RANTES基因多态性与结核性脓胸发病风险的关系

徐伟乐　马辉　齐海亮　王娜　李辉

作者单位: 050041石家庄市，河北省胸科医院微创外科

RANTES基因多态性与结核性脓胸发病风险的关系

徐伟乐马辉齐海亮王娜李辉

作者单位: 050041石家庄市，河北省胸科医院微创外科

【摘要】目的探讨河北地区受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted factor，RANTES)基因-403G/A和-28C/G单核苷酸多态性(SNP)与结核性脓胸的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测300例结核性脓胸患者和300例对照人群RANTES基因-403G/A和-28C/G的基因型。结果RANTES基因-403G/A SNP基因型频率和等位基因频率在结核性脓胸组和正常组间差异有统计学意义(P=0.004和P=0.008)，与GG基因型相比，携带AG+AA基因型可增加结核性脓胸发病风险(OR=1.403 95%，CI=1.015～1.939)。RANTES基因-28C/G SNP基因型频率和等位基因频率在结核性脓胸组和正常组间差异无统计学意义(P=0.128和P=0.064)，与CC基因型相比，携带CG+GG基因型与结核性脓胸发病风险无关(OR=1.314 95%，CI=0.891～1.936)。结论RANTES基因-403G/A SNP可能与结核性脓胸的发病风险有关，即携带AG+AA基因型增加结核性脓胸发病风险; RANTES基因-28C/G SNP可能与结核性脓胸发病风险无关。

【关键词】结核性脓胸; RANTES基因;单核苷酸多态性

E-mail: kk20140612@126.com

结核性脓胸为胸膜腔结核杆菌严重感染，并产生脓性渗出液积聚所致，发病率近年来呈上升趋势。结核杆菌侵犯胸膜组织的过程，是由多种细胞因子参与的细胞免疫过程。受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)作为重要的CC趋化因子，在炎症部位募集和活化免疫细胞上扮演了重要角色，所以近年来RANTES基因受到人们关注［1］。本研究采用PCRRFLP的方法探讨中国河北地区RANTES基因-403G/A和-28C/G SNPs与结核性脓胸发病风险的关系。

1　资料与方法

1.1一般资料选择2011年1月至2014年1月于我院微创外科行手术治疗的结核性脓胸患者300例为结核性脓胸组，术后标本均经病理学证实，同时排除HIV感染者等免疫缺陷病患者，其中男165例，女13 例;平均年龄41.12岁。对照人群为同期在我院体检中心健康体检者300例(正常组)，其中男159例，女141例;平均年龄40.18岁。2组间年龄、性别比差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1DNA的提取:取研究对象静脉血5 ml，经枸酸钠抗凝，以蛋白酶消化-饱和氯化钠盐析法提取外周血白细胞DNA。

1.2.2PCR-RFLP技术分析: RANTES-403G/A和28C/G引物均参考文献［2］设计，由上海伯昊生化科技有限公司合成。RANTES-403G/A上游引物序列: 5’CACAAGAGGACTCATTCCAACTCA-3’，下游引物序列: 5’-AGTTCCTGCTTATTCATTACAGATCGTA-3’-28C/G上游引物序列: 5’-ACTCCCCTTAGGGGATGCCCGT-3’，下游引物序列: 5’-GCGCAGAGGGCAGTAGCAAT-3’。扩增条件:预变性94℃1 min、94℃变性20 s、退火温度55℃30 s、72℃延伸30 s 35个循环后，最后72℃延伸7 min，循环数30。RANTES-403G/A 和-28C/G扩增产物分别经限制性核酸内切酶RsaI和HincII酶切，酶切产物在2%琼脂糖凝胶上进行电泳，在紫外成像仪下观察、拍照并分析其结果。

