宫颈上皮内瘤变组织OLFM4和Ki-67表达及意义

郭继梅，朱高香，吕玲

(青岛市第九人民医院妇产科，山东 青岛 266002)



宫颈上皮内瘤变组织OLFM4和Ki-67表达及意义

郭继梅，朱高香，吕玲

(青岛市第九人民医院妇产科，山东 青岛 266002)

目的 探讨牛嗅素4(OLFM4)、细胞增殖抗原67(Ki-67)在宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中的表达及意义。方法 采用免疫组织化学S-P法分别检测21例正常宫颈上皮、26例CINⅠ、32例CINⅡ及28例CINⅢ组织中OLFM4、Ki-67蛋白的表达情况及其与临床病理特征的关系，并计算两种标记物诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及约登指数。结果 CIN组织中OLFM4的表达高于正常宫颈上皮组织中的表达，差异有显著性(χ2=9.012～9.463，P<0.05)；而OLFM4在CIN不同级别组织中的表达差异无显著性(P>0.05)。OLFM4诊断宫颈上皮内瘤变的灵敏度为94.0%，特异度为80.0%，阳性预测值为95.1%，阴性预测值为76.2%，约登指数为0.740。Ki-67在不同级别CIN组织的表达高于在正常宫颈上皮组织中的表达，差异有显著性(χ2=4.24～5.46，P<0.05)；而Ki-67在CIN不同级别组织中的表达差异无显著性(P>0.05)。Ki-67诊断宫颈上皮内瘤变的灵敏度为60.2%，特异度为50.0%，阳性预测值为83.3%，阴性预测值为23.3%，约登指数为0.102。结论 OLFM4、Ki-67的表达随CIN进展而增强，OLFM4的辅助诊断价值高于Ki-67。

牛嗅素4；细胞增殖抗原67；宫颈上皮内瘤样病变；免疫组织化学

宫颈上皮内瘤变(CIN)与宫颈癌的发病密切相关，CIN发展至宫颈癌一般需要8～10年的时间，若能在癌前病变阶段找到预测病变进展的标记物，则可以在早期发现并能预防宫颈癌的发生。牛溴素4(OLFM4)是近年来新发现的一种糖蛋白，与消化系统肿瘤的发生发展密切相关，但与宫颈病变关系的研究很少。细胞增殖抗原67(Ki-67)用于宫颈病变的诊断已取得共识。本研究采用免疫组织化学方法分别检测OLFM4和Ki-67在CIN组织中的表达，探讨两者在CIN发生发展中的作用及其意义。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1材料来源

2009年6月—2012年6月，在我院妇产科经宫颈活检、环形电切术及手术切除的宫颈上皮组织蜡块标本107例。其中正常宫颈上皮组织标本21例，CINⅠ组织标本26例，CINⅡ组织标本(NCE)32例，CIN Ⅲ组织标本28例。病人年龄23～66岁，平均43岁。术前所有参加研究病人均未行放化疗。

1.2方法

采用免疫组织化学S-P方法检测各种组织中OLFM4、Ki-67的表达水平。按试剂盒说明步骤操作，OLFM4兔抗人多克隆抗体购于英国Abcam公司，鼠抗人单克隆抗体、SP染色试剂盒及DAB显色剂均购于北京中山金桥生物技术有限公司。阳性对照用已知阳性组织切片，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3结果判定

根据阳性细胞所占比例及染色强度计分。阳性细胞率计分：无阳性细胞为0分，阳性细胞占1%～10%为1分，11%～50%为2分，51%～80%为3分，>80%为4分。染色强度计分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。根据两者的乘积判断结果：0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为阳性()，9～12分为强阳性()。

