黄藤素辅助治疗对支气管哮喘急性发作期患者炎症状态和肺功能的影响＊

兰世萍 叶春燕 王导新 朱涛

（1.成都市金牛区人民医院中医科，四川成都610000；2.成都市金牛区人民医院九里堤社区卫生服务中心，四川成都610000；3.重庆医科大学附属第二医院呼吸内科，重庆404000；4.四川大学华西医院呼吸内科，四川成都610041）

支气管哮喘（哮喘）是呼吸系统的常见疾病。流行病学研究显示，全球有近3亿哮喘患者［1～3］。随着全球支气管哮喘防治创议（Global Initiative for Asthma，GINA）的逐步推广，哮喘患者的临床控制率明显增加，但哮喘的急性发作率和死亡率并未明显下降［3］。目前认为哮喘是一种非特异性气道炎症性疾病，抗炎治疗是哮喘的核心［3］。研究发现黄藤素（Pal－matine，巴马汀）具有显著抑制炎症反应的作用，并认为其药理作用与下调NF－κB活化水平密切相关［4，5］。本实验的目的是观察黄藤素辅助治疗对哮喘急性发作期患者炎症状态和肺功能的影响，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 按照诊断标准［3］，将我院2011年3月～2013年10月收治的60例中～重度急性发作期支气管哮喘患者随机平均分为治疗组和对照组各30例，治疗组中男17例，女13例，年龄（56.7±21.3）岁；对照组中男18例，女12例，年龄（61.2±19.4）岁。支气管哮喘病史皆大于5年。两组患者在年龄、病程和病情等方面比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 两组患者均给予抗菌素、氨茶碱和化痰药等常规治疗，并以布地奈德1mg（普米克令舒，英国阿斯利康）加生理盐水2ml雾化吸入，2次／天。干预组在常规治疗基础上加用黄藤素胶囊（上海华源安徽仁济制药有限公司）0.4g口服，3次／天。在治疗过程中未出现过敏和药物热等严重不良反应。

1.2.2 肺功能检测 两组患者均于治疗前及治疗5天后进行肺功能测定。吸入200μg沙丁胺醇15 min后测定FEV1占预计值%和PEF个人最佳值%。

1.2.3 血中IL－4、IL－5和IL－13水平检测 取患者治疗前及治疗5天后清晨空腹静脉血，根据ELISA试剂盒（R＆D Systems，USA）说明书方法，对血中IL－4、IL－5和IL－13水平进行检测。

1.2.4 血细胞中NF－κB p65活化水平检测 取患者治疗前与治疗5天后清晨空腹静脉血，按照试剂盒操作要求提取血细胞中总蛋白，并进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE），然后移至硝酸纤维素滤膜上用脱脂奶粉封闭1小时，分别加入鼠抗人单克隆抗体antitotal NF－κB p65（1∶1000）和anti－phosph－NF－κB p65（1∶1000），4℃孵育过夜，洗膜后加入相应的辣根过氧化物酶标记的二抗（1∶1000），用ECL进行显色，用凝胶成像分析系统进行扫描。用与total NF－κB p65条带灰度比值作为phosph－NF－κB p65的相对表达量。

1.3 统计学分析 用SPSS17.0软件进行分析，计算数据使用±s表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗前后FEV1占预计值%和PEF个人最佳值%比较 经5天治疗后两组患者FEV1占预计值%和PEF个人最佳值%较治疗前均有明显改善，差异有统计学意义（均P＜0.05）；且干预组较对照组改善更加显著，差异有统计学意义（均P＜0.05），见表1。

2.2 血中IL－4、IL－5和IL－13水平测定 经过5天治疗后，两组患者血中IL－4、IL－5和IL－13水平均较治疗前明显下降，差异有统计学意义；且干预组患者下降更加明显，差异有统计学意义（均P＜0.05），见表2。

2.3 血中NF－κB p65活化水平 治疗5天后，两组患者血细胞中磷酸化NF－κB p65／总NF－κB p65比值均较治疗前明显下降，差异有统计学意义（均P＜0.05）；且干预组患者比值下降更加明显，差异有统计学差异（均P＜0.05），见图1、表2。

表1 两组患者治疗前后FEV1占预计值%和PEF个人最佳值%比较（±s）Table 1 FEV1%and PEF%in two group

表1 两组患者治疗前后FEV1占预计值%和PEF个人最佳值%比较（±s）Table 1 FEV1%and PEF%in two group

注：与治疗前比较，①P＜0.05；与对照组比较，②P＜0.05

指标 干预组（n＝30）对照组（n＝30）治疗前 治疗5天 治疗前 治疗5天FEV 1占预计值% 48.7±18.3 76.2±20.6①② 46.8±19.1 63.4±17.8①PEF个人最佳值% 33.6±13.7 58.9±16.5①② 34.5±12.4 45.7±15.3①

