LAM单独及与ECV联合治疗CHB对不同基因型HBV耐药突变的影响

LAM单独及与ECV联合治疗CHB对不同基因型HBV耐药突变的影响

赵帅,孙静娜，白雪梅，李彦明，耿玉兰，刘荣欣

(河北医科大学第一医院，石家庄 050031)

摘要：目的探讨拉米夫定(LAM)单独及与恩替卡韦(ECV)联合治疗慢性乙型肝炎(CHB)对不同基因型HBV耐药突变的影响。方法选择CHB患者100例，其中B基因型30例，C基因型70例。将患者随机分为联合用药组及单独用药组各50例，联合用药组每日口服LAM 50 mg和ECV 0.5 mg，单独用药组每日单用LAM 100 mg。治疗后24个月采用PCR-反向点杂交芯片法检测血清HBV基因型耐药突变情况及耐药基因变异类型。结果 联合用药组检出耐药突变4例，检出率为8%，其变异类型分别为rtT184L+L180M+M204V、rtT184L+S202G+L180M+M204I、rtM250L+M204I，其中C基因型3例(突变率为9.1%)，B基因型1例(突变率为5.9%)；单独用药组检出耐药突变25例，检出率为50%，其变异类型分别为rtL180M+M204V、rtL180M+M204I、rtM204I，其中C基因型18例(突变率为48.6%)，B基因型7例(突变率为53.8%)。两组耐药突变检出率比较，P<0.05，两组B型和C型基因的耐药突变率比较均无显著性差异。结论 LAM单用治疗CHB的耐药突变检出率明显高于与ECV联合治疗者，LAM单用及与ECV联合治疗对CHB不同基因型HBV耐药突变无明显影响。

关键词：慢性乙型肝炎；联合用药；恩替卡韦；拉米夫定；基因型；RT 区位点变异

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.45.002

中图分类号：R512.62 文献标志码：A

基金项目：河北省卫生厅科研立项课题(20130565)。

作者简介：第一赵帅(1982-)，女，主管检验师，在读研究生，主要研究方向为病毒性肝炎的实验室研究。E-mail：767597129@qq.com

作者简介：通信刘荣欣(1972-)，女，副主任检验师，硕士，主要研究方向为临床医学检验。 E-mail：445306720@qq.com

收稿日期：(2015-07-25)

Influence of LAM or LAM combined with ECV treatment on drug-resistant

gene mutations of different HBV genotypes in patients with CHB

ZHAOShuai,SUNJing-na,BAIXue-mei,LIYan-ming,GENGYu-lan,LIURong-xin

(TheFirstHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050031,China)

Abstract:ObjectiveTo observe the drug-resistant gene mutations of different HBV genotypes of patients with chronic hepatitis B (CHB) after treatment of lamivudine (LAM) or the combined treatment of entecavir (ECV) and LAM. MethodsOne hundred CHB patients with 30 cases of genotype B and 70 cases of genotype C were randomly divided into two groups: the combination group and the single-drug group, 50 patients in each group. The combination group was treated with 50 mg LAM and 0.5 mg ECV everyday orally. The single-drug group was treated with 100 mg LAM orally. After a 24-month-treatment, we detected HBV genotype and gene mutations by PCR-RD blot. ResultsIn the combination group, 4 cases (8%) of resistance gene mutations were detected with the types of rtT184L+L180M+M204V, rtT184L+S202G+L180M+M204I and rtM250L+M204I, and there were 3 cases (mutation rate 9.1%) of genotype C and 1 case (5.9%) of genotype B. In the single-drug group, 25 cases (50%) of resistance gene mutations were detected with the types of rtL180M+M204V, rtL180M+M204I and rtM204I, and there were 18 cases (48.6%) of genotype C and 7 cases (53.8%) of genotype B. Significant different was found in the rate of drug-resistant mutation between the two groups (P<0.05). There was no significant difference in the rate of drug resistance mutation of genotypes B and C between the two groups. ConclusionsThe detection rate of drug-resistant mutation was significantly lower in treatment with LAM combined with ECV than that in treatment with LAM. The treatment with only LAM or LAM combined with ECV had no effect on drug-resistant gene mutations of different HBV genotypes in pationts with CHB.

Key words: chronic hepatitis B; drug combination; entecavir; lamivudine; genotype; RT location mutations

目前我国被乙肝病毒(HBV)感染的人数约占全球总患者的三分之一，由此引起的慢性乙型肝炎(CHB)严重威胁我国人口的身体健康，核苷类药物是治疗CHB的最常见手段，有研究[1]指出，由该类药物引起的耐药基因位点变异正在逐渐增多。2012年1月～2013年12月，我们检测了100例CHB患者恩替卡韦(ECV)联合拉米夫定(LAM)治疗24个月后血清基因型及HBV反转录(RT)区耐药突变率和突变类型，并分析了联合用药在CHB治疗和转归中预防或降低耐药率的有效性，以期为临床长期治疗CHB患者及优化治疗方案提供依据。

1资料与方法

1.1临床资料选取我院2012年1月～2013年12月治疗前HBV DNA为阳性且未检测出RT区位点变异的CHB患者100例，男62例、女38例，年龄18～54岁。CHB诊断标准参照2009年中华医学会传染病与寄生虫病学会、肝病学分会制定的《全国病毒性肝炎防治方案》，其中B基因型30例，C基因型70例。将患者随机分为联合用药组及单独用药组各50例，两组一般资料具有可比性。

1.2治疗方法联合用药组每日口服LAM 50 mg和ECV 0.5 mg，单独用药组每日单用LAM 100 mg。共治疗24个月，治疗期间不加用其他抗HBV药物和保肝药物。

