缺血性脑血管病患者血清巨噬细胞移动抑制因子与肿瘤坏死因子α水平的变化

周　霞, 张　浩, 贺恒鹏, 赵　娜

(中国医科大学附属第四医院 检验科, 辽宁 沈阳, 110032)



缺血性脑血管病患者血清巨噬细胞移动抑制因子与肿瘤坏死因子α水平的变化

周霞, 张浩, 贺恒鹏, 赵娜

(中国医科大学附属第四医院 检验科, 辽宁 沈阳, 110032)

摘要:目的探讨缺血性脑血管病患者血清MIF与TNF-α水平的变化。方法检测并比较140例缺血性脑血管病患者和20例健康人群的血清MIF、TNF-α的含量。结果缺血性脑血管病组患者血清MIF、TNF-α水平显著高于对照组(P<0.01)。急性脑梗死患者中，重度组血清MIF、TNF-α水平最高，轻度组最低，差异均有统计学意义(P<0.05)。血清MIF、TNF-α水平呈正相关性，并与缺血性脑血管病患者病情密切相关。ROC曲线分析显示，血清MIF和TNF-α水平对患者病情有提示意义。结论血清MIF、TNF-α的含量变化与缺血性脑血管病的发生、发展密切相关，检测血清中MIF、TNF-α的含量对缺血性脑血管病的预防和诊疗有重要的临床意义。

关键词:缺血性脑血管病; 巨噬细胞移动抑制因子; 肿瘤坏死因子-α

缺血性脑血管病(ICVD)是由于局部脑组织血液循环障碍导致缺血、缺氧而发生的软化坏死，具有发病率高、致残率高、病死率高的特点，严重影响患者的身心健康和生活质量。缺血后脑神经元损伤死亡归因于多种分子参与的炎症反应。巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是一种促炎因子，可抑制巨噬细胞的自由游走移动，吸引其在炎性反应局部的浸润聚集，增强它的吞噬功能，还可诱导巨噬细胞分泌多种细胞因子。有研究[1]表明, MIF可能参与ICVD的免疫炎症调节过程并发挥重要作用。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)参与了脑缺血后血脑屏障的破坏和炎症反应的启动，当脑组织缺血缺氧时，TNF-α在颅内大量表达，通过多种途径发挥重要的神经毒性作用。本研究结合患者临床资料，分析血清MIF、TNF-α水平与病情程度之间的关系，并研究血清MIF与TNF-α水平之间的相关性，现报告如下。

1资料与方法

1.1　一般资料

收集中国医大四院2013年1月—2014年7月诊断明确的ICVD住院患者140例,按脑血管病分类及临床诊断标准分为: ① 急性脑梗死组(ACI组发病2周以内)88例,男62例,女26例,年龄(63.25±10.78)岁。符合全国第4届脑血管病学术会议上修订的临床诊断标准[2]: 经CT或者磁共振成像(MRI)诊断确诊; 未见任何影响神经系统评分的残疾。按美国国立卫生研究所卒中量表(AIHSS评分)，进行神经功能缺损程度评估88例患者:重度梗死31例(男19例，女12例)，中度梗死26例(男20例，女6例)，轻度梗死31例(男23例，女8例); ② 短暂性脑缺血发作组(TIA组)12例,男5例,女7例,年龄(61.5±12.08)岁。临床有明确TIA体征,并且CT/MRI未见脑梗死证据; ③ 椎-基底动脉供血不足组40例,男17例,女23例,年龄(58.12±12.47)岁。患者近2周内间断有明显头痛、头昏、眩晕、耳鸣、恶心、呕吐等症状,但没有确切的可以诊断为TIA或脑梗死的证据和体征,取血时有明显症状。同时，收集男女各10例健康体检者作为对照组，年龄(59.9±10.08)岁。

1.2　方法

取所有对象于清晨空腹采集静脉血3 mL，病例组为临床治疗前采集的标本，并且无溶血、黄疸及乳糜血(室温下静置20 min, 3 500 r/min, 5 min离心后分离血清置于-80 ℃冰箱保存)。TNF-α测定：用R&D公司的Human TNF-α试剂盒，按说明书操作，结果用AT-FAME全自动酶标仪检测。MIF测定：用RayBio公司的Human MIF试剂盒，按说明书操作，结果用AT-FAME全自动酶标仪检测。

