RORγt、Foxp3在子宫内膜异位症组织中的表达及意义

RORγt、Foxp3在子宫内膜异位症组织中的表达及意义

吴晶晶1,2,陈雄2,黄娟2,梁小妍2,席晓薇1

(1 上海交通大学附属第一人民医院，上海200080；2 上海交通大学附属第一人民医院宝山分院)

摘要：目的探讨卵巢子宫内膜异位囊肿组织中RORγt、Foxp3的表达规律，分析Th17、Treg细胞与子宫内膜异位症的关系。方法选取病理学检查确诊的卵巢子宫内膜异位囊肿患者40例和单纯因子宫肌瘤而行子宫切除手术患者38例，选取囊肿的囊壁组织和正常在位子宫内膜组织0.5 cm×0.5 cm，常规石蜡包埋备用，采用免疫组织化学技术检测卵巢子宫内膜异位囊肿组织及正常子宫内膜组织中RORγt、Foxp3蛋白表达。结果RORγt、Foxp3蛋白在卵巢子宫内膜异位症病灶组织中的表达均显著高于正常子宫内膜组织(P均<0.05)；RORγt、Foxp3蛋白在卵巢子宫内膜异位病灶组织与正常子宫内膜组织中表达均有关联(r分别为0.746和0.545，P均<0.05)。结论 组织局部微环境中Th17/Treg比例失衡可能是导致子宫内膜异位症产生的原因之一。

关键词：子宫内膜异位症；孤独核受体；叉头状转录因子；辅助性T细胞17；调节性T细胞

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.41.032

中图分类号：R711.71

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2015)41-0077-02

收稿日期：(2015-05-01)

通信作者：席晓薇

子宫内膜异位症(EMs)具有类似恶性肿瘤的一些特性，如具有侵袭、局部或远处转移、浸润并损伤其他组织的能力[1]，其发生可能与免疫异常有着密切关系[2]。辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)被认为是参与EMs发生发展的重要免疫细胞成员[3]，其中孤独核受体(RORγt)为Th17所特有的转录因子[4]，叉头状转录因子(Foxp3)为Treg细胞的特异性核转录因子。本研究通过免疫组织化学技术检测卵巢子宫内膜异位囊肿组织及正常子宫内膜组织中RORγt、Foxp3蛋白表达，以探讨Th17、Treg在EMs发病中的作用，继而进一步明确其发病机制。

1资料与方法

1.1临床资料选取2013年1～12月上海第一人民医院宝山分院妇科住院手术并经病理学检查确诊的卵巢EMs囊肿患者40例(观察组)，年龄40～52岁，其中增殖期子宫内膜20例、分泌期子宫内膜20例；均排除合并糖尿病、高血压、心血管疾病、妊娠、急慢性感染性疾病、结缔组织病或既往有肿瘤病史者。另选取同期单纯因子宫肌瘤而行子宫切除手术患者38例(对照组)，年龄44～55岁，其中增殖期子宫内膜19例、分泌期子宫内膜19例，其年龄及子宫内膜分期与观察组比较无统计学差异。两组均签署知情同意书，并经本院伦理委员会审查批准。

1.2RORγt、Foxp3蛋白表达检测检测试剂鼠抗人Foxp3单克隆抗体(1∶50)购自eBioscience基因公司，鼠抗人RORγt抗体(1∶50)购自eBioscience基因公司，SABC三步法试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。选取观察组囊肿的囊壁组织及对照组子宫内膜组织0.5 cm×0.5 cm，常规石蜡包埋备用。石蜡切片高温高压修复，行免疫组化染色，在显微镜高倍镜下盲法阅片，半定量分析。RORγt、Foxp3蛋白阳性颗粒主要出现在间质浸润的淋巴细胞中，定位于细胞核，染色为棕黄色或棕褐色。每张切片随机选取5个有代表性的视野，根据染色强度及染色面积进行划分。染色强度：无染色 0分，浅黄色 1分，棕黄色 2分，棕褐色3分；染色面积：无染色 0分，<30% 1分，30%～60% 2分，>60% 3分。两项结果相加，0分为-，1分为+，2～4分为++，5～6分为+++。