表2 两组患者血中IL－4、IL－5和IL－13水平及血细胞磷酸化NF－κB p65／总NF－κB p65比值（±s）Table 2 The serum levels of IL－4，IL－5 and IL－13 in two groups

表2 两组患者血中IL－4、IL－5和IL－13水平及血细胞磷酸化NF－κB p65／总NF－κB p65比值（±s）Table 2 The serum levels of IL－4，IL－5 and IL－13 in two groups

注：与治疗前比较①P＜0.05；与对照组比较②P＜0.05

指标 干预组（n＝30） 对照组（n＝30）治疗前 治疗5天 治疗前 治疗5天IL－4（pg／ml） 144.2±36.2 93.1±24.5①② 155.6±43.4 112.8±19.6①IL－5（pg／ml） 6456.8±1277.2 4459.5±682.2①② 6251.7±1362.3 5371.4±892.7①IL－13（pg／ml） 15.7±3.7 8.1±2.1①② 16.1±3.4 12.3±1.7①磷酸化NF－κB p65／总NF－κB p65 0.93±0.2 0.45±0.11①② 0.92±0.23 0.73±0.15①

图1 两组患者血细胞中磷酸化NF－κB p65和总NF－κB p65的表达水平Figure 1 The protein expression of phosph－NF－κB p65 and total NF－κB p65 in blood.

3 讨论

支气管哮喘（bronchial asthma，哮喘）是最常见的慢性呼吸系统疾病之一，研究表明全球患病人数近3亿［1～3］。同时流行病学调查显示，由于空气污染的加剧，哮喘的发病率呈逐年增加的趋势［3，6］。另一方面，虽然随着GINA的逐步推广，明显增加了哮喘患者的临床控制率，但哮喘的急性发作率和死亡率并未明显下降［3］。

哮喘是一种由多种细胞（包括肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和气道上皮细胞等）和炎症介质参与的慢性气道炎症性疾病。持续的气道炎症反应是哮喘发生和发展的重要原因［1～3］。慢性气道炎症可致气道的慢性持续性破坏，导致反复修复和结构重塑，最终发展为不完全可逆性气道阻塞［1］。因此，控制气道慢性炎症成为延缓支气管哮喘患者病情进展与肺功能进行性衰退的关键［6～8］。黄藤素（Palmatine）是防己科植物黄藤中提取得到的生物碱。研究发现黄藤素具有包括抑制炎症反应、抑制氧化应激、抗病毒、抗细菌和抗真菌等多种药理学活性［9，10］。目前黄藤素主要用于上呼吸道感染、感染性腹泻、结膜炎和阴道炎等炎症相关性疾病的辅助治疗［9］。我们的研究发现，在给予成年中到重度急性发作期哮喘患者雾化吸入糖皮质激素等常规治疗的基础上予黄藤素辅助治疗5天后，肺功能指标（FEV1占预计值%和PEF个人最佳值%）较对照组患者改善更加明显，差异有统计学意义（均P＜0.05）。该结果表明黄藤素具有扩张支气管、改善肺功能的作用。

Th2细胞的过度活化及相关的细胞因子（主要包括IL－4、IL－5和IL－13等）持续释放是导致嗜酸性粒细胞和巨噬细胞等炎症细胞浸润的重要原因［1－3］。我们使用ELISA对患者血中IL－4、IL－5和IL－13的表达水平进行检测后发现，在常规治疗基础上使用黄藤素治疗5天后哮喘患者血中IL－4、IL－5和IL－13水平较对照组患者下降更明显，差异有统计学意义（均P＜0.05）。基础研究发现，黄藤素抑制炎症反应和抗氧化应激作用与下调NF－κB活化水平密切相关［4，5，9，10］。同时大量基础和临床研究均证实，NF－κB信号通路在哮喘相关的气道炎症反应中扮演着重要的角色［1，3，11］。下调或抑制NF－κB信号通路可以有效地抑制气道炎症反应，改善哮喘动物模型和患者的肺功能及临床症状，是哮喘等炎症性疾病治疗的重要靶点［12］。我们使用western blot法对患者血细胞NF－κB p65活化水平进行分析发现，在常规治疗基础上使用黄藤素治疗5天后哮喘患者血细胞磷酸化NF－κB p65／总NF－κB p65比值较对照组下降更加明显，差异有统计学差异（均P＜0.05）。研究表明，黄藤素可以有效抑制哮喘相关的炎症反应，并可能与下调NF－κB活化水平密切相关。该临床研究过程中干预组患者未出现与黄藤素相关的严重不良反应。

4 结论

本研究结果提示，黄藤素可能通过抑制NF－κB的活化下调支气管哮喘急性发作期患者的炎症水平，改善患者的肺功能，为黄藤素应用于支气管哮喘的治疗奠定了基础。但本研究入组样本量和观察时间有限，仍需要大规模、多中心和随机的临床观察资料进一步证实黄藤素在支气管哮喘治疗中的价值。

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