宫颈鳞癌组织中Cripto-1蛋白的表达及意义

班振英，曾宪旭，张威，党秋红，张欢欢，杜艳敏(郑州大学第三附属医院，郑州450052)

宫颈鳞癌组织中Cripto-1蛋白的表达及意义

班振英，曾宪旭，张威，党秋红，张欢欢，杜艳敏
(郑州大学第三附属医院，郑州450052)

摘要:目的观察畸胎瘤衍生生长因子(Cripto-1)在宫颈鳞癌组织中的表达变化，探讨其在肿瘤发生、发展过程中的作用。方法采用免疫组化法检测60例宫颈鳞癌组织、60例宫颈上皮内瘤变组织及24例正常宫颈组织中Cripto-1蛋白的表达，并分析宫颈癌组织中Cripto-1蛋白表达与临床病理参数及上皮-间质转化标记物(N-钙黏蛋白、波形蛋白、E-钙黏蛋白)的相关性。结果正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织、宫颈鳞癌组织中Cripto-1蛋白阳性表达率逐渐升高，且三者比较差异均有统计学意义(P均＜0.05)。宫颈鳞癌不同临床分期及有无淋巴结转移患者Cripto-1蛋白表达阳性率比较均有统计学差异(P均＜0.05) ;宫颈鳞癌患者Cripto-1蛋白表达阳性与N-钙黏蛋白、波形蛋白表达均呈正相关(r分别为0.561、0.328，P均＜0.05)，与E-钙黏蛋白表达呈负相关(r=－0.468，P ＜0.05)。结论Cripto-1蛋白表达与宫颈鳞癌的发生、发展密切相关，通过上调Cripto-1蛋白表达调控上皮-间质转化以促进肿瘤的侵袭、转移。

关键词:宫颈肿瘤;畸胎瘤衍生生长因子;上皮-间质转化

Cripto-1基因又称畸胎瘤衍生生长因子，是表皮生长因子家族成员之一，其编码的Cripto-1蛋白在早期胚胎发生过程中起重要作用。Cripto-1基因作为多种肿瘤的癌基因生长因子，可促进肿瘤增殖、迁移，诱导上皮-间质转化(EMT)［1］。EMT是失去上皮细胞极性、细胞与细胞接触能力以及重塑细胞骨架的过程，其特征是失去上皮细胞的标志如E-钙黏蛋白(E-cadherin)，而获得间质细胞的标志如N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)等，EMT在肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用［2］。2012年1月～2014年6月，本研究对宫颈鳞癌组织中Cripto-1蛋白表达进行检测，以探讨Cripto-1在宫颈鳞癌发生、发展过程中的作用。

1　资料与方法

1.1临床资料选取郑州大学第三附属医院切除的病理学资料完整的存档蜡块标本144例，均经病理学检查确诊。①宫颈鳞癌组织60例，患者年龄32～65(47.14±6.25)岁，均为初治病例，术前均未接受过放疗、化疗或内分泌等辅助治疗;根据国际妇产科联盟(FIGO 2009)临床分期标准分期，Ⅰ～Ⅱa期38例、Ⅱb期22例;根据2003年国际妇科病理学会组织学分级标准分级，高或中度分化(组织学Ⅰ、Ⅱ级) 37例，低度分化或未分化(组织学Ⅲ级) 23例;有淋巴结转移25例，无淋巴结转移35例。②宫颈上皮内瘤变(CIN)组织60例，患者年龄21～59(42.38±9.62)岁。③因子宫肌瘤切除的正常宫颈组织24例，患者年龄26～52(38.45±4.32)岁。三类患者年龄比较无统计学差异。

