弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中MGMT、hMLH1蛋白表达变化及其临床意义

陈军，廖小莉，覃思繁，林思彤(广西医科大学附属肿瘤医院，南宁530021)

弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中MGMT、hMLH1蛋白表达变化及其临床意义

陈军，廖小莉，覃思繁，林思彤
(广西医科大学附属肿瘤医院，南宁530021)

摘要:目的观察弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)和人MutS同系物1(hMLH1)表达变化，并探讨其与DLBCL临床病理参数和化疗疗效的关系。方法采用免疫组织化学方法检测100例初治DLBCL患者肿瘤组织中的MGMT和hMLH1，分析两者表达的相关性及其与DLBC临床病理参数、化疗疗效的关系。结果本组患者肿瘤组织MGMT表达阳性42例，阴性58例，hMLH1表达阳性54例，阴性46例。DLBCL患者肿瘤组织中MGMT与hMLH1表达无显著相关性。MGMT表达与DLBCL临床分期、IPI评分、病理亚型有关(P均＜0.05)，与患者性别、年龄、血清LDH、全身症状、原发部位无关; hMLH1表达与DLBCL患者IPI评分、病理亚型有关(P均＜0.05)，与临床分期、性别、年龄、血清LDH、全身症状、原发部位无关。MGMT阳性者CR率和化疗总有效率分别为28.6%、52.4%，均低于MGMT阴性者的55.2%和75.9% (P均＜0.05)。hMLH1阳性者CR率和化疗总有效率分别为75.9%，均高于hMLH1阴性者的28.3%和54.4% (P均＜0.05)。结论

DLBCL组织中MGMT和hMLH1表达率分别为42%和54%，MGMT表达与临床分期、IPI评分、病理亚型有关，hMLH1表达与IPI评分、病理亚型有关，MGMT表达阳性和hMLH1表达表达阴性者化疗效果较好。

关键词:弥漫性大B细胞淋巴瘤; O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶;人MutS同系物1

弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤中最常见的一种类型，其化疗效果和预后与肿瘤耐药有密切关系［1］。烷化剂如环磷酰胺、氮芥、甲基苄肼等，是DLBCL的一线化疗药物。O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)是机体修复烷基化合物损伤的关键酶，对抗烷化剂的DNA损伤，在肿瘤发生、复发进展及化疗耐药中起着重要作用［2］。人MutS同系物1(hMLH1)是细胞DNA错配修复系统中一种重要的错配修复基因，其表达的缺失会导致细胞错配修复功能缺陷，表现为复制错误等，与肿瘤发生密切相关［3］。MMR功能缺陷与肿瘤耐药有关。2012 年1月～2014年12月，我们分析了DLBCL患者肿瘤组织中MGMT与hMLH1表达与DLBCL临床病理参数及化疗疗效的关系。现报告如下。

1　资料与方法

1.1临床资料选择2009年1月～2011年12月就诊，经病理组织学检查确诊的初治DLBCL患者100例为研究对象，年龄17～75(42.3±13.2)岁。临床分期采用Ann Arbor分期法，Ⅰ期10例、Ⅱ期23例、Ⅲ期49例、Ⅳ期18例。淋巴瘤国际预后指数(IPI)评分参照《NCCN淋巴瘤指南》2013年第2版，0～2分40例，3～5分60例;病理亚型参照第4版《WHO造血与淋巴系统肿瘤DLBCL免疫表型分类》，GCB型46例，非GCB型54例。血清乳酸脱氢酶(LDH)正常55例、升高45例。有全身症状52例，无全身症状48例。原发部位为淋巴结内64例、淋巴结外36例。其肿瘤组织经10%中性甲醛固定后常规石蜡包埋待测。

1.2MGMT、hMLH1表达检测采用免疫组化En-Vision两步法。按试剂盒说明书操作。取已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗为阴性对照。结果判断标准: MGMT和hMLH1表达产物主要定位于细胞核和(或)细胞质，呈棕黄色颗粒为阳性细胞。根据染色程度和免疫阳性细胞占肿瘤细胞总数百分比综合计分。按肿瘤细胞染色强度计分: 0分细胞无着色，1分呈淡黄色，2分呈棕黄色，3分呈棕褐色(染色深浅需与背景着色相对比) ;按切片中阳性肿瘤细胞数所占百分比计分: 0分为阴性，1分为阳性癌细胞≤10%; 2分为11%～50%，3分为50%～75%，4分为75%以上。染色强度与阳性细胞百分比的乘积＞2分为阳性，否则为阴性。

1.3化疗及疗效判定100例患者均行CHOP或类CHOP方案联合化疗，化疗4周期或以上。疗效评定参照《NCCN淋巴瘤指南》2013年第2版，分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、病情稳定(SD)、病情进展(PD)。以CR和PR计算总有效率。

