骨痨敌颗粒对结核二联疗法致小鼠肝损伤的影响＊

周春梅 胡宗苗 王兴海 白吉庆 张恩户 陕西中医药大学（咸阳 712046）

结核病是由结核分枝杆菌引起的传染性呼吸道疾病，是引起全球关注的重大传染性疾病［1］。目前，二联疗法（异烟肼＋利福平，RFP＋INH）是WHO推荐的一线抗结核药，但RFP和INH的代谢场所均为肝脏，具有肝毒性，且联合用药对肝损害更严重、发生率更高［2］。骨痨敌注射液为从民间验方中筛选研发出的治疗骨、关节结核的中药注射剂，临床效果显著。本文观察其口服制剂－骨痨敌颗粒剂对结核二联疗法致小鼠肝损伤的影响，以评价其对二联疗法的减毒作用。

1 材料与方法 1.1 实验动物 雄性昆明种小鼠，体重（20±2）g，由第四军医大学实验动物中心提供，实验动物合格证号：SCXK（军）2012－007。动物饲养于陕西中医学院中药药理实验室，自由摄食饮水，动物房自然明暗，室温（20±2）℃。

1.2 药品与试剂 骨痨敌颗粒（1g相当于生药4g），陕西中医学院制药厂自制，由参三七、骨碎补、黄芪、乳香和没药制成，具有益气养血、壮骨补肾、活血化瘀等功效，用于骨关节、淋巴、肺等各种结核病；异烟肼片（规格：100mg×100片），西安利君制药有限责任公司生产，批号1405290；利福平胶囊（规格：0.15g×100s），成都锦华药业有限责任公司生产，批号130805；实验用卡介苗冻干粉（规格：50mg／瓶），由西安茂新生物科技有限公司提供。

1.3 主要仪器设备 BT224S电子天平，德国赛多利斯科学仪器有限公司；TGL－16M台式高速冷冻离心机，济南博鑫生物技术有限公司；PUZS－300全自动生化分析仪，南京普朗医用设备有限公司；DMBH200显微镜，舜宇光学科技有限公司。

1.4 方 法 取雄性昆明种小鼠，皮下注射卡介苗0.05mg／只后随机分为对照组、二联疗法组、骨痨敌颗粒高、低剂量组，每组10只。二联疗法组和骨痨敌颗粒高、低剂量组每天给小鼠灌胃异烟肼80（mg·kg－1）加利福平120（mg·kg－1），1h后，骨痨敌颗粒高、低剂量组分别灌胃骨痨敌颗粒0.2g生药／kg、0.1g生药／kg；二联疗法组、对照组给予等量生理盐水，1d1次，连续14d。最后一次灌胃后禁食不禁水12h，各组小鼠均摘眼球采血，分离血清，检测血清ALT、AST的活性。处死各组动物，剖取肝脏，肉眼观察肝脏大体形态和颜色，精密称取完整肝脏的重量，计算肝指数 ［＝肝重（mg）／体重（g）×100%］，取肝左叶，10%福尔马林固定，常规制片，苏木素－伊红（HE）染色，光镜下观察肝组织的病理学变化。

1.5 统计学方法 采用统计学软件SPSS 19.0进行数据分析，通过单因素方差分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果 2.1 骨痨敌颗粒对小鼠一般情况的影响实验期间，对照组小鼠饮食、排泄均正常，且毛色光洁，动作灵活，精神良好；二联疗法组小鼠饮食明显减少，大小便颜色失常，均为橘红色，且毛色发黄易脱落，活动迟缓，有不同程度的精神萎靡；骨痨敌颗粒高、低剂量组小鼠的饮食、排泄、毛色、精神等情况较二联疗法组明显好转，但比对照组稍差。

2.2 骨痨敌颗粒对小鼠肝脏的影响 对照组小鼠的肝脏颜色均匀，呈红褐色，质地柔软，边缘较薄；二联疗法组与对照组相比，小鼠肝脏整体颜色变浅，呈黄褐色，体积增大，质地较脆，边缘增厚；骨痨敌颗粒高、低剂量组与二联疗法组相比，小鼠肝脏颜色有所恢复，偏红褐色，体积缩小，质地较柔软，有轻微水肿。

2.3 骨痨敌颗粒对小鼠血清ALT、AST及肝指数的影响

见表1。

表1 骨痨敌颗粒对小鼠血清ALT、AST及肝指数的影响（±s）

表1 骨痨敌颗粒对小鼠血清ALT、AST及肝指数的影响（±s）

注：与二联疗法组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01

组 别 n ALT（IU／L） AST（IU／L） 肝指数（mg／g）对照组 10 52.40±8.95▲ 156.40±20.00△ 38.82±2.54▲二联疗法组 10 88.20±9.80 213.40±44.52 57.18±3.74骨痨敌低剂量组 10 70.90±7.53▲ 161.50±7.43△ 53.04±3.74骨痨敌高剂量组 10 51.20±12.26▲ 146.70±29.55▲ 48.90±2.65▲

