RA患者血清及外周血单核细胞中DcR3的表达及意义

羊文芳

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)属自身免疫系统疾病，以关节滑膜慢性炎症为主要特征，病程相对较长，致残率较高，严重影响患者的生活质量。研究［1］表明细胞因子是引发RA滑膜炎症与关节损伤的重要介质，其中单核细胞陷阱因子3(decoy receptor 3，DcR3)是一种新型的可溶性肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor，TNFR)家庭成员。DcR3可以有效抑制炎性反应与细胞凋亡，还可以直接调节免疫细胞活性，诱导树突状细胞凋亡［2］。本文以我院风湿免疫科收治的62例类风湿关节炎患者为研究对象，通过检测其血清中的DcR3水平，分析与RA临床指标的相关性，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我院风湿免疫科2012年9月至2013年12月收集的RA患者62例及60例健康人作为研究对象，研究组62例，男18例，女44例;年龄28～75岁，平均年龄(46±12)岁。对照组60例，男23例，女37例;年龄25～75岁，平均年龄(44±13)岁。2组年龄差异无统学意义(P＞0.05)。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准［3］:所有RA患者的诊断均符合1987年美国风湿病协会关于RA的诊断标准;患者主要表现为关节肿胀、疼痛、晨僵等症状。

1.2.2 排除标准:合并其他免疫系统疾病如系统性红斑狼疮、干燥综合征、严重膝关节功能障碍患者;近期应用抗风湿类治疗药物的患者。

1.3 检测方法 血沉(ESR)测定仪器为全自动SD-100动态血沉压积测试仪(北京慧佳美康生物科技有限公司);CRP测定仪器为全血快速CRP测定仪(TD3)，购自北京北瑞达医药科技有限公司。采集研究对象的空腹血8 ml，血液凝固后在4 000 r/min的离心机中进行离心10 min，分离血清于－80℃的低温保存，采用酶联免疫吸附法(ELISA)方法检测2组血清的DcR3，荧光实时聚合酶链反应(PCR)检测T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD4+/CD8+)。试剂均选用R＆D公司生产，并按照试剂盒上要求的操作步骤进行操作。

1.4 分组方法及观察指标 记录RA患者抽血检查前的临床症状:关节疼痛数、压痛数、肿胀数、晨僵时间，检测血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、DcR3、外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD4+/CD8+)。并根据DAS28评分法将研究组分为RA低活动组(DAS28评分≤2.6分，28例)，RA活动组(DAS28评分 ＞2.6分，34例)。

1.5 统计学分析 应用SPSS 17.0统计软件，计量资料以±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.12组DcR3及相关指标比较 研究组(RA患者)的DcR3、DcR3mRNA、ESR、CRP均显著的高于对照组(P＜0.05);研究组的 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著低于对照组(P＜0.05)。见表1。

表1 2组DcR3及相关指标比较 ±s

表1 2组DcR3及相关指标比较 ±s

指标 对照组(n=60) 研究组(n=62) t值 P值DcR3(ng/ml)48.4 ±19.7 177.8 ±49.4 16.818 0.000 DcR3mRNA 8.3 ±3.2 23.7 ±7.2 15.179 0.000 ESR(mm/h) 17.4 ±7.2 68.9 ±25.7 14.962 0.000 CRP(mg/L) 7.8 ±2.9 32.8 ±7.5 23.938 0.000 CD3+(%) 82.5 ±9.4 56.3 ±8.6 16.158 0.000 CD4+(%) 50.3 ±6.5 39.8 ±7.2 8.446 0.000 CD4+/CD8+1.57 ±0.18 1.32 ±0.24 6.493 0.000

2.2 RA低活动组与活动组的临床症状及DcR3指标比较 RA活动组的晨僵时间、关节肿胀率、关节压痛率、cR3、DcR3mRNA、ESR、CRP 均显著高于 RA 低活动组(P＜0.05);RA 活动组的 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著的低于 RA低活动组(P＜0.05)。见表2。

表2 不同RA活动程度分组的临床症状及DcR3比较 ±s

表2 不同RA活动程度分组的临床症状及DcR3比较 ±s

指标 RA低活动组(n=28)RA活动组(n=34)t(χ2)值 P值晨僵时间(h)1.4 ±0.8 1.8 ± 0.6 3.131 0.002关节肿胀数［例(%)］ 16(57.14) 28(82.35) 4.736 0.030关节压痛数［例(%)］ 17(60.71) 30(88.24) 6.341 0.012 DcR3(ng/ml) 121.4 ±37.6 224.8 ± 51.3 8.876 0.000 DcR3mRNA 11.9 ±7.4 34.5 ± 7.2 12.147 0.000 ESR(mm/h) 29.9 ±18.4 107.8 ± 26.3 13.225 0.000 CRP(mg/L) 18.5 ±6.3 44.8 ± 7.4 14.878 0.000 CD3+(%) 65.8 ±9.1 48.3 ± 8.0 8.056 0.000 CD4+(%) 44.3 ±6.7 35.6 ± 8.1 4.544 0.000 CD4+/CD8+1.42 ±0.32 1.21 ± 0.26 2.852 0.006