1.3　统计学处理

用SPSS 21.0统计软件进行统计学分析。对于实验数据首先用Kolmogorov-Smirnov方法作正态性检验和方差齐性检验，计量资料以均数±标准差表示。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。应用Spearman相关系数判断MIF和TNF-α之间的相关性,并分析其与疾病相关性。并应用ROC曲线分析血清MIF和TNF-α水平对患者病情的提示意义。设置检验水准α=0.05。

2结果

2.1　缺血性脑血管病患者血清MIF、TNF-α含量和各组间的比较

应用单因素方差分析结果显示，缺血性脑血管病组与对照组之间血清MIF、TNF-α含量有显著差异(P<0.05), 而且急性脑梗死组的轻度、中度、重度组之间，两两比较差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1　缺血性脑血管病患者血清TNF-α与

与对照组比较，*P<0.05; 与急性脑梗死组比较，#P<0.05;

与轻度组比较，△△P<0.01; 与中度组比较，▲▲P<0.01。

2.2　Spearman相关分析

血清MIF与TNF-α水平成正相关(r=0.913,P=0.000); 血清MIF与缺血性脑血管病患者病情呈正相关(r=0.554,P=0.000); TNF-α水平与缺血性脑血管病患者病情明显正相关(r=0.561,P=0.000)。

采用t检验对缺血性脑血管病患者的常规实验室检测指标与对照组进行简单比较，差异有统计学意义(P<0.05), 见表2。同时应用ROC曲线分析将有差异的实验室指标与MIF、 TNF-α水平进行分析, MIF(AUC: 0.895, 95%CI: 0.839～0.951), TNF-α(AUC: 0.869, 95%CI: 0.814～0.923), 糖化(AUC: 0.968, 95%CI: 0.939～0.996), 同型(AUC: 0.959, 95%CI: 0.927～0.990), 血小板(AUC: 0.220, 95%CI: 0.021～0.418), 空腹血糖(AUC: 0.755, 95%CI: 0.616～0.895), 高密(AUC: 0.297, 95%CI: 0.170～0.425)。

表2　缺血性脑血管病患者实验室检测指标与对照组比较

与对照组比较, *P<0.05。

3讨论

在ICVD中[1], 过度的炎症反应和内源性免疫反应会导致脑缺血、缺氧之后周围白细胞进入脑实质，引起免疫反应，炎细胞激活、浸润。而再灌注时，缺血神经元会释放多种炎症介质以及一系列毒性物质，引起血脑屏障和胞外基质受损、低灌注，而且缺血后炎症能够促使脑神经功能恶化，是使患者病情加重和预后不良的主要因素之一。本次实验结果显示,缺血性脑血管病组与对照组血清MIF含量有显著差异(P<0.05), 急性脑梗死的轻度、中度、重度组之间，两两比较差异也有统计学意义(P<0.05)。血清MIF与ICVD患者病情呈正相关。由此可见血清MIF含量与患者脑缺氧程度有密切关系。

MIF可由免疫细胞如单核/巨噬细胞、T细胞、B细胞，以及非免疫细胞如内皮细胞、上皮细胞、内分泌细胞、血管平滑肌细胞等合成并储存与胞质中，甚至在下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴中都有储存，在受到信号刺激时快速释放入血。有研究[3-4]表明，缺氧状态下脑组织细胞的MIF的mRNA 表达上调，是脑组织缺氧的重要信号，并且缺氧促进MIF基因的转录，使血清中MIF含量升高。MIF 能抑制小胶质细胞活化及巨噬细胞浸润，减小出血性损伤体积、减少组织水肿及减低神经损伤程度并保护脑神经细胞的功能。这与本次实验结果相一致。Lue H等[5]发现在缺血状态下, MIF作为可调节细胞间信号传导的炎症因子，可以通过下调心肌细胞下调JNK通路活性，进而下调bcl-2的表达，从而阻止心肌细胞凋亡，保护受损心肌。由此可见, ICVD患者血清MIF水平的升高可能与脑组织细胞的自身保护机制有关，但MIF具体机制需要进一步研究。

