乳没镇痛胶囊中马兜铃酸的含量测定研究*

薛利华

西安市中医医院(710001)

乳没镇痛胶囊中马兜铃酸的含量测定研究*

薛利华

西安市中医医院(710001)

目的：控制乳没镇痛胶囊中马兜铃酸的含量。方法：采用高效液相色谱法建立了乳没镇痛胶囊中马兜铃酸的含量测定方法。结果：该方法灵敏度高，准确可靠, 可以作为乳没镇痛胶囊中马兜铃酸的质控方法。结论：该品中不含马兜铃酸。

乳没镇痛胶囊是由镇痛饮进行剂型改革而来的制剂，是国家级名老中医姚树锦主任医师集30余年临床经验总结出治疗痹痛的经验方，处方由乳香、没药、细辛、虫、血竭等药组成，功效为活血定痛，破瘀化滞，祛寒逐风[1]。方中细辛为马兜铃科植物北细辛、汉城细辛或华细辛的干燥全草[2]。马兜铃酸是马兜铃科植物中的主要成分,近年来已证实其具有肾脏毒性[3-5]。2010版中国药典规定细辛中马兜铃酸的限量为0.001%[2]，但中药复方制剂中是否含有马兜铃酸还有待进一步研究，为了更有效的控制产品的质量，保证临床用药安全，采用高效液相色谱法建立了乳没镇痛胶囊中马兜铃酸的含量测定方法。

1 仪器与试药 1.1 仪器LC-20AT恒流泵 SPD-20A紫外检测器；SIL-20A自动进样器；CTO-10ASVP校温箱(日本岛津)；FA2104(上海民桥精密科学仪器有限公司) 。

1.2 试药 乳香、没药、细辛等药味(购自西安盛兴饮片厂)；磷酸(广东汕头市西陇化工厂)；甲醇(天津市致远化学试剂有限公司)；马兜铃酸对照品(110746-200507购自中国食品药品检定研究院，含量测定用)；乙腈、磷酸为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。乳没镇痛胶囊样品及相应药材阴性样品由本实验室自制。

2 方法与结果 2.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260nm。理论板数按马兜铃酸Ⅰ峰计算应不低于5000。

2.2 供试品溶液的制备 取乳没镇痛胶囊内容物5g，天平精密称定，放置锥形瓶中，用移液管加入70%甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率500W，频率40kHz)40min，放置室温，再称量，所减少重量用70%甲醇补足，震摇均匀，微孔滤过，取续滤液做供试品溶液备用。

表1 马兜铃酸Ⅰ峰值情况

2.3 对照品溶液的制备 取适量对照品马兜铃酸Ⅰ，天平精密称定，加甲醇制成浓度0.4μg/mL的溶液，备用。

2.4 阴性对照品的制备 取不含细辛的乳没镇痛胶囊处方药材, 按乳没镇痛胶囊生产工艺制备胶囊,作为阴性胶囊。取适量, 按2.2中方法制备，备用。

2.5 检测方法 分别吸取上述备用供试品溶液与对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录结果。如图2，图3。

2.6 线性范围考察 按上述色谱条件吸取备用对照品溶液3、5、10、15、20、25μL注入色谱仪，以进样量、峰面积分别为横坐标和纵坐标，计算得回归方程为Y=72.906,X+8.3167，r=0.9999。 结果表明马兜铃酸Ⅰ在0.198～1.316μg范围内呈良好线性关系 。结果见图1。

图1 标准曲线

2.7 重复性实验 取同一批次乳没镇痛胶囊样品，按2.2中所述方法制备供试液6份，每次自动进样10μL测定，6份均未检出，显示方法重复性良好。

2.8 精密度实验 精密吸取马兜铃酸Ⅰ对照品溶液(0.4μg/mL)， 重复测定6 次，结果马兜铃酸Ⅰ峰面积的RSD2.4%。

2.9 稳定性实验精密进样按2.3中方法所制马兜铃酸Ⅰ对照品溶液，每次10μL，分别在0, 2, 4, 6, 8 h 进样, 检测溶液的稳定性，计算峰面积RSD为2.5%，说明该溶液在8h内稳定性良好。

