇▲

2.2.2 用药2周后，每组随机处死6只，检测其组织羟脯氨酸含量和总蛋白质含量。模型组羟脯氨酸含量和总蛋白质含量明显高于正常组，两组比较有差异（P＜0.05）；实验组羟脯氨酸和总蛋白含量明显低于模型组，两组比较有差异（P＜0.05），实验组羟脯氨酸含量和总蛋白含量明显高于正常组，两组比较有差异（P＜0.05）。见表2。

表2 2周后总蛋白质含量和羟脯氨酸含量比较（±s）

表2 2周后总蛋白质含量和羟脯氨酸含量比较（±s）

注：与正常组比较，△P＜0.05，▲P＜0.05；与模型组比较，◇P＜0.05

）6 2.69±0.48 16.64±3.02模型组 6 5.56±0.51△ 31.87±3.42△实验组 6 3.21±0.32◇▲ 23.07±2.41正常组◇▲

2.2.3 用药3周后，检测其组织羟脯氨酸含量和总蛋白质含量。模型组羟脯氨酸含量和总蛋白质含量明显高于正常组，两组比较有差异（P＜0.05）；实验组羟脯氨酸和总蛋白含量明显低于模型组，两组比较有差异（P＜0.05），实验组羟脯氨酸含量和总蛋白含量与正常组比较无显著差异（P＞0.05）。见表3。

表3 3周后总蛋白质含量 和羟脯氨酸含量比较（±s）

表3 3周后总蛋白质含量 和羟脯氨酸含量比较（±s）

注：与正常组比较，△P＜0.05，▲P＞0.05；与模型组比较，◇P＜0.05

）5 2.89±0.43 19.66±4.81模型组 4 5.86±0.49△ 31.97±5.44△实验组 5 3.07±0.33◇▲ 21.67±3.41正常组◇▲

3 讨 论 现代医学认为肩周炎患者活动受限主要与组织粘连形成瘢痕密切相关，组织中总蛋白能反映胶原蛋白的含量，胶原蛋白又是瘢痕组织中胶原纤维的主要成分，所以总蛋白含量测定可以反映瘢痕粘连的程度。羟脯氨酸和蛋白质是参与胶原疤痕形成的主要物质［2］，因此本实验所选羟脯氨酸和总蛋白含量可以用来评价组织瘢痕粘连情况。现代中医认为肩周炎主要与外感风、寒、湿邪以及劳损关系密切。若外邪加劳损，筋脉受损，瘀血内阻，脉络不通，不通则痛，日久筋脉失养，拘急不用。本病属表虚内实症，虚、邪、瘀密切相关。肝肾亏虚是病变根本，风、寒、湿邪及劳损是外因，瘀血是其病变过程中的病理产物。治疗上以扶正祛邪为主，治法为补益肝肾，散寒祛湿，活血化瘀，益气温经，和营通痹。黄芪桂枝五物汤方中黄芪为君药，具有甘温益气，补在表之卫气；桂枝散风寒而温经通痹，与黄芪配伍，益气温阳，和血通经。桂枝得黄芪益气而振奋卫阳；黄芪得桂枝，固表而不致留邪；芍药养血和营而通血痹，与桂枝合用，调营卫而和表里，两药为臣；生姜辛温，疏散风邪，以助桂枝之力；大枣甘温，养血益气，以资黄芪、芍药之功；与生姜为伍，又能和营卫，调诸药，以为佐使。方药五味，配伍精当，共奏益气温经，和血通痹之效。黄芪桂枝五物汤临床治疗肩周炎疗效显著，这与张保国［3］、秦保锋［4］等观点一致。现代药理研究证明黄芪桂枝五物汤有明显的抗炎、镇痛作用以及增强免疫，促进细胞代谢［5－6］。综上所述，黄芪桂枝五物汤能有效治疗外感风、寒、湿邪以及劳损造成组织粘连的肩周炎。本实验不足之处是样本量太小，下一步应增加样本量，增加监测指标，使实验更有可靠性，更好地指导于临床。

［1］ 王晨瑶，方剑乔，邵晓梅，等.肩髃穴电针对肩关节周围炎家兔模型的干预作用［J］.浙江中医药大学学报，2010，31（4）：478－480，482.

［2］ 袁 红，陈 榕，黄大鹏，等.平衡针灸对肩周炎模型兔转化生长因子β1、前列腺素E－2、羟脯氨酸影响的实验研究［J］.环球中医药，2015，1（8）：43－45.

［3］ 张保国，刘庆芳.黄芪桂枝五物汤现代临床应用［J］.中成药，2010，5（32）：837－840.

［4］ 秦保锋，翁伟力，朱旭莹.黄芪桂枝五物汤临床研究进展［J］.现代诊断与治疗，2013，12（24）：3654－3655.

［5］ 李 冀，孙新雨，毕珺辉.黄芪桂枝五物汤的临证应用及实验研究进展［J］.中医药学报，2014，10（42）：108－111.

［6］ 韩兆莹，田 明，刘 珍，等.黄芪桂枝五物汤的药理研究现状［J］.黑龙江医药，2013，6（5）：777 －778.