2.4 骨痨敌颗粒对小鼠肝组织病理学检查的影响 见图1。对照组小鼠的肝细胞无坏死和炎细胞浸润，肝小叶结构非常清晰，肝细胞索围绕中央静脉呈放射状排列；二联疗法组小鼠的大部分肝细胞发生空泡变性和点灶性坏死，且有明显的炎细胞浸润，肝小叶结构受到破坏，肝细胞索排列非常紊乱，且肝血窦受挤压严重变形；骨痨敌颗粒低剂量组和骨痨敌颗粒高剂量组与二联疗法组相比小鼠肝脏组织的形态差异显著，骨痨敌颗粒低剂量组小鼠的肝细胞有不同程度变性，但无明显肝细胞坏死，肝小叶结构较清晰，但肝细胞索排列较紊乱；骨痨敌颗粒高剂量组小鼠的肝细胞损伤明显减轻，无坏死及炎细胞浸润，仅有少量肝细胞轻度水肿，肝小叶结构趋于正常，且肝细胞索围绕中央静脉大致呈放射状排列。

图1 骨痨敌颗粒对小鼠肝组织病理学的影响（HE染色×100）

3 讨 论 异烟肼和利福平是现今临床上治疗结核病的一线药物，二者的联合用药是抗结核病的首选方案，且抗结核的有效率很高，但二者均具有致肝损伤的不良反应。异烟肼在肝内分解的产物乙酰肼被认为与肝损害有关；利福平可诱导肝脏P450代谢酶的活性，与异烟肼合用会加重肝损伤［3］。ALT、AST主要分布在肝组织，正常情况下它们在血清中的含量很低，但肝脏的实质细胞受损或坏死时，血清中ALT、AST水平会明显升高，并且它们的水平变化与肝细胞受损的程度一致，所以血清中的ALT、AST水平是检测肝细胞损伤的敏感指标，用于诊断肝脏的实质损伤［4］。

骨痨敌颗粒剂由三七、黄芪、骨碎补、乳香（制）、没药（制）五味中药制成，具有益气养血、壮骨补肾、活血化瘀的功效，用于骨关节、淋巴、肺等各种结核病。方中三七可止血、活血、化瘀，有保肝、抗炎等药理作用，其有效成分为三七皂苷，能显著降低RFP和INH合用引起的血清ALT、AST及肝脏指数升高的水平，对RFP和INH合用引起的肝损伤有明显的保护作用；黄芪有增强免疫、保肝、抗肿瘤、抑制病毒等药理作用，有效成分为黄芪多糖［5］；骨碎补能补肝肾、强筋骨，有抗骨质疏松、抗炎等作用；乳香可消炎、镇痛，能促进伤口愈合；没药具有抗肿瘤、保肝、凝血、镇痛等作用，研究表明没药提取物能保护CCl4对大鼠造成的肝损伤［6］。故本实验以异烟肼和利福平联合用药造成小鼠肝损伤模型，通过检测血清ALT、AST水平及计算肝指数，并结合病理切片探查骨痨敌颗粒对小鼠肝脏的影响。结果显示，大剂量的骨痨敌颗粒能显著降低血清ALT、AST及肝指数水平，减轻结核二联疗法所致的肝损伤；同时，骨痨敌颗粒能显著改善RFP和INH联合使用导致小鼠肝损伤的病理学变化，并随剂量增加肝损伤逐渐减轻，说明骨痨敌颗粒可保护小鼠肝脏，对RFP和INH合用所致小鼠肝损伤有预防作用。

［1］ 廖 丽.我国结核病流行现状及防治工作形势分析［J］.中外医疗，2014，（3）：129－130.

［2］ 房宏霞，武珊珊，吕晓珍，等.抗结核治疗期间患者出现肝损伤相关症状与致肝损伤的关系分析［J］.中国防痨杂志，2013，（10）：816－822.

［3］ 刘奉凤，陈耀凯.抗结核药物性肝损伤的研究进展［J］.重庆医学，2014，（19）：2512－2514.

［4］ 冀润利，赵青娥.水飞蓟素对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用［J］.中国应用生理学杂志，2012，（3）：279－280，287.

［5］ 何文涓，袁志坚，何晓升.黄芪多糖的药理作用研究进展［J］.中国生化药物杂志，2012，33（5）：692－694.

［6］ 韩 璐，孙甲友，周 丽，等.没药化学成分和药理作用研究进展［J］.亚太传统医药，2015，（3）：38－42.