2.10 回收率实验 取乳没镇痛胶囊样品5份，每份20 粒。取内容物混匀，取约0.20g，天平精密称定，置25 mL 棕色瓶中，分别精密加入马兜铃酸Ⅰ对照品溶液(0.4μg/mL)10 mL，按2.2中方法制取供试品溶液5份，计算测定所得平均回收率为97.9%, RSD 为0. 8%。说明本研究方法回收率良好。

2.11 空白干扰实验 取乳没镇痛胶囊阴性对照品备用溶液, 依2.5中方法测定, 在马兜铃酸Ⅰ峰相应位置无干扰。

2.12 含量测定 取乳没镇痛胶囊样品3批, 依2.2中方法制备供试品, 经测定,该 3批乳没镇痛胶囊中均未检出马兜铃酸Ⅰ。

图2 马兜铃酸Ⅰ对照品

图3 供试品溶液

2.13 结 论 本品中未检测出马兜铃酸Ⅰ，因此规定本品不得检出马兜铃酸。 3 讨 论 3.1 临床研究表明, 马兜铃酸的肾脏毒性作用, 主要表现为急性肾功能障碍。而马兜铃酸Ⅰ是马兜铃属植物中毒性最强的成分[5]。近年来由于马兜铃酸已确定为一种具有肾毒性和致癌作用的物质[4-6]，从而引起人们对安全使用马兜铃科中药的的关注。乳没镇痛胶囊是本院肾病科所用制剂，本实验为临床用药安全提供依据。

3.2 本实验检测乳没镇痛胶囊样品三批, 检测结果均未检出马兜铃酸Ⅰ。 据此可规定乳没镇痛胶囊质量标准中不得检出马兜铃酸。

3.3 用HPLC法测定本制剂中马兜铃酸Ⅰ含量[7-11]专属性强, 结果准确可靠，操作方法简单,可以用来控制乳没镇痛胶囊中马兜铃酸的检测。

[1] 王维英.姚树锦中医世家经验辑要[M].西安.陕西科学技术出版社2002:1.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典．一部[S].北京:中国医药科技出版社，2010: 133,173,207,214.

[3] 中华医学会． 临床诊疗指南-肾脏病学分册[S]． 北京: 人民卫生出版社，2011: 167-169．

[4] 于 艳,修丽丽,魏新智，等.北细辛不同提取物中总马兜铃酸的含量测定[J].中国实验方剂学杂志,2012.18(24):141.

[5] 陈 杰,李诒光,孟淑娟，等.辛麻止咳颗粒中马兜铃酸的含量测定研究[J]. 时珍国医国药，2007,18(11):2725.

[6] 薛 燕，童湘晖，王 峰，等． 细辛饮片中马兜铃酸A 痕量检查方法的建立[J]．药物分析杂志，2010，30( 5) : 842.

[7] 杜晓曦,周跃华,路金才,等. RP-HPLC 法测定马兜铃酸含量方法的优化[J].中国中医药信息杂志,2007，7(14):47.

[8] 李 琳, 高慧敏, 王智民，等.冠心苏合制剂中马兜铃酸A 的含量[J]中国中药杂志，2006.1(31)：122.

[9] 宋双红， 色林格， 陈 蓓，等.HPLC 法测定4 种细辛中马兜铃酸Ⅰ和细辛脂素[9].中成药2014 ， 36(8)1711-1715.

[10] 胡志祥,王永红,彭崇胜,等.近5 年细辛及其制剂中马兜铃酸的研究进展[J].中草药，2010,41(2):318.

[11] 曾 超，刘雪梅，蒙万香,等． HPLC 法测定不同产地细辛药材中马兜铃酸的含量[J]．内科，2013，8( 1) : 56-57．

(收稿2014-11-12；修回2014-11-25)

*陕西省中医药管理局立项课题 题目编号ZY49

@乳没镇痛胶囊 马兜铃酸 含量测定

R28

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.04.049

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