1.4统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计处理，计数资料组间比较采用χ2检验。

2 结 果

OLFM4阳性颗粒主要位于细胞质内，在细胞核内仅见少量着色。CIN组织中OLFM4的表达高于正常宫颈上皮组织，差异有显著意义(χ2=9.012～9.463，P<0.05)；OLFM4在CIN不同级别组织中的表达差异无显著意义(P>0.05)。OLFM4诊断CIN的灵敏度为94.0%，特异度为80.0%，阳性预测值为95.1%，阴性预测值为76.2%，约登指数为0.740。Ki-67阳性颗粒主要定位于细胞核。Ki-67在不同级别CIN组织的表达高于正常宫颈上皮组织，差异有显著性(χ2=4.24～5.46，P<0.05)；而Ki-67在CIN不同级别组织中的表达差异无显著性(P>0.05)。Ki-67诊断CIN的灵敏度为60.2%，特异度为50.0%，阳性预测值为83.3%，阴性预测值为23.3%，约登指数为0.102。见表1。

表1 OLFM4、Ki-67在各种宫颈组织表达(例(χ/%))

组织类型nOLFM4-+ Ki-67-+ NCE2116(80.0)5(20.0)0011(50.0)7(35.0)1(5.0)2(10.0)CINⅠ263(8.0)19(76.0)4(16.0)014(52.0)5(20.0)4(16.0)3(12.0)CINⅡ323(6.5)9(29.0)15(48.4)5(16.1)15(45.2)3(9.7)8(25.8)6(19.3)CINⅢ282(3.7)3(11.1)16(59.3)7(25.9)7(22.2)2(7.4)5(18.5)14(51.9)

3 讨 论

3.1OLFM4在CIN组织中的表达

OLFM4基因定位于人类染色体13q14.3[1]，主要表达在细胞质内的线粒体上，小部分在细胞核上[2]。OLFM4在骨髓、前列腺、乳腺、胰腺、胃、结肠组织中呈高表达，特别是在消化系统恶性肿瘤组织中呈高表达[3]，其机制是通过抑制cyt-c的释放及活化caspase 3和caspase 9，从而减弱H2O2、TNFα诱导的细胞凋亡[4]，也可以与促凋亡因子GRIM-19发生相互作用[5]，从而减弱其介导的相关凋亡基因Gadd153、PIG12和c-Abl的表达[6]，达到抗细胞凋亡作用。同时，OLFM4通过作用于DNA合成的S期、G2/M期以调控细胞周期，促进肿瘤细胞的增殖[5]，这可能是它调节cyclin、CDK和其他效应分子(如Chk-1)的机制[7]。另外，OLFM4可能作用于PI3K/PKB的下游[8]，促进肿瘤细胞生长。OLFM4与胞外黏附分子凝集素、钙黏素相互作用，对肿瘤细胞的黏附和转移起重要作用[5]。因此，这种蛋白似乎在细胞周期的调控、细胞的黏附和迁移、细胞间相互作用及组织构建过程中发挥重要作用，但是在组织构建中的作用依靠组织类型。OLFM4已经成为胃癌发生、分化和进展的一个标记物[3]。DASSEN等[9]研究显示，OLFM4在人类子宫内膜高表达，并且子宫内膜异位症及子宫内膜癌组织中OLFM-4的表达受雌激素受体-α和EGF-1调控。本研究结果显示，OLFM4在宫颈CIN组织中的表达高于正常宫颈上皮组织，差异有显著性，提示OLFM4可作为区分正常宫颈组织及CIN组织的有效指标，并且OLFM4在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中的阳性表达率随宫颈病变进展逐渐增高，说明OLFM4能较准确地反映宫颈上皮细胞的增殖和分化情况。本研究和YU等[10]研究结果相似之处是都显示OLFM4是宫颈病变进展的标记物，和CIN的进展密切相关。但是YU等[10]研究还显示，OLFM4和宫颈癌的分化密切相关，提示其表达与宫颈癌的发生发展密切相关。这些研究说明OLFM4在女性生殖道肿瘤发生发展中起了重要作用。以后有必要进一步大样本研究OLFM4在宫颈癌及子宫内膜癌组织中的表达。