3 讨论

RA是一种慢性、以炎性滑膜炎为主的系统性疾病［4］。RA一般发病年龄在20～50岁，且女性多于男性，一般容易侵犯小关节如手、腕、足等关节，其病变位于患者的滑膜，累及关节软骨、韧带、肌腱以及全身组织，引发关节肿痛，继而破坏软骨、关节间隙狭窄，主要是呈对称性、晨僵及关节肿胀疼痛，晚期会造成关节畸形、功能活动障碍，最终导致不同程度的残疾，严重影响患者的身体健康［5］。RA发病过程中关节局部炎性介质、细胞因子等吸引并活化来自外周血炎性细胞，且可以有效触发滑膜细胞增殖与活化。DcR3在肿瘤细胞与恶性肿瘤组织中具有较高表达，通过抑制凋亡作用于肿瘤细胞免疫逃逸。在RA滑膜细胞在局部表现出肿瘤生物学行为，损坏关节软骨、肌腱与韧带，导致滑膜细胞凋亡异常，促进RA发生［6］。DcR3是一种新发现的肿瘤坏死因子诱骗受体，属于分泌性蛋白，可以与TLIA、LIGHT等多种肿瘤坏死因子(TNF)家族成员相结合，但由于缺乏胞内区或胞内死亡区不完整，而不能传导凋亡信号，进而有效抑制细胞凋亡［7］。DcR3在细胞的生长、分化与死亡以及免疫调节中具有重要作用，且与RA疾病具有密切联系［8］。本研究结果显示，研究组患者的 DcR3、DcR3mRNA、ESR、CRP均显著性高于对照组(P＜0.05)。研究组的 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+等外周血T淋巴细胞亚群均显著的低于对照组(P＜0.05)。

Bamias等［7］研究结果显示RA患者血清中DcR3浓度显著性高于正常人群的对照组。且RA患者血清与关节腔积液中的浓度显著性高于骨性关节炎与健康对照组。这表明了RA发病机制中DcR3起到了重要作用［9］。本研究结果显示，RA活动组的晨僵时间、关节肿胀率、关节压痛率、cR3、DcR3mRNA、ESR、CRP 均显著高于 RA低活动组(P＜0.05)。且患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著的低于RA低活动组(P＜0.05)。表明RA患者外周血单核细胞及血清中DcR3水平显著的高于正常人群，且与ESR、CRP升高、T淋巴细胞亚群水平降低具有密切联系，这一结果和相关文献报道的数据［10］相一致。因此，我们认为，单核细胞中DcR3参与了风湿性关节炎的发病机制，但是通过抑制细胞凋亡，调节免疫应答，促进了RA发病进程，还是RA全身免疫反应中存在的保护性应答仍不明确，需要进一步研究分析。

综上所述，RA患者外周血单核细胞及血清中DcR3水平显著的高于正常人群，并且RA活动期患者的DcR3水平显著的高于低活动期患者，并且可能与ESR、CRP升高、T淋巴细胞亚群水平降低有一定关系性。DcR3在RA发病中的作用为其发病机制提供了有价值线索，且对疾病的进一步治疗提供重要参考依据。

1 孙可歆，赵臣，李艳，等.RA患者外周血DcR3表达水平与疾病活动性相关分析.中国实验诊断学，2012，11:2069-2072.

2 陈安平，袁国华，向阳，等.陷阱因子3在类风湿关节炎患者血清及外周血单核细胞中的表达研究.中华风湿病学杂志，2012，16:47-49.

3 Shinya M，Yasushi H，Takayuki M，et al.Decoy receptor 3 expressed in rheumatoid synovial fibroblasts protects the cells against Fas-induced apoptosis.Arthritis and rheumatism，2007，56:1067-1075.

4 贾汝琳，赵静，孙晓麟，等.类风湿关节炎患者血清中诱骗受体3的检测及临床意义.中华风湿病学杂志，2013，17:20-22.

5 朱雷，贾汝琳，杨冬月，等.联合检测IgG/IgA型抗环瓜氨酸肽抗体对类风湿关节炎的诊断意义.中华风湿病学杂志，2013，17:522-525.

6 赵静，孙晓麟，贾汝琳，等.类风湿关节炎患者血清中肿瘤坏死因子样配体1A的测定及临床意义.中华风湿病学杂志，2011，15:608-610.

7 Bamias G，Siakavellas SI，Stamatelopoulos KS，et al.Circulating levels of TNF-like cytokine 1A(TL1A)and its decoy receptor 3(DcR3)in rheumatoid arthritis.Clinical Immunology，2008，129:249-255.

8 陈安平，袁国华，罗雄燕，等.类风湿关节炎滑膜组织及关节液中DcR3表达的研究.中国免疫学杂志，2013，29:825-828.

9 范利峰，陈汉玉，翁庚民.早期RA的筛查及早期干预治疗的临床研究.河北医药，2013，35:185-186.

10 孙可歆，李春辉，郭素红，等.类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞DcR3基因表达水平的分析.中国现代药物应用，2013，25:1-2.