复方黄根颗粒（无糖型）质量标准研究*

唐德智，劳广耀，杨 辉

(1．广西壮族自治区南宁食品药品检验所，广西 南宁 530001； 2．广西壮族自治区平乐县中医医院，广西 桂林 542400)

复方黄根颗粒（无糖型）质量标准研究*

唐德智1，劳广耀2，杨 辉1

(1．广西壮族自治区南宁食品药品检验所，广西 南宁 530001； 2．广西壮族自治区平乐县中医医院，广西 桂林 542400)

目的 建立复方黄根颗粒（无糖型）的质量标准。方法 采用薄层色谱（TLC）法对方中叶下珠、黄芪进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定叶下珠中有效成分没食子酸的含量。结果 TLC特征明显，阴性无干扰，专属性强；没食子酸进样量在0．252～2．264 χg范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0．999 9，n=6)，平均加样回收率为100．88%，RSD=1．78%（n=6）。结论 该标准可用于复方黄根颗粒（无糖型）的质量控制。

复方黄根颗粒（无糖型）；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准

复方黄根颗粒（无糖型）是由广西平乐县中医医院根据传统壮医药新研制开发的院内制剂，主要由黄根、叶下珠、黄芪、绞股蓝等中药制成。其君药黄根为茜草科植物三角瓣花 Prismatomeric connate Y．Z．Ruan的干燥根，具有祛瘀生新、利湿退黄的功效[1]254，临床用于治疗慢性乙型肝炎、脂肪肝、酒精性肝病所致食欲不振。叶下珠为大戟科植物叶下珠 Phyllanthusurinaria Linn．的干燥全草，具有平肝清热、利水解毒的功效[1]89。动物试验证明，叶下珠对乙型肝炎病毒有抑制作用，具有保护肝细胞及提高细胞免疫力作用，其中没食子酸为主要活性成分，具有抗病毒作用。黄芪为豆科植物蒙古黄芪 Astragalus membra-naceus Bge．var．mongholicus (Bge．)Hsiao或膜荚黄芪 Astragalus membra-naceus(Fisch．)Bge．的干燥根，能增强淋巴细胞免疫功能，对细菌和病毒均有明显抑制作用[2]。本试验中用薄层色谱（TLC）法对方中叶下珠、黄芪进行鉴别，用高效液相色谱（HPLC）法测定制剂中没食子酸含量，建立了可靠、准确、专属性强的质量控制标准。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；AE240型电子天平（瑞士梅特勒公司）；KQ-300型超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司)。没食子酸对照品（批号为110831-200803），黄芪甲苷对照品（批号为110781-200613），叶下珠对照药材（批号为121374-200401）均由中国药品生物制品检定所提供；复方黄根颗粒（无糖型，广西平乐县中医院自制 ，批号为20120112，20120202，20120303，20120315，20120327，20120510，规格为每袋装3 g）；硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）；甲醇为色谱纯，磷酸为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 定性鉴别

叶下珠[3]：取本品3 g，研细，加水15 mL使溶解，滤过，滤液用乙酸乙酯30 mL振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取叶下珠对照药材2 g，加75%乙醇20 mL，加热品流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水100 mL，煮沸30 min，滤过，滤液用乙酸乙酯30 mL振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。再取没食子酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0．5 mg的溶液，作为对照品溶液。再取阴性样品(缺叶下珠的样品)，按照供试品溶液的制备方法制备，即得阴性对照品溶液。吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-氯仿-丙酮-甲酸(8∶5∶7∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱和对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照品溶液无干扰。见图1 A。

图1 薄层色谱图

黄芪[4]：取本品内容物 3 g，研细，加甲醇 50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用l%氧氧化钠溶液洗涤2次，每次20 mL，弃去碱液，再加正丁醇饱和的水洗至中性，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。再取阴性样品(缺黄芪的样品)，按照供试品溶液的制备方法制备，即得阴性对照品溶液。吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以正丁醇-醋酸 -水(4∶1∶5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。见图1 B。

2．2 含量测定[5-8]

2．2．1 色谱条件

色谱柱：Agilent Zorbax SB C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0．1%磷酸（10∶90）；检测波长：270 nm；流速：1．0 mL／min；柱温：30℃；进样量：10 μL。