3.2Ki-67在CIN组织中的表达

Ki-67与细胞的有丝分裂有关，贯穿表达于增殖期的细胞中，基因定位于人类10号染色体，胞内定位于细胞核。Ki-67蛋白在有丝分裂的G1、S、G2和M期均有合成，在G1期出现，在S、G2期逐渐升高，在M期达到高峰，而在G0期缺失。由于其半衰期短，不表达于DNA修复状态的细胞，因此，可以准确地反映细胞的增殖活性[11]。研究表明，它与很多恶性肿瘤的发展、转移和预后具有相关性[12]。牛兆山等[13]研究结果显示，Ki-67蛋白与子宫内膜腺癌的侵袭和转移密切相关。有学者报道，Ki-67蛋白可以很好地反映宫颈癌细胞的增殖情况[14]。杨秀凤等[15]研究显示，Ki-67蛋白表达在宫颈癌化疗前后有显著的变化，从而可用于预测化疗的临床疗效。研究还显示，Ki-67蛋白表达与EBV相关胃癌有一定的关系[6]。本文结果显示，Ki-67在CINⅠ、CINⅡ、CIN Ⅲ组织中的阳性表达率明显高于正常宫颈上皮组织，说明正常宫颈上皮处于细胞增殖活性较低状态，而CIN的细胞处于增殖活性较高的状态，提示Ki-67可成为区分正常宫颈上皮及CIN组织的有效指标。

总之，OLFM4与Ki-67可能通过参与调控细胞周期，来促进细胞的增殖，并很有可能相互影响。而OLFM4诊断CIN的灵敏度、特异度、约登指数均高于Ki-67，提示OLFM4对CIN的辅助诊断价值高于Ki-67。本研究为CIN病人的早期诊断、治疗提供了监测指标。

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(本文编辑 厉建强)

THE EXPRESSIONS AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF OLFM4 AND KI-67 IN CERVICAL INTRAEPITHELIAL NEOPLASIA

GUOJimei,ZHUGaoxiang,LÜLing

(Department of Gynaecology and Obstetrics, The Ninth People’s Hospital of Qing-dao, Qingdao 266002, China)

ObjectiveTo explore the expressions of OLFM4 and Ki-67 in cervical intraepithelial neoplasia (CIN).MethodsUsing immunohistochemistry S-P method, OLFM4 and Ki-67 in 21 cases of normal cervical epithelium (NCE) and 26 cases of CIN were detected, their association with clinical and pathological features was analyzed, the diagnostic sensitivity and specificity of the two markers, the positive and negative predictive value and Youden index were calculated.ResultsThe expression of OLFM4 protein in CIN was higher than that in NCE, the difference was significant (χ2=9.012-9.463,P<0.05), and the difference of expressions of OLFM4 in different-grade CIN was not significant (P>0.05). The sensitivity of OLFM4 in the diagnosis of CIN was 94.0%, the specificity was 80.0%, the specificity was 80.0%, positive predictive value (PPV) was 95.1%, the ne-gative predictive value (NPV) was 76.2%, and the Youden index was 0.740. The expression of Ki-67 in different-grade CIN was higher than that in NCE (χ2=4.24-5.46,P<0.05), and that between different-grade CIN was not significant (P>0.05). The sensitivity of Ki-67 in the diagnosis of CIN was 60.2%, the specificity was 50.0%, the PPV was 83.3%, the NPV was 23.3%, the Youden index was 0.102.ConclusionThe expressions of OLFM4 and Ki-67 are enhanced with the progress of cervical intraepithelial neoplasia, the value of auxiliary diagnosis of OLFM4 is higher than Ki-67.

olfactomedin 4; cell proliferation antigen 67; cervical intraepithelial neoplasia; immunohistochemistry

2014-04-26;

2014-10-24

郭继梅(1971-)，女，硕士，副主任医师。

吕玲(1973-)，女，硕士，主治医师。

R711.14

A

1008-0341(2015)02-0129-03