1.4统计学方法采用SPSS16.0统计软件。计数资料采用χ2检验及Spearman相关性分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1肿瘤组织MGMT、hMLH1表达及其相关性本组患者肿瘤组织MGMT表达阳性42例(42%)，阴性58例(58%)。hMLH1表达阳性54例(54%)，阴性46例(46%) MGMT、hMLH1均阳性24例，均阴性28例，MGMT阳性hMLH1阴性18例，MGMT阴性hMLH1阳性30例。MGMT、hMLH1表达无显著相关性(γ=0.054，P=0.596)。

2.2MGMT、hMLH1表达与DLBCL临床病理参数的关系见表1。由表1可见，MGMT表达与DLBCL临床分期、IPI评分、病理亚型有关(P均＜0.05)，与患者性别、年龄、血清LDH、全身症状及肿瘤原发部位无关; hMLH1表达与DLBCL患者IPI评分、肿瘤病理亚型有关(P均＜0.05)，与患者性别、年龄、血清LDH、全身症状及肿瘤临床分期、原发部位无关。

2.3MGMT、hMLH1表达与DLBCL化疗效果的关系MGMT阳性者CR12例、PR10例、SD12例、PD8例，化疗总有效率52.4%，MGMT阴性者分别为32、12、7、7例和75.9%，MGMT阳性者CR例数和化疗总有效率均低于MGMT阴性者(P均＜0.05)。hMLH1阳性者CR30例、PR11例、SD8例、PD5例，化疗总有效率75.9%，hMLH1阴性者分别为13、12、7、4例和55.4%，hMLH1阳性者CR例数和化疗总有效率均高于hMLH1阴性者(P均＜0.05)。

3　讨论

DLBCL是一种形态学，免疫学表型、遗传学和临床表现都具有明显异质性的B细胞性淋巴瘤。其侵袭力较高，化疗只能使约40%的患者达到持续缓解，仍有较多DLBCL患者疗效不佳［4］。如何识别预后不良的高危患者，是DLBCL研究的热点。

MGMT基因的表达产物是一种DNA修复酶，在正常细胞的基因修复中有着重要作用［5］。研究发现在大肠癌组织MGMT蛋白表达显著高于癌旁组织［6］。在乳腺癌的研究中也发现，MGMT基因的表达与乳腺癌远处转移及腋窝淋巴结转移、临床分期较晚相关，生存曲线显示MGMT基因无表达或低表达组患者的5年生存率明显高于基因中表达或高表达者［7］。本研究结果显示MGMT的表达与DLBCL临床分期、IPI相关，与上述研究结果相符。分析原因，可能肿瘤细胞处于高增殖状态时，细胞基因组稳定性减弱，为维护细胞基因组的稳定性及遗传保真性，相应的DNA修复基因蛋白表达增多，与肿瘤细胞的活性有关。烷化剂主要是造成肿瘤细胞内DNA烷基化损伤，其中以O6-甲基鸟嘌呤对肿瘤细胞威胁最大。MGMT是一种重要的DNA损伤修复酶，可将烷化剂形成的O6-甲基鸟嘌呤上的甲基转移到自身的活性半胱氨酸残基上，能有效修复烷化剂损伤，其高表达则可能导致肿瘤细胞对烷化剂耐药［8］。本研究结果显示，MGMT表达阳性者的CR率及总有效率显著低于阴性者，提示MGMT蛋白表达是导致DLBCL化疗耐药的一个重要因素。

hMLH1是DNA错配修复系统中的重要组成部分，其功能缺陷，表现为复制错误或微卫星不稳定，导致一系列涉及细胞生长、分化、凋亡及肿瘤细胞侵袭转移能力等的相关靶基因改变，从而引起肿瘤的发生发展或复发转移。研究发现在胃癌中hMLH1减少或丧失提示肿瘤患者预后不良［9］。文献报道hMLH1还与其他多种肿瘤发生有关，如膀胱癌、乳腺癌、肺癌、肠癌、卵巢癌等。本研究结果显示，DLBCL组织hMLH1表达与IPI相关。DNA错配修复系统还参与损伤所诱导的细胞凋亡及基因缺陷引起的微卫星不稳定，使肿瘤细胞对多种化疗药物耐药，如烷化剂、铂类等，并对损伤所诱导的凋亡产生抗性［10］。本研究结果显示，hMLH1表达阳性者的CR率及总有效率率显著高于阴性者，提示hMLH1蛋白表达在DLBCL化疗中是一个敏感的协同因素。

Hans等［11］研究认为DLBCL中GCB型的预后显著优于非GCB型，非GCB型可能存在着较GCB型更复杂的耐药机制。本研究结果显示，MGMT表达阳性和hMLH1表达阴性病例主要集中在非GCB组，提示MGMT表达阳性和hMLH1表达降低在非GCB型DLBCL的耐药机制中有着重要作用。

本组DLBCL患者肿瘤组织MGMT与hMLH1蛋白表达无显著相关性，提示在DLBCL中这两种蛋白修复DNA损伤的途径是相对独立的。

参考文献:

［1］Pasqualucci L，Neumeister P，Goossens T，et al.Hypermutation of multiple proto-oncogenes in B-cell diffuse large-cell lymphomas ［J］.Nature，2001，412 (6844) : 341-346.