1.3统计学分析应用SPSS 19.0统计软件，正常对照组基因型频率分布行χ2检验做Hardy-Weinberg平衡分析，基因型和等位基因频率分布比较采用χ2检验，以非条件Logistic回归方法计算表示相对风险度的比值比(odds ratio，OR)及其95%可信区间(confidence interval，CI)，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1基因型分析RANTES-403G/A位点的PCR扩增片段长度为206 bp，酶切产物进行电泳，AA基因型仅见一条206 bp电泳带，AG基因型显示为206 bp、180 bp和26 bp三条带，GG基因型表现为180 bp和26 bp两条带。-28C/G位点的PCR扩增片段长度为175 bp，酶切产物进行电泳，GG基因型仅见一条175 bp电泳带，CG基因型可见三条带分别为175 bp、152 bp和23 bp，CC基因型表现为152 bp和23 bp两条带。见图1、2。

图1　RANTES-403G/A位点酶切图

图2　RANTES-28C/G位点酶切图

2.2正常组情况正常组的-403G/A和-28C/G位点的基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡(P＞ 0.05)。

2.3RANTES-403G/A SNP基因型和等位基因频率分布在结核性脓胸组和正常组比较该位点各基因型频率和等位基因型频率在结核性脓胸组和正常组之间差异有统计学意义(P=0.004和P=0.008)。与G基因型相比，携带AG+AA基因型可增加结核性脓胸发病风险(OR=1.403 95%，CI=1.015～1.939)。见表1、2。

表1　RANTES-403G/A基因型和等位基因频率在结核性脓胸组和正常组中比较　n=300，例(%)

表2　RANTES-403G/A SNP与结核性脓胸发病风险的关系n=300，例(%)

2.4RANTES-28C/G SNP基因型和等位基因频率分布在结核性脓胸组和正常组比较该位点各基因型频率和等位基因频率在结核性脓胸组和正常组间差异无统计学意义(P=0.128和P=0.064)，与CC基因型相比，携带CG+GG基因型与结核性脓胸发病风险无关(OR=1.314 95%，CI=0.891～1.936)。见表3、4。

表3　RANTES-28C/G基因型和等位基因频率在结核性脓胸组和正常组中比较　n=300，例(%)

表4　RANTES-28C/G SNP与结核性脓胸发病风险的关系n=300，例(%)

3　讨论

RANTES基因定位于人染色体17q11.2～12，包括3个外显子和2个内含子，其存在多个SNP位点，其中，位于启动子区的-403G/A和-28C/G SNPs可能会影响RANTES基因的表达水平和功能活性，从而影响机体对疾病的易感性［1］。

目前国内外关于其多态性与结核病发病风险关系已有报道，结论不尽一致。对于RANTES-403G/A SNP，Mishra等［3］发现在印度中北部Sahariya部落中-403G/A SNP与肺结核病发病风险明显相关，携带A等位基因增加肺结核病发病风险，这与Sánchez-Castaňón等［4，5］研究结果一致。而Selvaraj等［6］通过对印度南部人群-403G/A SNP研究，发现-403G/A SNP与肺结核病发病风险无关，Chu等［7］对中国香港人群的研究和Mhmoud等［2］对苏丹人群的研究得到相同结论，随瑞枝［8］也报道了宁夏地区人群中此多态位点与结核病发病可能无关。对于RANTES-28C/G SNP，报道显示在印度中北部Sahariya部落［3］和中国香港人群中［7］，此位点多态性与肺结核病发病风险无关，而在西班牙北部人群［4］、突尼斯人群［5］和苏丹人群中［2］，-28C/G SNP与肺结核病发病风险明显相关，携带G等位基因增加肺结核病发病风险。出现上述结论不一致的原因，考虑与RANTES-403G/A和-28C/G SNPs在不同人群、种族分布的多样性及地域分布密切相关。上述报道多以肺结核患者为研究对象，关于RANTES-403G/A和-28C/G SNPs与结核性脓胸发病风险的关系，笔者尚未见报道。本文研究发现，RANTES-403G/A SNP可能与结核性脓胸的发病风险有关，即携带AG+AA基因型(A等位基因)增加结核性脓胸发病风险，而-28C/G SNP可能与结核性脓胸发病风险无关。

