高效液相色谱法测定足光散中苦参碱含量

肖 琦，阳文武，李柏群，张 钦，田 毅，陈 爽

（1.重庆市万州食品药品检验所，重庆 404000； 2.重庆三峡中心医院药剂科，重庆 404000）

高效液相色谱法测定足光散中苦参碱含量

肖 琦1，阳文武1，李柏群2，张 钦1，田 毅1，陈 爽1

（1.重庆市万州食品药品检验所，重庆 404000； 2.重庆三峡中心医院药剂科，重庆 404000）

目的 建立测定足光散中苦参碱含量的高效液相色谱法。方法 采用迪马 Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），以甲醇 -0.025 mol／L磷酸二氢钾(7∶93）为流动相，流速为0.8 mL／min，测定波长为220 nm。结果 供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致，阴性对照无相应的色谱峰出现。苦参碱质量浓度在21.60～216.00 g／mL（r=0.999 9，n=3）范围内与峰面积线性关系良好；平均回收率为98.00%（RSD=1.29%，n=6）。结论 该法准确、重复性好，可用于足光散中苦参碱含量的测定。

足光散；苦参碱；高效液相色谱法

足光散由水杨酸（18%）、苯甲酸（12%）、硼酸（40%）、苦参（20%）和滑石粉（10%）组方，具有清热燥湿、杀虫敛汗的功效，主要用于手足癣、汗臭症的治疗。其质量标准[1]采用滴定法测定苯甲酸、水杨酸和硼酸总含量，对处方中苦参只有鉴别，无单独的含量测定。已有文献报道[2-3]，采用高效液相色谱法测定其处方中苯甲酸、水杨酸的含量，但尚无苦参含量测定的报道。笔者利用高效液相色谱法对处方中苦参的有效成分苦参碱进行含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent1100型高效液相色谱仪（VWD检测器）。苦参碱对照品（批号为110805-200508，中国食品药品检定研究院)；阴性试验用苦参药材为本所中药室的标本室提供，经本所中药师阳文武鉴定，为豆科植物苦参，符合2010年版《中国药典(一部)》规定；甲醇为色谱纯；硼酸、苯甲酸、水杨酸、氨水、三氯甲烷、磷酸二氢钾、磷酸为分析纯；水为超纯水；足光散（成都九芝堂金鼎药业有限公司，批号为 150107；广东一禾药业有限公司，批号为1409106；武汉中联集团四药药业有限公司，批号为141120）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[4-9]

色谱柱：迪马 Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.025 mol／L磷酸二氢钾（取3.4 g磷酸二氢钾溶解于1 000 mL水中，用磷酸调 pH至3.0，7∶93）；流速：0.8 mL／min；柱温：室温；测定波长：220 nm；进样量：5 μL。

2.2 溶液制备

精密称取苦参碱对照品0.010 80 g，置 50 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每 1 mL含 216.00 μg的对照品贮备溶液。取本品，研磨，混匀，精密称取1.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入5%浓氨的三氯甲烷（取5 mL浓氨试液，加三氯甲烷至 100 mL）50 mL，密塞，摇匀，称定质量，超声 30 min，放冷，加5%浓氨的三氯甲烷补足质量，摇匀，滤过，再精密吸取25 mL滤液，蒸干，加甲醇使溶解并定量转移到50 mL容量瓶中，摇匀，即得供试品溶液。按足光散处方及生产工艺制成缺苦参的阴性样品，取阴性样品，同供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各5 μL，依法进行测定。结果阴性对照品溶液对测定无干扰，见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取质量浓度为216.00 μg／mL的苦参碱对照品储备溶液 0.00，1.00，2.00，5.00 mL，置 10 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，得标准曲线系列浓度的对照品溶液。吸取上述溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，以峰面积（A）为横坐标、质量浓度（C）为纵坐标进行线性回归，得回归方程C=1.400 9 A-1.658 1（r=0.999 9，n=3）。结果表明，苦参碱质量浓度在21.60～216.00 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一苦参碱对照品溶液5 μL，连续进样6次。结果峰面积的 RSD为0.87%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品（批号为150107）溶液，分别在制备的0，2，4，6，8，10 h时进样1次。结果苦参碱峰面积的 RSD为0.95%（n=6），表明供试品溶液在10 h内稳定。

重复性试验：取同一批号（批号为150107）样品6份，按供试品溶液制备方法操作，测定苦参碱含量。结果苦参碱平均含量为9.970 mg／g，RSD为0.99%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密称取已知含量的样品(批号为150107) 6份，各0.25 g，加入质量浓度为216.00 μg／mL的苦参碱对照品 3 mL（3份），6 mL（3份）中，按2.2项下方法处理，依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 苦参碱加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n=3）

