血清同型半胱氨酸四种检测方法诊断脑梗死的效能比较及评价

周莉，于秀娟，管洪在(金乡县人民医院，山东金乡700;青岛大学医学院)

血清同型半胱氨酸四种检测方法诊断脑梗死的效能比较及评价

周莉1，2，于秀娟1，管洪在2
(1金乡县人民医院，山东金乡272200;2青岛大学医学院)

摘要:目的比较循环酶法、速率法及化学发光法与酶联免疫吸附试验测定血清同型半胱氨酸水平诊断脑梗死的效果，探讨临床脑梗死患者血清Hcy水平检测的适宜方法。方法选择脑梗死患者210例脑(梗死组)及同期体检的健康体检者205例(对照组)，分别采用酶联免疫吸附试验、循环酶法、速率法及化学发光法同时检测其血清同型半胱氨酸水平，比较各检测方法的精密度及受试者工作特征(ROC)曲线。结果四种方法检测脑梗死组血清同型半胱氨酸水平均高于对照组(P均＜0.01)。血清同型半胱氨酸水平变异系数酶联免疫吸附试验、循环酶法、速率法、化学发光法分别为5.17%、5.48%、5.86%和6.76%;循环酶法变异系数与速率法及化学发光法比较有统计学差异(P均＜0.05)，与ELISA比较无统计学差异(P＞0.05)。循环酶法ROC曲线下面积大于速率法及化学发光法(P均＜0.05)。结论循环酶法与酶联免疫吸附试验检测血清同型半胱氨酸水平诊断脑梗死效能较高;且循环酶法操作简单，更适用于临床大批量标本的处理。

关键词:脑梗死;酶联免疫吸附试验;循环酶法;速率法;化学发光法;同型半胱氨酸

研究显示，血清同型半胱氨酸(Hcy)升高是心脑血管疾病的独立危险因素，精确测定患者Hcy水平对心脑血管疾病的早期预防及治疗具有极其重要的临床意义［1，2］。目前，血清Hcy的检测方法有多种，但各有优势及不足。2014年1～7月，我们分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、循环酶法、速率法及化学发光法同时检测脑梗死患者血清Hcy水平，以评价不同方法对Hcy水平的检测效能。

1　资料与方法

1.1临床资料选择同期在金乡县人民医院救治的脑梗死患者210例(脑梗死组)，男109例、女101例，年龄48～86岁、中位年龄63.3岁;以上病例均经颅脑CT或MRI检查确诊，符合中国急性缺血性脑卒中诊治指南(2010)中规定的脑梗死诊断标准［3］。另选择健康体检者205例为对照组，男110例、女95例，年龄31～80岁、中位年龄58.7岁;均无高血压、糖尿病、心脏病及肝肾功能不全等病史。两组性别、年龄比较无统计学差异。

1.2检测方法所有被检者清晨空腹抽取静脉血3 mL，立即分离血清，置于－20℃冰箱保存。采血前2周内避免使用叶酸、维生素B6及B12等药物。ELISA试剂盒由厦门慧嘉生物科技有限公司提供，具体操作步骤按试剂盒说明书进行。采用日本日立公司HITACHI7600-20全自动生化分析仪，同时使用循环酶法、速率法、化学发光法测定被检者血清Hcy水平，具体操作步骤依据Hcy测定试剂盒说明书进行。

1.3统计学方法采用SPSS17.0统计软件。计量资料以珋x±s表示，正态分布资料组间比较采用独立样本t检验;计数资料以百分比表示，比较采用χ2检验。通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线及计算曲线下面积(AUC)评价不同检测方法的诊断效能。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1四种检测方法测定两组血清Hcy水平比较四种检测方法均显示脑梗死组血清Hcy水平高于对照组(P均＜0.01)。见表1。

表1　四种检测方法测定两组血清Hcy水平比较(μmol/L，±s)

注:与对照组比较，*P＜0.01。

组别　n　血清Hcy速率法　循环酶法　化学发光法脑梗死组210 20.72±7.52*28.83±9.27*25.73±7.83*16.33±10.34水平ELISA*对照组205 9.62±2.33　9.72±4.29　9.69±2.54　8.59±2.32

2.2四种检测方法的精密度比较全部415例被检者，ELISA、循环酶法、速率法、化学发光法检测血清Hcy水平分别为(15.23±7.88)、(17.81±9.93)、(19.39±12.00)、(12.51±8.46)μmol/L;四种检测方法检测血清Hcy水平变异系数ELISA为5.17%，循环酶法为5.55%，速率法为6.12%，化学发光法为6.76%。循环酶法变异系数与速率法及化学发光法比较有统计学差异(P均＜0.05)，与ELISA比较无统计学差异(P＞0.05)。

2.3四种检测方法的ROC曲线分析以1－特异度为横坐标，灵敏度为纵坐标绘制ROC曲线，四种方法检测血清Hcy水平诊断脑梗死的效能见表2、图1。显示ELISA灵敏度、特异度均较高，诊断效能最强。与速率法、化学发光法比较，循环酶法特异度较高，且灵敏度不低;循环酶法AUC大于速率法及光化学法(P均＜0.05)。

