两种单克隆抗体2E12与8F1检测非小细胞肺癌患者ERCC 1蛋白的表达

金贻铎 陆江阳 吴 昊

(解放军总医院第一附属医院病理科， 北京 100048)

·经验交流·

两种单克隆抗体2E12与8F1检测非小细胞肺癌患者ERCC 1蛋白的表达

金贻铎 陆江阳 吴 昊

(解放军总医院第一附属医院病理科， 北京 100048)

肺癌中约80%～85%是非小细胞肺癌(NSCLC)[1]。多数NSCLC患者确诊时已为中晚期，化疗为主要治疗方法之一，但治疗效果不佳[1]。近年来，依据耐药基因及药物敏感性选择化疗药物从而为肺癌患者选择合适的化疗方案成为一种国际趋势。核苷酸切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementation group 1,ERCC1)是核苷酸剪切修复家族中的重要成员，在核苷酸切除修复途径中起着关键作用[2]。许多研究表明，ERCC1是NSCLC铂类药物化疗的一个重要预后指标，其高表达可能与铂类药物耐药相关，但研究结果并不一致[2-4]。以往多采用单克隆抗体8F1检测ERCC1的表达，但最新的研究表明，8F1抗体与细胞核内的一个不相关的核膜蛋白PCYT1A存在交叉反应，可能导致结果呈假阳性。新研制的2E12抗体能够避免这一非特异性交叉反应[5],但其相关研究还比较少。本研究中采用两种单克隆抗体2E12和8F1，应用全自动免疫组化法检测NSCLC患者肿瘤组织中ERCC1的表达，比较ERCC1阳性率的差异，为2E12的推广应用提供更多的临床证据。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集我院2010年1月-2013年7月经病理检查确诊为NSCLC的124例患者的病变肺组织标本，男79例，女45例;年龄32～75岁,平均68岁。其中腺癌62例，鳞癌62例。

1.2 ERCC1检测方法 使用美国Ventana公司Benchmark XT全自动免疫组化染色机进行染色，主要染色程序：组织样本首先进行抗原修复，细胞前处理液(CC1)标准程序修复30 min，然后37 ℃一抗孵育24 min，经过3,3’-二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒显色，苏木精染核、脱水封片。 一抗分别使用两个小鼠单克隆抗ERCC1抗体8F1(福州迈新公司，1:100 稀释)和2E12(美国Origene公司，1:100稀释)，光镜下观察ERCC1蛋白表达:肿瘤细胞核呈棕黄色染色为阳性表达，未着色为阴性表达。

1.3 统计学处理 采用SPSS18.0软件进行统计分析，组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

使用8F1单克隆抗体检测，124例患者肿瘤组织中，95例ERCC1表达阳性，29例表达阴性；使用2E12单克隆抗体检测，124例患者的肿瘤组织中，69例ERCC1表达阳性，55例表达阴性(图1，见封二)。χ2检验显示，单克隆抗体2E12检测ERCC1表达阳性率显著低于8F1的检测阳性率，差异具有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 两种单克隆抗体检测ERCC1蛋白表达的阳性率[n=124，例(%)]

注：χ2=12.169,P=0.000 5

3 讨 论

免疫组织化学技术在临床上被广泛应用于半定量检测肿瘤生物标志物的表达。免疫组织化学检测质量很大程度上决定于抗体的质量，所以开发具备高特异性及高敏感性的抗体至关重要。目前，还没有被临床批准的ERCC1 免疫组织化学诊断试剂盒可用，可能是由于缺乏高质量的抗ERCC1单克隆抗体。在肺癌患者中，ERCC1基因表达水平与以顺铂为基础的化疗耐药性是否相关，研究结论不尽一致。8F1抗体的非特异性可能是导致研究结果不一致的重要因素之一。本研究中采用两种ERCC1单克隆抗体2E12和8F1，应用全自动免疫组化法检测ERCC1在NSCLC患者肿瘤组织中的表达，发现2E12的检测阳性率显著低于8F1的检测阳性率(P<0.05)，进一步提示8F1抗体的检测结果可能存在假阳性。所以采用单克隆抗体2E12评估ERCC1蛋白的表达可能较目前常用的单克隆抗体8F1更为合适。

[1] 汤钊猷. 现代肿瘤学[M]. 第3版. 上海:复旦大学出版社,2011.1090-1095.

[2] Tiseo M, Bordi P, Bortesi B, Boni L, Boni C, Baldini E, Grossi F, Recchia F, Zanelli F, Fontanini G, Naldi N, Campanini N, Azzoni C, Bordi C Ardizzoni, A.ERCC1/BRCA1 expression and gene polymorphisms as prognostic and predictive factors in advanced NSCLC treated with or without cisplatin[J].Br J Cancer,2013,108(8):1695-1703.

[3] Arora S, Kothandapani A, Tillison K, Kalman-Maltese V, Patrick S M. Downregulation of XPF-ERCC1 enhances cisplatin efficacy in cancer cells[J]. DNA Repair (Amst),2010,9(7):745-753.

[4] 肖永营，宋勇，施毅，印洪林，周晓军. 非小细胞肺癌患者ERCC1蛋白表达与铂类标准方案化疗敏感性的关系研究[J]. 临床肿瘤学杂志,2007,12(5):339-342.

[5] Ma D, Baruch D, Shu Y, Yuan K, Sun Z, Ma K, Hoang T, Fu W, Min L, Lan Z S, Wang F, Mull L, He WW.Using protein microarray technology to screen anti-ERCC1 monoclonal antibodies for specificity and applications in pathology.[J]. BMC Biotechnol,2012,12:88.

10.3969/j.issn.1672-8521.2015.01.009

2015-02-09)