黑鸡与普通肉鸡免疫球蛋白IgG差异分析

杨庆芳郭春燕，2

(1. 晋中职业技术学院,山西晋中 030600; 2.石河子大学动物科技学院,新疆石河子 832000)

黑鸡与普通肉鸡免疫球蛋白IgG差异分析

杨庆芳1郭春燕1，2

(1. 晋中职业技术学院,山西晋中 030600; 2.石河子大学动物科技学院,新疆石河子 832000)

为了探究黑鸡和普通肉鸡免疫球蛋白IgG的差异。分别分离黑鸡和普通商品肉鸡的血清,采用盐析法从中提取免疫球蛋白IgG。然后进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,通过对比相同浓度下,黑鸡和普通商品肉鸡IgG的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳轻链和重链的蛋白量,通过试验得出普通商品鸡IgG的轻链和重链的蛋白量都比和田黑鸡多,说明普通商品鸡血清中IgG的含量要比和田黑鸡的多。

黑鸡;免疫球蛋白;IgG

1 前言

黑鸡（尼雅型）是民丰县一种古老、珍贵而独特的地方家禽品种，随着当地对其知名度的提高，目前黑鸡广泛受到关注。免疫球蛋白（immuno globulin，IG），是由抗体（antibody）和其相应的抗原发生特异性结合而生成的一类生物活性物质[1]。它是机体对抗原物质产生免疫应答而产生的重要产物，具有多种免疫功能。抗体（本质为IG）根据化学结构和抗原性差异，将其分为IgG、IgM、IgA等。其中免疫球蛋白IgG在动物体的血清中含量最高（占血清IG含量的75%左右）[2]，是动物体内免疫最关键的组成物质之一[3]。其被广泛应用于预防兽医的疾病预防、临床兽医诊疗、兽药生物制药和疫苗等各个领域。因此，本文将黑鸡的免疫球蛋白IgG与普通肉鸡进行对比，以期探索黑鸡与普通肉鸡的免疫差异，为黑鸡的推广提供理论依据。

2 材料与方法

2.1 试验材料及主要仪器

试验所选普通商品肉鸡和购自民丰县的和田黑鸡。试验所用试剂为：枸橼酸钠、Hark’s液（无Ca2+和Mg2+）、磷酸缓冲盐溶液（pH=7.4）、硫酸铵溶液（饱和）、硫酸铵溶液（50%）、磷酸缓冲液（0.005mol/L，pH=8.0）、瑞氏染液、工作缓冲液、姬姆萨工作染液、奈氏试剂（Nesslers reagent）、鸡红细胞（CRBC）抗体（溶血素）（效价的1/2）及1mmol/L EDTA。蛋白电泳所用试剂为：30%丙稀酰胺、Tris（pH=8.8和6.8）、10% SDS（pH=7.2）、10% 过硫酸铵（现配现用）、DTT及TEMED。鸡细胞悬液：用一定量的抗凝鸡血离心，取压积的CRBC和Hark’s液（无Ca2+和Mg2+）配置成4% CRBC悬液（浓度约为2×108/mL）。

试验所用主要仪器：超低温冰柜（-80℃） DN-HW328 型美菱有限责任公司；超净工作台 SW-CJ-2F 型 上海博讯实业有限公司；雪花制冰机 FM180 型 北京长流科技仪器公司；电热恒温水浴锅 OK-S26 型 上海精宏有限公司；高速台式冷冻离心机 Neofuge15R 型 力康发展有限公司；低速台式离心机 TDL-5 型 上海安亭科学仪器厂；垂直板状电泳仪 DYC2-24DIV 型 北京六一仪器制造厂；电脑三恒多用电泳仪 DYY-10C 型；全自动生物显微镜 DP70-olysLIA 型 日本奥林巴斯公司；紫外可见分光光度计Golds 54型 上海棱光有限公司

2.2 试验方法

（1）采血，先在注射器中抽入2mL的抗凝剂枸橼酸钠再分别从供试鸡颈静脉抽取20mL的新鲜血液（血液与抗凝剂10：1）。（2）分离淋巴细胞[4]，取上述抗凝血10mL加入等量的Hark’s液，混匀，吸取2mL该液，再加入1mL淋巴细胞分离液，离心（2000 rpm，35min）（3）IgG的分离和纯化参照安烨等的方法进行[5]。（4）IgG浓度的测定[6]，利用紫外可见分光光度计测定OD280。（5）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（包括灌制、点样、电泳、剥胶、染色、脱色、成像）按照林范天等的方法制作[7]。

3 结果与分析

3.1 两种鸡血细胞分离图及免疫球蛋白IgG浓度

试验表明两种鸡经过分离均显现出明显的血浆液层、淋巴细胞层和红细胞层，经过紫外可见分光光度计测定两种鸡的OD280为1.78（普通商品肉鸡）和1.76（黑鸡），因此可判断两种鸡的免疫球蛋白IgG浓度近似一致。

3.2 两种鸡SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

通过IgG的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳试验，可以看出普通商品肉鸡与黑鸡跑出两条清晰的条带。Mark为蛋白量的“标尺”。通过对比相同浓度下，普通商品肉鸡与黑鸡IgG的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳重链（H链）和轻链（L链）的蛋白量，H链条带在（44.3～97.2）KDα之间，L链条带在（20.1～29.0）KDα之间，该结果符合IgG的H链带和L链带的分子量。可看出普通商品鸡IgG的H链和L链的蛋白量都比和田黑鸡多。说明普通商品肉鸡血清中IgG的含量要比和田鸡的多。

4 结论与讨论

IgG是一种以单体分子形式存在的免疫球蛋白分子。所有种类的免疫球蛋白单体分子结构都是相像的，即有两条相同的H链和L链及四条肽链构成的“Y”字形的分子[8]。其中，H链分子量为50000～77000D，大约由420～440个氨基酸（AA）组成。其分为H链的可变区（VH）和恒定区（CH）。在H链的可变区，有四个区域（残基位置分别位于31～37，51～58，84～91，101～110）的AA变异度最大，称为高变区，其余的AA变化相对较小，将其称为骨架区。L链的分子量大约为22500D，由213～214个AA组成。L链与H链相似，分为L链的可变区（VL）和L链的恒定区（CL）。在L链的VL内部有三个高变区（AA残基位置位于26～32，48～55，90～95），其AA变化特别大，其余AA变化较小的区域，将其称为骨架区[9]。所以对于同种动物，H链主要决定了免疫球蛋白的差异，本试验普通肉鸡免疫球蛋白IgG量高于黑鸡，说明其免疫能力可能高于黑鸡。

本研究仅对两种鸡免疫球蛋白IgG的差异进行了分析，其余免疫球蛋白IgA、IgM、IgD等在动物体免疫能力方面也发挥着重要作用，所以，希望在今后的研究中继续加强对于黑鸡免疫蛋白的研究，以期为黑鸡的推广提供依据。

[1] 李友昌.复方微量元素注射液“生命元”对波尔山羊免疫功能的影响研究[D].四川农业大学，2009.

杨庆芳（1973—），女，硕士，讲师，研究方向：动物病理。

郭春燕（1979—），女，硕士，从事专业：畜牧兽医专业的教学与研究。