1.2检测方法采用免疫组化SP法对不同宫颈组织中Cripto-1蛋白及宫颈鳞癌组织中E-cadherin、N-cadherin、vimentin进行检测。Cripto-1多克隆抗体购自美国Santa cruz公司，E-cadherin、N-cadherin、vimentin单抗及免疫组化SP试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。所有组织蜡块每例连续切片4张(厚4 μm)，行常规HE染色及免疫组化SP法染色，严格按照说明书进行操作。随机选取5个高倍镜视野，每个视野计数不少于200个细胞，按阳性细胞所占百分比及着色深浅进行结果判定。分别由两位病理科医师进行评分，取其平均值。着色强度:无色计0分、浅黄色计1分、黄色及更深颜色计2分，阳性细胞百分比≤50% 计0分、51%～75%计1分、＞75%计2分，两项得分相乘≥2为阳性。

1.3统计学方法采用SPSS17.0统计软件。计数资料以百分比表示，比较采用χ2检验;不同蛋白表达的相关性采用Pearson相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1不同宫颈组织中Cripto-1蛋白的表达Cripto-1蛋白阳性着色主要位于上皮细胞胞质，可见少量胞膜着色。正常宫颈组织、CIN组织、宫颈鳞癌组织中Cripto-1蛋白阳性表达率分别为8.3% (2/24)、33.3% (20/60)、60.0% (36/60)，三者间Cripto-1蛋白阳性表达率比较差异均有统计学意义(P均＜0.05)。

2.2宫颈鳞癌组织中Cripto-1蛋白阳性表达率与临床病理参数的关系组织学Ⅰ、Ⅱ级和组织学Ⅲ级患者Cripto-1蛋白阳性表达率分别为54.1%(20/37)和69.6%(16/23)，不同组织学分级患者Cripto-1蛋白阳性表达率比较无统计学差异(P＞0.05)。Ⅰ～Ⅱa期患者Cripto-1蛋白阳性表达率为50.0% (19/38)，Ⅱb期患者Cripto-1蛋白阳性表达率为77.3%(17/22) ;有淋巴结转移的患者Cripto-1蛋白阳性表达率为80.0% (20/25)，不伴有淋巴结转移患者Cripto-1蛋白阳性表达率为45.7% (16/35)。不同临床分期及有无淋巴结转移患者Cripto-1蛋白阳性表达率比较有统计学差异(P均＜0.05)。

2.3宫颈鳞癌组织Cripto-1蛋白与E-cadherin、N-cadherin、vimentin表达的相关性E-cadherin、N-cadherin、vimentin阳性着色分别位于细胞膜、细胞膜和细胞质，其阳性表达率分别为55.0% (33/60)、65.0% (39/60)、31.7% (19/60)。Cripto-1蛋白表达与N-cadherin、vimentin表达呈正相关(r分别为0.561、0.328，P均＜0.05)，与E-cadherin表达呈负相关(r=－0.468，P＜0.05)。

3　讨论

多项研究发现，Cripto-1蛋白在恶性肿瘤(胃癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌、皮肤黑色素瘤及口腔鳞状细胞癌等)组织中过表达，而在正常组织中不表达或低表达［3～5］，Cripto-1可能是一种新的肿瘤特异性标志［6］。Bianco等［7］将人的Cripto-1基因转染至小鼠体内使其过表达，发现小鼠转染细胞的增殖率升高、克隆能力增强、生长失去抑制;敲除乳腺CID9系的Cripto-1基因，细胞生长率下降、凋亡率增加，提示Cripto-1可能和肿瘤的早期发生关系密切。

本研究结果显示，Cripto-1蛋白在正常宫颈组织、CIN组织、宫颈鳞癌组织中的表达呈递增趋势，且三者阳性表达率比较差异均有统计学意义。这与徐嵘嵘等［8］的研究结果一致。提示Cripto-1可能在宫颈鳞癌的发生过程中发挥作用，检测其表达水平可能为宫颈癌的早期诊断提供参考。