1.3HBV基因型及RT区位点变异检测隔夜空腹10 h采集患者静脉血3 mL于真空采血管中，室温凝集，3 500 r/min离心后取上清，-80 ℃储存。采用PCR-反向点杂交芯片法检测HBV基因型、RT区(rtL180M、rtT184L、rtM204V、rtM204I、rtS202、rtM250)位点变异，检测仪器为YN-H16杂交仪和BYQ6056E-298扩增仪，试剂购自深圳亚能生物有限公司。所有操作步骤严格按说明书进行，同期室内质控合格。

1.4统计学方法采用SPSS16.0统计软件。两样本率的比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1联合用药组基因型和RT区变异类型 联合用药组50例患者中检出HBV耐药基因突变4例，33例C基因型患者中检出3例耐药突变，突变率9.1%，其中2例变异类型为rtT184L+L180M+M204V、1例为rtT184L+S202G+L180M+M204I；17例B基因型患者中检出1例耐药突变，突变率5.9%，其变异类型为rtM250L+M204I，B、C基因型突变率无统计学差异(校正χ2=0.02，P>0.05)。

2.2单独用药组基因型和RT区变异类型单独用药组50例患者中检出HBV耐药基因突变25例，37例C基因型患者中检出18例耐药突变，突变率48.6%，其中变异类型分别为5例rtL180M+M204V、4例rtL180M+M204I、9例rtM204I；13例B基因型患者中检出7例耐药突变，突变率53.8%，其中2例变异类型为rtL180M+M204V、2例rtL180M+M204I、3例rtM204I。B、C基因型突变率无统计学差异(χ2=0.10，P>0.05)。

2.3联合用药组与单独用药组突变率比较 联合用药组检出HBV耐药基因突变4例，突变率8%；单独用药组检出HBV耐药基因突变25例，突变率50%，联合用药组突变率明显低于单独用药组(χ2=21.42，P<0.01)。

3讨论

CHB患者长期服用核苷类似物药物可致乙肝病毒RT区基因突变和耐药性的发生。LAM是临床治疗CHB患者应用最广泛的胞嘧啶核苷类似物，但长期使用可引起乙肝病毒耐药基因位点的突变，影响治疗效果[2]。LAM治疗最为常见的耐药位点主要是引起HBV P基因区180位点或204位点发生突变，5年耐药率为60%～70%[3]。ECV对HBV DNA复制的起始、逆转录和DNA正链合成3个阶段均起抑制作用，在有效改善机体T细胞亚群免疫功能的同时，能显著抑制HBV DNA复制，降低患者体内病毒载量[4]。Ye等[5]发现，LAM耐药的常见突变位点为rtM204和rtL180，经ECV补救治疗后增加出现rtT184、rtS202或rtM250等位点的突变，本研究中HBV基因位点变异与此一致。有研究[6，7]结果显示，LAM耐药后会导致HBV对ECV的敏感性明显下降，使治疗出现耐药基因突变后的挽救措施越来越困难。目前联合治疗乙型肝炎已逐渐被国内外学者关注和认可，国外研究[8]显示，LAM联合ECV用药可使肝脏炎症在早期得到控制、对肝纤维化的出现起到预防干预及延缓逆转的作用，联合用药存在优势，疗效更佳。

杨瑞锋等[9]研究显示，DNA微阵列芯片法检测HBV耐药突变有很好的准确性，检测结果与克隆测序完全符合率达95.5%。本研究采用DNA微阵列芯片法检测了CHB患者治疗后24个月时的基因型和RT区(rt180M、rt184L、rt204V、rt204I、rtS202、rtM250)变异位点，联合用药组检出耐药突变4例，其变异类型分别为rtT184L+L180M+M204V、rtT184L+S202G+L180M+M204I、rtM250L+M204I，其中C基因型3例，B基因型1例；单独用药组检出耐药突变25例，其变异类型分别为rtL180M+M204V、rtL180M+M204I、rtM204I，其中C基因型18例，B基因型7例。薛瑞霞等[10]研究显示B、C基因型在我国CHB患者中为主要出现的基因型，ECV多为LAM耐药后补救用药，其引起的变异类型为rtM204V+rtL180M+rtT184L，是目前我国ECV耐药的主要变异类型，此结果与本研究结果相似。

联合用药组C基因型患者耐药突变率为9.1%，B基因型患者耐药突变率为5.9%，两种基因型间的突变率无统计学差异；单独用药组C基因型突变率为48.6%，B基因型耐药突变率为53.8%，两种基因型间的突变率无统计学差异，两组B型和C型基因的耐药突变率无统计学差异。崔艳等[11]研究发现武汉地区HBV基因型以B型和C型为主，YMDD突变发生率在B、C基因型间比较差异无统计学意义。但本研究同时发现C基因型中rtLl80M、M204V/I、rtT184L、S202G突变明显高于B基因型，C基因型中未见rtM250L点突变，此位点变异仅见于B基因型。由于本研究样本量有限，同时仅检测了已知位点的耐药突变，所以需加大样本量予以进一步验证。

本研究LAM与ECV联合应用治疗CHB患者24个月的耐药率为8%,远低于单用LAM的50%，两者联合应用能大大降低单独用药的耐药风险，实现了长期用药的可能。临床医生应根据基因分型，动态检测耐药突变结果，为CHB患者及时调整适合的治疗方案。

综上所述，LAM单用及与ECV联合治疗对CHB不同基因型HBV耐药突变无明显影响，LAM与ECV联合治疗CHB的耐药突变检出率明显低于单用LAM治疗者。

参考文献：

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[11] 崔艳,李艳,乔斌,等.武汉市乙型肝炎病毒基因型分布和P区耐药突变模式及两者相关性分析[J].检验医学与临床,2015,12(5):577-579.