1.3统计学方法采用SAS8.02统计软件。两种蛋白在两独立样本(观察组和对照组)等级资料的分析应用Wilcoxon 秩和检验；两种蛋白在两个样本中的相关性采用Spearman等级相关进行分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组Foxp3蛋白表达阳性率观察组40例，Foxp3蛋白表达阳性31例，其中13例+++，8例++，10例+，总体阳性率为77.5%。对照组38例，Foxp3蛋白表达阳性18例，其中1例+++，5例++，12例+，总体阳性率为47.4%。观察组Foxp3蛋白表达阳性率高于对照组(Z=-3.687，P<0.05)。

2.2两组RORγt蛋白表达阳性率观察组40例，RORγt蛋白表达阳性30例，其中11例++，19例+，总体阳性率为75.0%。对照组38例，RORγt蛋白表达阳性17例，其中6例++，11例+，总体阳性率为44.74%。观察组RORγt蛋白表达阳性率高于对照组(Z=-2.497，P<0.05)。

2.3Foxp3蛋白与RORγt蛋白表达的相关性观察组卵巢子宫内膜异位病灶组织中Foxp3蛋白与RORγt蛋白表达相关(r=0.746，P<0.05)；对照组正常子宫内膜组织中Foxp3蛋白与RORγt蛋白表达也存在相关性(r=0.545，P<0.05)。

3讨论

EMs发病的主要因素包括免疫防御功能缺陷和过度的炎症反应。已有研究表明，异位的子宫内膜逃避了免疫监视，并利用免疫系统的促炎机制来促进异位内膜在腹腔内的生长[5]。EMs发展过程中的免疫缺失可能涉及两个过程[6]。首先，异位损伤处树突状细胞减少及与之相关的无效抗原提呈，其次，分泌期增多的Treg数量可能与Treg调节抑制有关，Treg的表型能够随着促炎环境的不同而改变。由于异位子宫内膜的微环境是一种特殊炎症环境，能够被激活的、与免疫调节有关的分子机制所改变，Treg的功能也发生变化。这种功能变化的Treg无法招募免疫细胞高效识别和清除异位子宫内膜抗原，故发生代偿性地过度增殖[7]。

Foxp3是Treg的特异性转录因子，在Treg细胞显著表达。研究发现，在EMs患者在位及异位子宫内膜组织中都有Treg细胞，在30%异位子宫内膜组织标本中可以检测出Foxp3阳性表达[8]。本研究中，在77.5%的子宫内膜异位病灶中可以检出Foxp3阳性表达。有研究比较了卵巢EMs病灶和分泌期子宫内膜组织中的CD+4CD+25Foxp3阳性细胞亚群，发现卵巢EMs内膜组织中Treg细胞显著升高[9]。本结果与上述研究相符，证明EMs病灶局部存在Treg功能失调引起的数量代偿性增多导致的免疫防御功能缺陷。

EMs局部存在过度的炎症反应。在EMs患者腹水中，细胞因子水平异常升高，如IL-1、IL-8、IL-6、TNF-α等促炎介质[6]。Th17细胞的主要效应因子是IL-17。IL-17可以刺激上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞产生多种细胞因子如IL-6、IL-8、IL-1等；Th17细胞分泌产生IL-17A、IL-17F、IL-6以及TNF-α等，这些细胞因子可以集体动员、募集及活化中性粒细胞。以上两方面都能有效地介导组织的炎症反应，促进EMs的进展[7]。

RORγt诱导编码IL-17 和IL-17F 细胞因子基因的表达，TGF-β 和IL-6 可通过诱导大量的RORγt 表达进而启动RORγt 信号转导通路，从而促进Th17 细胞的分化。本研究发现，EMs病灶中RORγt高表达，间接印证了在病灶局部富集的Th17细胞可能介导了EMs的炎症反应，导致了其发生和发展。

正常状态下，Th17细胞与Treg细胞处于平衡，两者相互制约共同维护着内环境的稳定[7]。TGF-β能够诱导受到TCR刺激的初始CD4+T细胞表达RORγt和Foxp3。二者为一对此消彼长的转录因子，在不同的细胞因子环境中处于动态平衡。由于EMs的病灶局部免疫环境发生了改变，使得Th17细胞与Treg细胞在局部病灶的平衡发生变化。但由于本研究是基于组织切片的免疫组化技术，结果仅能证明二者的表达变化在EMs内膜和正常子宫内膜之间有关联，而不能证明二者是正相关或负相关。

参考文献：

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