［2］Kaina B，Christmann M，Naumann S，er al.MGMT: key node in the battle against genotoxicity，carcinogenicity and apoptosis induced by alkylating agents［J］.DNA RePair(Amst)，2007，6 (8) : 1079-1099.

［3］Hansen WK，Kelly MR.Review of mammalian DNA repair and translational implications［J］.J Pharmacol Exp Ther，2000，295 (1) : 1-9.

［4］Alizadeh AA，Eisen MB，Davis RE，et al.Distinct types of diffuse large B-cell lymphoma identified by gene expression profiling［J］.Nature，2000，403(6769) : 503-511

［5］Riemenschneider MJ，Heqi ME，Reifenberger G.MGMT promoter methylation in malignant gliomas［J］.Target Oncol，2010，5(3) : 161-165.

［6］Cordeiro AT，Silva CM，Bartchewsk JW，et al.Evaluation of the expression of the MGMT gene in normal and neoplastic tissue of patients with colorectal cancer［J］.Rev Col Bras Cir，2012，39(1) :48-53.

［7］谢美强，庄粤蕾，张志辉.MGMT基因表达与乳腺癌远处转移及预后的关系［J］.广东医学，2013，34(15) : 2361-2363.

［8］吕申.细胞DNA修复系统与肿瘤发生及化疗耐药性［J］.大连医科大学学报，2012，34(6) : 519-524.

［9］Uehara H，Miyamoto M，Kato K，et al.Effects of dietary intake and genetic factors on hypemethylation of the hMLH1 gene promoter in gastric cancer［J］.World J Gastroenterol，2005，11 (25) : 3834-3841.

［10］Miyashita K，Fujii K，Yamada，et al.Frequent microsatellite in stability in non-Hodgkin lymphoma irresponsive to chemotherapy ［J］.Leuk Res，2008，32(8) : 1183-1195.

［11］Hans CP，Weisenburger DD，Greiner TC，et al.Confirmation of the molecular classification of diffuse large B cell lymphoma by immunohistochemistry using a tissue microarray［J］.Blood，2004，103(1) : 275-282.

Expression changes and clinical significance of MGMT and hMLH1 in diffuse large B-cell lymphoma

CHEN Jun，LIAO Xiao-li，QIN Si-fan，LIN Si-tong
(Cancer Hospital Affiliated to Guangxi Medical University，Nanning 530021，China)

Abstract:Objective To observe the expression changes of O6-methylguanine DNA methyltransferase (MGMT) and human MutL homolog 1 (hMLH1) in the diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) tissues and to investigate their correlations with DLBCL clinicopathological features and chemotherapeutic effect.Methods Immunohistochemisty was employed to determine the expression of MGMT and hMLH1 in the tumor tissues of 100 cases of newly diagnosed patients with DLBCL，and their correlations with DLBCL clinical parameters and chemotherapeutic effect were analyzed.Results In the tumor tissues，the positive expression of MGMT and hMLH1 was found in 42 and 54 cases，and the negative expression of MGMT and hMLH1 was found in 58 and 46 cases，respectively.In the tumor tissues of DLBCL patients，MGMT was not correlated with and hMLH1.The expression of MGMT was significantly related with the clinical stage，international prognostic index (IPI) score and different immunohistochemical subgroups of DLBCL (all P＜0.05)，and was not related with sex，age，serum LDH，general symptoms and primary sites.The expression of hMLH1 was significantly related with IPI score and immunohistochemical subgroups of DLBCL (all P＜0.05) ; and was note related with clinical stage，sex，age，serum LDH，general symptoms and primary sites.The complete remission (CR) rate (28.6%) and total effective rate of chemotherapy (52.4%) in the positive MGMT group were lower than those of the negative group (55.2%，75.9%) (all P＜0.05).The CR rate (55.6%) and total effective rate of chemotherapy (75.9%) in the positive hMLH1 group were lower than those of the negative group (28.3%，54.4%) (all P＜0.05).Conclusions The expression rates of MGMT and hMLH1 are 42% and 54%，respectively in DLBCL tissues.The expression of MGMT is significantly related with the clinical stage，IPI score and different immunohistochemical subgroups of DLBCL; and the expression of hMLH1 is significantly related with IPI score and different immunohistochemical subgroups of DLBCL.The chemotherapeutic effect of pa-book=25,ebook=487tients with MGMT negative and hMLH1 positive expression is better than that of patients with the opposite expression.

Key words:diffuse large B-cell lymphoma; O6-methylguanine DNA methyltransferase; human MutL homolog 1

(收稿日期:2015-04-17)

作者简介:第一陈军(1975-)，男，硕士研究生，副主任医师，研究方向为淋巴造血系统肿瘤病理诊断与临床研究。E-Mail: chenjun2826@163.com

文章编号:1002-266X(2015)22-0024-03

文献标志码:A

中图分类号:R733.1

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.22.007