3　讨论

1976年，Wilcken等［4］提出血清Hcy水平升高为心血管疾病的独立危险因素。此后，有研究证实了这一观点［5］。Brattstrom［6］研究发现，血浆Hcy水平升高5 μmol/L相当于胆固醇升高0.5 mmol/L，充分肯定了高同型半胱氨酸血症是心脑血管疾病发病的独立危险因素。Hcy在机体内合成代谢过程需要蛋氨酸合成酶、胱硫醚β合成酶及维生素B12、叶酸、维生素B6的参与。正常情况下，体内Hcy的合成与代谢保持动态平衡，血Hcy含量甚微。如果Hcy代谢过程中所需的酶活性下降或物质缺乏，则可导致Hcy升高。高同型半胱氨酸血症导致脑血管病有以下几种可能机制［7］:①Hcy对血管内皮细胞有毒性作用;②Hcy有刺激血管平滑肌增殖的作用;③Hcy有影响凝血机制;④Hcy影响细胞凋亡和DNA损伤。目前普遍认为，高同型半胱氨酸血症导致动脉粥样硬化的机制涉及血管壁、血小板和凝血因子三个方面。已有研究表明，在心脑血管疾病的患者中，叶酸及维生素B12与Hcy水平呈明显的负相关［6］，患者补充叶酸、维生素B6及维生素B12后，Hcy水平有不同程度下降。本文脑梗死患者血清Hcy浓度明显高于对照组，进一步证实了Hcy升高与脑梗死疾病的发生发展存在密切关系，与国内外研究结论相一致［8，9］。因此，血清Hcy水平的准确测定对心脑血管疾病的预防、评估及治疗均具有重要的临床意义。

血清Hcy的检测方法有多种，如高效液相色谱

法(HPLC)、荧光法、同位素检测法、酶法、速率法等，其中以HPLC最为精确，但因其操作繁琐，价格昂贵且需要较多人力、物力，不易在临床推广。本研究选择ELISA、循环酶法、速率法及化学发光法检测脑梗死和正常对照组的血清Hcy水平，四种检测方法均显示脑梗死组血清Hcy水平明显高于对照组。进一步对其检测精密度进行比较，显示血清Hcy水平变异系数ELISA最小，循环酶法次之;循环酶法变异系数小于速率法及化学发光法。证实循环酶法检测血清Hcy水平的精密度高于速率法及化学发光法，与ELISA相当。

ROC曲线是以1－特异度为横坐标，灵敏度为纵坐标，将灵敏度及特异度结合到一起，根据曲线形状及AUC可以对诊断指标进行定量分析，以评价指标的诊断效能［10］。AUC是衡量实验室生物学指标诊断效能的重要指标，AUC越大，诊断效能越高［11］。本文显示ELISA灵敏度、特异度均较高，诊断效能最强。但是，ELISA操作过程大部分仍需手工，不适用于临床大批量标本的处理。与速率法、化学发光法比较，循环酶法特异度较高，灵敏度亦无明显降低;且循环酶法AUC大于速率法及化学发光法。因此，循环酶法检测血清Hcy水平的精确度及诊断脑梗死的效能高于速率法、化学发光法。樊兵等［12］研究证实，循环酶法与HPLC具有高度一致性，且其操作简便、结果精确。梁释予等［13］研究也显示，循环酶法用于检测血Hcy精密度良好，操作简单，易于临床推广应用，适用于临床大批量标本的处理。因此，我们建议临床检测脑梗死患者血清Hcy水平应更多地采用循环酶法。

参考文献:

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［6］Brattstrom L.Common mutation in the methylenetetrahydmfolate reductase gene offers no support for mild hyperhomocysteinenfia being a causal risk factor for cardiovascular disease［J］.Circulation，1997，96(10) : 3805-3807.

［7］郑江环.血浆同型半胱氨酸与急性脑梗死关系的临床观察［J］.贵州医药，2011，35(6) : 547-548.

［8］Zhang W，Zhang X.Correlation between the youth cerebral infarction in different TOAST classifications and high homocysteine［J］.Cell Biochem Biophys，2015，71(1) : 39-42.

［9］于秀娟，欧超伟，于海华，等.脑梗死患者血同型半胱氨酸水平的分析［J］.中国实验诊断学，2014，18(5) : 775-777.

［10］Obuchowski NA.Receiver operating characteristic curves and their use in radiology［J］.Radiology，2003，229(1) : 3-8.

［11］Swets JA.Measuring the accuracy of diagnostic systems［J］.Science，1988，240(4857) : 1285-1293.

［12］樊兵.酶比色法与HPLC法测定血清同型半胱氨酸的相关性研究［J］.中国医药导刊，2013，15(6) : 1043-1044.

［13］梁释予，扈剑飞.酶转换法检测血清同型半胱氨酸在常规生化检验中的应用评价［J］.当代医学，2014，20(19) : 154-155.

(收稿日期:2015-03-01)

通信作者:管洪在

文章编号:1002-266X(2015)21-0054-03

文献标志码:B

中图分类号:R743.33

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.21.021