妇乐颗粒对家兔盆腔炎模型炎症细胞因子及ICAM－1的影响＊

刘凤萍 张民英 陕西省汉中市人民医院妇产科（汉中723000）

盆腔炎（Pelvic inflammatory disease，PID）是女性生殖器及其周围结缔组织炎症的总称，具体可见子宫内膜炎、子宫肌炎、输卵管炎、盆腔腹膜炎等临床病症，炎性渗出、生殖器官粘连，局部组织增厚或发生瘢痕增生为其病理实质改变［1］，该病为妇科常见病，严重者可导致不孕，或导致慢性盆腔痛、异位妊娠等并发症。统计显示，全世界每年被诊断为盆腔炎的妇女约有78万，而在我国，其发病率也在逐年攀升，对妇女健康产生严重影响。由于该病发生发展及症状的不典型性，目前临床对其诊疗比较局限。妇乐颗粒由忍冬藤、大黄（制）、大血藤、大青叶、蒲公英、牡丹皮、赤芍、川楝子、延胡索（制）、甘草等多味中药组成，具有清热凉血，活血化瘀，消肿止痛之功效，主要用于治疗急性盆腔炎、急性附件炎、急性子宫内膜炎等引起的带下、腹痛等症。但该制剂缺乏治疗盆腔炎的基础研究，本研究观察了妇乐颗粒对家兔盆腔炎模型血清 IL－2、IL－8、IL－10、TNF－α水平及子宫、输卵管细胞粘附分子（ICAM－1）的影响，初步探讨了妇乐颗粒治疗盆腔炎的作用机理，为临床提供了实验依据。

1 材 料 1.1 实验动物 5～6个月龄健康新西兰雌兔，性成熟，未交配，购自西安交通大学实验动物中心，合格证号：医动字第08－018，于陕西中医学院动物实验室普通清洁环境分笼饲养，保持12h昼夜节律，室温（22±1）℃，自由摄食饮水。

1.2 药品与试剂 妇乐颗粒（四川绿叶宝光药业股份有限公司生产，国药准字Z51020624），妇科千金片（株洲千金药业股份有限公司，国药准字Z43020027）；兔血清ELISA检测试剂盒 Rabbit IL－2ELISA KIT（批 号：EIA－16243）、Rabbit IL－8 ELISA KIT（批号：EIA－16251）、Rabbit IL－10ELISA KIT（批号：EIA－16198） 、Rabbit TNF－α ELISA KIT（批 号：EIA－16182），购自美国BD公司；细胞黏附分子 （ICAM －1）抗体（批号：bs－4782R）购自博奥斯公司。

1.3 主要仪器 酶标仪（BioTek），电子分析天平（赛多利斯），超净工作台（苏州净化设备有限公司），倒置显微镜（日本尼康），RM2016病理切片机（上海徕卡仪器有限公司）。

2 方 法 2.1 菌液制备 金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌标准菌株以1∶1比例混合，于实验前1h稀释为1×107／L浓度菌液。

2.2 造模与分组 所有家兔于实验前称重、测肛温、化验血常规，排除炎症，并随机抽取3只家兔进行腹腔镜检查术，观察健康家兔盆腔状况。预留10只家兔作为对照组，其余家兔实验前6h肌内注射孕马血清50IU，造模时家兔固定，暴露外阴，将一次性无菌输液管插入家兔泌尿生殖口内约8cm；回抽顺利无液体，注入混合菌液（1mL／kg），观察30s无液体外溢，将兔倒置5min后放回饲养笼，第49d静脉麻醉下剖腹探查，家兔子宫质脆、充血，输卵管管壁增厚粗糙并与周围组织粘连，或外观略呈串珠样改变确定模型成功，常规关腹。造模成功的家兔随机分为模型组、妇乐颗粒组、妇科千金片组，每组10只，分别灌服蒸馏水、妇乐颗粒1.028g／kg、妇科千金片0.225g／kg，对照组也灌服蒸馏水，1d1次，连续30d。用药剂量系根据临床人用剂量换算家兔给药量。

2.3 取材与标本处理 给药结束后，家兔次日清晨戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉取血20mL，ELISA法检测白介素IL－2、IL－8、IL－10，肿瘤坏死因子TNF－α水平；剖腹观察盆腔脏器变化，处死，取子宫及双侧输卵管放入4%多聚甲醛溶液中固定，常规包埋，石蜡切片，做细胞黏附分子 （ICAM －1）免疫组化染色。

2.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件统计分析，t检验单因素方差分析。

3 结 果 3.1妇乐颗粒对家兔血清中IL－2、IL－8水平的影响 表1可见，妇乐颗粒可调节盆腔炎家兔血清中IL－2、IL－8的平衡。

表1 家兔血清中IL－2、IL－8水平变化（±s，n＝10）

表1 家兔血清中IL－2、IL－8水平变化（±s，n＝10）

注：与对照组比较，◇P＜0.01；与模型组比较，▲P＜0.05，◆P＜0.01

组别 给药剂量 IL－2（pg／mL） IL－8（pg／mL）－ 122.14 ±9.03 45.64±7.52模型组 － 81.38±17.15◇ 126.26±23.54◇妇乐颗粒组 1.028g／kg 114.62±13.43▲ 54.46±9.46◆妇科千金片组 0.225g／kg 116.85±12.54▲ 55.48±11.45对照组◆