本研究结果表明，血清TNF-α含量在ICVD患者发病后即明显增高，并与疾病严重程度密切相关，这与目前国外部分研究结果相同[6-8]。TNF-α可由单核巨噬细胞，内皮细胞等产生，是机体炎症与免疫应答的最重要的炎症介质之一，参与失血、凝血、炎症及免疫防疫等过程。国内有研究[9-10]表明，血清TNF-α的浓度与脑梗死的面积呈正相关，这与本次结果相符。TNF-α在神经组织损伤病理过程中起重要作用，机制可能是其介导炎症级联反应、诱导细胞的凋亡、促进脑水肿、破坏血脑屏障等方式加重脑缺血性损伤，通过检测血清TNF-α的含量，可在一定程度上反映脑水肿的严重程度，以利于判断缺血性患者的预后，阻断TNF-α的生成和表达对改善缺血性患者的预后可能具有潜在的临床价值。

本研究结果显示，血清MIF与TNF-α正相关，这与刘双喜等[11]结果相同。血清MIF 可激活血管内皮细胞和血管平滑肌细胞表达丰富的致炎因子和细胞介质，如TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、一氧化氮等多种制炎因子，而TNF-α高表达又可刺激白细胞表达组织因子、黏附分子、NO等并放大炎症反应过程，加重脑组织损伤[12-13]。

ROC曲线下的面积( AUC)被认为是评估一个试验诊断价值的最好的指标，当AUC<0.5时无诊断价值，AUC在0.5～0.7时有较低准确性，AUC在0.7～0.9时有一定准确性, AUC>0.9时有较高的准确性。本研究通过ROC 曲线对缺血性脑血管病患者的常规实验室检测指标[14]进行分析，结果表明MIF 和TNF-α对ICVD均有较高诊断效能, MIF略高于TNF-α, 同时糖化血红蛋白、同型半胱氨酸、空腹血糖对缺血性脑血管病也有较高诊断效能。因此，在对ICVD进行临床诊疗时可以结合MIF、TNF-α、糖化血红蛋白、同型半胱氨酸、空腹血糖等实验室指标，特别是对于CT/MRI未见明显改变、没有明显神经功能损伤体征的疑难病例诊断。

ICVD患者血清MIF含量反映了脑组织的缺氧程度，MIF对组织缺氧后的TNF-α等炎症因子的分泌升高起着重要的介导作用。MIF对脑组织神经有一定保护作用，但其促进TNF-α的分泌又增加了脑神经的损伤，因此，血清MIF、TNF-α在ICVD的致病机制还需进一步研究，进而扩大MIF的保护作用，阻断TNF-α对脑神经的损伤作用，为ICVD的治疗开辟新途径。对高危人群血清MIF、TNF-α水平监测对ICVD的早期诊断、早期干预治疗、防止严重并发症的发生具有临床意义。

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Change of relationship between serum MIF、TNF-α and ischemic cerebrovascular disease

ZHOU Xia，ZHANG Hao，HE Hengpeng, ZHAO Na

(TheFourthAffiliatedHospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang,Liaoning, 110032)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the change of serum TNF-α and MIF levels in patients with ischemic cerebrovascular disease. MethodsLevels of TNF-α and MIF in 140 patients with ischemic cerebrovascular disease and 20 healthy people were detected and compared. ResultsSerum MIF, TNF-α levels of patients with ischemic cerebrovascular disease were significantly higher than those of the control group (P<0.01). In patients with acute cerebral infarction, the levels of MIF and TNF-α were the highest in severe group and the lowest in mild group, and there were significant differences among groups (P<0.05). There was a positive correlation between MIF and TNF-α, and were correlated with ischemic cerebrovascular disease severity. ROC curve analysis showed that serum levels of MIF and TNF-α were able to reflect the clinical severity of ischemic cerebrovascular disease. ConclusionThe variation in contents of serum MIF and TNF-α is closely related to the occurrence and development of ischemic cerebrovascular disease. The detection of serum MIF and TNF-α has the important clinical significance for prevention and treatment of ischemic cerebrovascular disease.

KEYWORDS:ischemic cerebrovascular disease; macrophage migration inhibitory factor; tumor necrosis factor-α

收稿日期:2015-01-09

中图分类号:R 743

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2015)17-024-04

DOI:10.7619/jcmp.201517008