Cripto-1不仅与肿瘤的发生有关，还与肿瘤的侵袭、转移有关。Strizzi等［9］通过转基因技术发现Cripto-1不仅能促进乳腺癌的发生，而且还诱发肿瘤细胞低表达E-cadherin，高表达纤维连接素、N-cadherin等。Cripto-1在体外鼠乳房上皮细胞和体内鼠乳房肿瘤细胞中均可通过调控EMT的发生而促进肿瘤侵袭、转移。Zhong等［10］研究发现，Cripto-1蛋白在肿瘤细胞中高表达，而E-cadherin在肿瘤细胞中呈完全性或不完全性表达缺失;并且Cripto-1过表达及E-cadherin表达缺失均与淋巴结转移及肿瘤TNM分期有关。提示Cripto-1可能在胃癌的侵袭、转移中起重要作用。本研究中Cripto-1蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达与肿瘤的病理组织学分级无关，与患者临床分期及有无淋巴结转移有关。提示Cripto-1检测对子宫颈病变的恶性程度及预后判断有一定的参考价值。本研究对宫颈鳞癌组织中EMT相关标记物的表达情况进行检测，并对Cripto-1与EMT标记物间的相关性进行分析。结果显示，宫颈鳞癌组织中Cripto-1蛋白表达与N-cadherin、vimentin表达呈正相关，与E-cadherin表达呈负相关。提示Cripto-1可能通过调控间质和上皮细胞标记物的表达而促进EMT的发生，从而在宫颈癌的侵袭、转移过程中发挥重要作用。

综上所述，Cripto-1在宫颈鳞癌的发生、侵袭、转移过程中均发挥重要作用，检测Cripto-1可为肿瘤的早期诊断及预后判断提供参考。EMT的发生是多种基因和蛋白共同作用的复杂过程，Cripto-1可能通过调控EMT共同参与肿瘤的侵袭、转移，但具体机制尚有待进一步研究。

参考文献:

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［9］Strizzi L，Bianco C，Normanno N，et al.Epithelial mesenchymal transition is a characteristic of hyperplasias and tumors in mammary gland from MMTV-Cripto-1 transgenic mice［J］.J Cell Physiol，2004，201(2) : 266-276.

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Expression of Cripto-1 in cervical squamous cell carcinoma and its significance

BAN Zhen-Ying，ZENG Xian-Xu，ZHANG Wei，DANG Qiu-hong，ZHANG Huan-huan，DU Yan-min
(The Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China)

Abstract:Objective To observe the expression changes of Cripto-1 in the cervical squamous cell carcinoma and to explore the effects on the tumor occurrence and development process.Methods Immunohistochemistry was used to examine the expression levels of Cripto-1 in 60 cases of cervical squamous cell carcinoma，60 cases of cervical intraepithelial neoplasia and 24 cases of normal cervical epithelia.The correlations of Cripto-1 expression with the clinical pathologic parameters and the epithelial-mesenchymal transformation (EMT) markers (N-cadherin，Vimentin and E-cadherin) were also analyzed.ResultsThe expression levels of Cripto-1 protein were gradually increased in the normal cervical epithelia，cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamous cell carcinoma; and significant difference was found among these three groups (all P＜0.05).The positive expression rate of Cripto-1 also showed significant differences in the cervical squamous cell carcinoma with or without lymph node metastasis and different clinical stages (all P＜0.05).The positive expression of Cripto-1 was positively correlated with N-cadherin and Vimentin (r=0.561，r=0.328，respectively; all P＜0.05)，while it was negatively correlated with E-cadherin (r=－0.468，P＜0.05).ConclusionThe expression of Cripto-1 is closely related to the carcinogenesis and development of cervical squamous cell carcinoma，and may promote the invasion and metastasis of carcinoma by up-regulating the Cripto-1 expression to regulate the EMT.

Key words:uterine cervical neoplasms; Cripto-1; epithelial-mesenchymal transformation

(收稿日期:2015-02-03)

作者简介:第一班振英(1981-)，女，主治医师，硕士，主要从事妇科肿瘤病理研究。E-mail: banzhenying@ hotmail.com

基金项目:河南省科技厅基础研究重点项目(142300410205)。

文章编号:1002-266X(2015)21-0007-03

文献标志码:A

中图分类号:R737.33

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.21.003