3.2 妇乐颗粒对家兔血清中IL－10、TNF－α水平的影响表2可见，妇乐颗粒可调节盆腔炎家兔血清中IL－10、TNF－α的水平。

3.3 妇乐颗粒对家兔子宫、输卵管组织中ICAM－1的表达 与正常组比较，模型组家兔子宫、输卵管组织ICAM－1阳性细胞数明显升高；与模型组比较，妇乐颗粒组、妇科千金片组家兔子宫、输卵管组织ICAM－1阳性细胞数均显著下降，如表3、图1。

表2 家兔血清中IL－10、TNF－α水平变化（±s，n＝10）

表2 家兔血清中IL－10、TNF－α水平变化（±s，n＝10）

注：与对照组比较，◇P＜0.01；与模型组比较，▲P＜0.05，◆P＜0.01

）48.01±11.64模型组 － 43.54±15.64◇108.24±34.51◇妇乐颗粒组 1.028g／kg 78.94±11.74◆ 61.48±13.33◆妇科千金片组 0.225g／kg 75.30±8.94◆ 59.21±8.59对照组 － 89.55±9.82◆

图1 各组家兔子宫、输卵管组织中ICAM－1的表达

表3 家兔子宫、输卵管组织中ICAM－1阳性表达（±s，n＝10）

表3 家兔子宫、输卵管组织中ICAM－1阳性表达（±s，n＝10）

注：与对照组比较，◇P＜0.01；与模型组比较，◆P＜0.01

69.33±19.45模型组 － 136.34±45.54◇妇乐颗粒组 0.225g／kg 84.74±41.74◆妇科千金片组 1.028g／kg 87.30±38.94 ICAM－1对照组组别 给药剂量－◆

4 讨 论 盆腔炎为临床青春期及育龄妇女常见病，细胞因子的异常表达与其炎症的发生、发展密切相关，炎症细胞浸润、胶原蛋白沉积及组织纤维化是该病常见病理表现。大量研究表明，各种白介素与其相应受体结合，通过一系列信号传导调节靶基因的表达，继而表达产物发挥生物效应，发挥免疫调节、免疫应答等重要作用，参与炎症反应的全程。

介导细胞免疫的IL－2由Th1型细胞分泌，其表达下降可导致细胞因子代谢增强，血中皮质醇分泌增多，并诱导抑制性细胞活性，使淋巴细胞对致分裂原反应下降［2］。IL－8能增进白细胞产生免疫应答，使白细胞趋化及游走能力加强［3］，对炎症部位中性粒细胞和单核细胞的募集和活化、白细胞黏附分子表达十分重要［4］。IL－10是典型的抗炎与免疫抑制性细胞因子，是由Th2型细胞分泌的负调节因子。TNF－α是受致炎因子刺激后由单核－巨噬细胞产生的具有多种免疫功能细胞因子［5］，对机体具有双重作用，炎症初始，血管内皮细胞表达黏附因子会产生适量的TNF－α，提高机体自身免疫力，通过调节多种免疫细胞因子共同杀灭入侵致病原，有助于免疫系统发挥抗炎作用，但随着炎症的进展，过量的TNF－α产生，则产生剧烈的呈现毒性作用的免疫反应，过度表达的TNF－α将趋化中性粒细胞发生炎性浸润，同时促进其它炎性因子表达，导致进一步炎性病理改变。在炎症状态下，活化的T细胞和B细胞使细胞间黏附分子1（ICAM－1）表达上调。ICAM－1是免疫球蛋白超家族成员，其表达增强将会通过与其配体结合，介导炎症细胞活化、迁移及细胞间粘附，引起局部微血管阻塞等，进而导致组织器官结构和功能的严重损伤［6］。可见抑制ICAM－1表达对于阻止粘连的发生，包块的形成，最终促使盆腔炎康复都具有重要意义。

［1］ 段丹梅.妇科千金片对慢性盆腔炎模型大鼠TNF－α、IL－2IL－6表达的影响［J］.中医学报，2014，29（10）：1467－1468.

［2］ 李 强，曹德胜.高原重症急性胰腺炎患者血清IL－2、IL－8变化的临床意义［J］.山东医药，2010，50（21）：3.

［3］ 李亚珍，傅应云，韩雪梅，等.糖皮质激素对慢性阻塞性肺疾病患者IL－8及 TNF－α的影响［J］.广东医学，2011，32（5）：602－604.

［4］ 袁建菱，郭建生，左之文，等.妇科千金片对盆腔炎模型大鼠血清中IL－2、IL－6、IL－8含量的影响［J］.中华中医药杂志，2013，28（1）：250－252

［5］ 王振亮，姚乃礼.石藤胶囊对佐剂性关节炎大鼠TNF－α，IL－1β的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（8）：195－198.

［6］ 黄秀锦，朱 叶.保妇康对慢性盆腔炎大鼠ICMI－1、TGF－β1mRNA及炎性细胞因子表达的影响［J］.中药药理与临床，2014，30（1）：116－118.