结核性脓胸的发病是一个多因素参与的错综复杂的过程，易感基因多态性是其中一个因素。进一步研究不同易感基因独立或联合在结核性脓胸遗传易感性中的作用，对阐明结核性脓胸的发生机制和结核性脓胸的防治具有重要的意义。

参考文献

1王兴，随瑞枝，张淑雅，等.宁夏回汉族人群RANTES基因多态性的分布特征.宁夏医科大学学报，2012，34: 676-679.

2Mhmoud N，Fahal A，Wendy W，et al.Association of IL-10 and CCL5 sin gle nucleotide polymorphisms with tuberculosis in the Sudanese popula tion.Tropical Medicine and International Health，2013，18: 1119-1127.

3Mishra G，Poojary SS，Raj P，et al.Genetic polymorphisms of CCL2 CCL5，CCR2 and CCR5 genes in Sahariya tribe of North Central India: a association study with pulmonary tuberculosis.Infect.Genet Evol，2012 12: 1120-1127.

4Sánchez-Castaňón M，Baquero IC，Sánchez-Velasco P，et al.Polymor phisms in CCL5 promoter are associated with pulmonary tuberculosis i northern Spain.Int J Tuberc Lung DIS，2009，13: 480-485.

5Ben-Selma W，Harizi H，Bougmiza I，et al.Polymorphisms in the RAN TES gene increase susceptibility to active tuberculosis in Tunisia.DN and Cell Biology，2011，30: 789-800.

6Selvaraj P，Alagarasu K，Singh B，et al.CCL5 (RANTES) gene polymor phisms in pulmonary tuberculosis patients of south India.Int J Immuno genet，2011，38: 397-402.

7Chu SF，Tam CM，Wong HS，et al.Association between CCL5 function polymorphisms and tuberculosis in Hong Kong Chinese.Genes Immun 2007，8: 475-479.

8随瑞枝.CCL5基因多态性与宁夏地区结核病遗传易感性的关联性研究.宁夏医科大学.2011.

The correlation between RANTES gene polymorphism and the onset risk of tuberculous empyema

XU Weile，MA Hui，QI Hailiang，et al.
Minimally Invasive Surgery of Hebei Chest Hospital，Shijiazhuang 050041，China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the correlation between RANTES-403G/A and-28C/G single nucleotide polymorphism (SNPs) and the onset risk of tuberculous empyema (TE) in Hebei Province，China.Methods The gene types of SNPs of RANTES-403G/A and-28C/G were detected by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) in 300 patients with tuberculous empyema (patient group) and 300 healthy subjects (control group).Results

There were significant differences in genotype frequency and allele frequency of RANTES-403G/A SNP between the two groups (P=0.004，0.008，respectively).As compared with GG genotype，the AG+GG genotype could increase the onset risk of tuberculous empyema (OR=1.403 95%，CI=1.015～1.939).However there were no significant differences in genotype frequency and allele frequency of RANTES-28C/G between the patient group and control group (P=0.128，0.064，respectively).As compared with the CC genotype，the CG+GG genotype was not correlated to onset risk of TE (OR=1.314 95%，CI=0.891～1.936).Conclusion The RANTES-403G/A SNP may be correlated to onset risk of TE，carrying G allele (AG+GG) may increase onset risk of TE.However 28C/G SNP may be not related with onset risk of TE.

【Key words】tuberculous empyema; RANTES gene; single nucleotide polymorphism

(收稿日期:2014－11－20

通讯作者:李辉，050041石家庄市，河北省胸科医院微创外科;

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.09.008

【文章编号】1002－7386(2015) 09－1311－03

【文献标识码】A

【中图分类号】R 561.6