3 讨论

对于色谱柱的选择文献，多采用氨基柱[10-13]，但因氨基柱不常用，故选择了较为常见的C18柱。流动相先后采用了甲醇-水（55∶45）、甲醇-水-三乙胺（105∶95∶0.05）、甲醇-0.1%磷酸水（55∶45），所得色谱效果均不理想，后采用甲醇-0.025 mol／L磷酸二氢钾（用磷酸调pH至3.0，7∶93），获得了较好的色谱效果。

苦参碱的测定方法有高效液相色谱法[4-13]、薄层扫描法[14]等，本试验中选择了常见的高效液相色谱法对足光散中苦参碱的含量进行测定。同时，该方法的准确性和重复性好，可为足光散质量标准的制订提供参考。

[1]WS-10344（ZD-0344）2002-2012Z.国家食品药品监督管理局国家药品标准[S].

[2]李艳莉，吴晓华，马耀荣，等.反相高效液相色谱测定足光粉中苯甲酸、水杨酸的含量[J].佛山科学技术学院学报：自然科学版，2006，24（4）：68-71.

[3]余小平.高效液相色谱法同时测定足光散中水杨酸、苯甲酸的含量[J].药物分析杂志，2005，25（8）：955-957.

[4]杨 芳.高效液相色谱法测定泻停封胶囊中苦参碱含量[J].中国药业，2011，20（24）：52-53.

[5]李茂森.高效液相色谱法测定妇炎灵胶囊中苦参碱含量[J].中国药业，2010，19（23）：37-38.

[6]张 蕾，陈晓辉，李 娟，等.RP-HPLC法测定苦参中苦参碱的含量[J].沈阳药科大学学报，2005，22（1）：33-35.

[7]赵焕霞.苦参片中苦参碱和氧化苦参碱的含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2008，14（2）：13-14.

[8]田 娟，王智民，王维皓.HPLC测定苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱的含量[J].中国实验方剂学杂志，2006，12（2）：23-24.

[9]刘 莹，孟庆妍，翟宏宇.HPLC法同时测定复方苦参肠炎康片中苦参碱和氧化苦参碱的含量[J].长春中医药大学学报，2011，27（5）：842-843.

[10]茅向军，许乾丽，童 红.高效液相色谱法测定玫芦消痤膏中苦参碱含量[J].中国药业，2008，17（19）：28-29.

[11]佘志华，王秀梅，吴雅莉，等.反相高效液相色谱法同时测定阴炎净洗液中苦参碱和氧化苦参碱含量[J].中国药业，2013，22（19）：33-35.

[12]周世玉，周晓英，唐婧坤，等.高效液相色谱法测定苦参片中苦参碱含量[J].中国药业，2011，20（7）：27-28.

[13]袁祥慧，李绪伦.高效液相色谱法同时测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱含量[J].中国药业，2008，17（14）：31-32.

[14]祁海宏，邬瑾丽，屈鹏舒，等.薄层色谱扫描法测定治带片中苦参碱含量[J].中国药业，2008，17（3）：15-16.

Content Determination of Martine in Zuguang Powder By HPLC

Xiao Qi1，Yang Wenwu1，Li Baiqun2，Zhang Qin1，Tian Yi1，Chen Shuang1
(1.Chongqing Wanzhou Institute for Food and Durg Control，Chongqing，China 404000; 2.Depantment of Pharmacy Chong Qing Three Gorges Centre Hospital，Chongqing，China 404000)

Objective To establish a method for content determination of martine in Zuguang Powder by HPLC.Methods The Diamonsil C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)was used with the mobile phase of methanol-0.025 mol／L potassium dihydrogen phosphate(7∶93) at a flow rate of 0.8 mL／min，the detection wavelength was set at 220 nm.Results The test solution peak retention time and peak retention time of the reference solution was consistent with the negative control without the corresponding peaks.Martine was linear within 21.60-216.00 μg／mL（r=0.999 9，n=3），and the average recovery rate of martine was 98.00%（RSD=1.29%，n=6）. Conclusion The method is accurate and better repeatable，and can be used for the content determination of martine in Zuguang Powder.

Zuguang Powder；martine；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)17-0055-02

肖琦（1978-），男，硕士研究生，主管药师，主要从事食品、药品、保健食品和化妆品检验工作，（电话）023-58152309（电子信箱）1600818606＠qq.com；李柏群（1971-），女，大学本科，副主任中药师，研究方向为中药临床及中药制剂研发，本文通讯作者，（电话）023-58103218（电子信箱）bqlicn＠163.com。

2015-03-17)