2．2．2 溶液制备

精密称取干燥至恒重的没食子酸对照品12．58 mg，置50 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0．2516 g／L对照品贮备液，精密吸取5 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取本品内容物，混匀，研细，取约0．8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇25 mL，称定质量，超声处理30 min(功率300 W，频率40 kHz)，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0．45 μm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按质量标准中的处方，按制备工艺制成缺叶下珠的阴性供试品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2．2．3 方法学考察

专属性考察：分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图，结果见图2。结果阴性对照品溶液的色谱图中，在没食子酸保留时间的相应位置上无没食子酸峰出现，表明此方法专属性强，阴性对照无干扰。

图2 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取2．2．2项下对照品贮备溶液1，3，5，7，9 mL，分别置10 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。分取上述不同质量浓度对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以进样量为横坐标、以峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程为 Y=3 069．2 X-4．669 5，r=0．999 9（n=5）。结果表明，没食子酸进样量在0．252～2．264 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定没食子酸峰面积。结果的 RSD为0．19%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取供试品溶液(批号为20120315)，分别在0，2，4，6，8，10，12，24 h进样测定，记录峰面积。结果的 RSD为0．96% （n=8），表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批号样品（无糖型，批号为20120315），按2．2．2项下方法制备供试品溶液，分别测定，计算没食子酸含量。结果平均含量为每袋10．95 mg，RSD为0．89%（n=5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知没食子酸含量的样品（批号为20120315，每袋10．95 mg）粉末约0．4 g，共6份，精密称定，分别精密加入一定量的没食子酸对照品，按2．2．2项下制备供试品溶液，测定没食子酸的含量，计算回收率。结果见表1。

表1 没食子酸加样回收试验结果（n=6）

2．2．4 样品含量测定

取不同批号的样品，依法制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算样品中没食子酸的含量。结果见表2。

表2 复方黄根颗粒（无糖型）含量测定结果（n=3）

3 讨论

制剂中的君药为黄根，但因制剂过程中提取工艺的原因，黄根的薄层色谱未检出，因此本试验选择了方中另2味主药叶下珠、黄芪进行定性鉴别。现代药理试验证明，叶下珠具有抗乙型肝炎病毒、保肝等作用[9]。没食子酸为其有效成分之一，是可水解鞣质的单体，具有抗病毒作用。本试验中用HPLC法测定没食子酸的含量，方法简便、快速。

在提取溶剂考察时分别用稀乙醇、乙醇、甲醇、50%甲醇为提取溶剂，结果50%甲醇对没食子酸提取效率高，故以50%甲醇作为提取溶剂。对提取方法冷浸法、热回流提取法、超声处理法进行考察，结果表明超声处理法效果较理想。

在试验中，取没食子酸对照品溶液，在200～400 nm波长范围内进行光谱扫描，结果其在270 nm波长处吸收值最大，灵敏度最高，故选择270 nm为测定波长。

[1]广西壮族自治区食品药品监督管理局．广西壮族自治区壮药质量标准（第二卷）[M]．南宁：广西科学技术出版社，2011．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：283．

[3]冀德富，郭东艳，王军练，等．叶下珠中没食子酸的定性定量方法研究[J]．现代中医药，2007，27(6)：60-61．

[4]马 睿，代 龙，孙明江，等．白芪龙胶囊的质量标准研究[J]．中国实验方剂学杂志，2011，17(8)：52-55．

[5]张芝英．高效液相色谱法测定叶下珠中没食子酸的含量[J]．中国药业，2002，11(7)：53．

[6]郭朝晖，倪 琳，蒋祥生．HPLC测定苦味叶下珠胶囊中没食子酸的含量[J]．华西药学杂志，2007，22(1)：81-82．

[7]胥道宝，张转平．叶下珠中鞣酸及没食子酸的含量测定[J]．西北药学杂志，2008，23(1)：31-32．

[8]汤迎爽，康阿龙，宋红儒．高效液相色谱法测定痔速宁片中没食子酸含量[J]．中国药业，2010，19(23)：39-40．

[9]玉顺子．叶下珠及其制剂药理作用及临床应用研究进展[J]．中国药业，2010，19(7)：87-88．

Study on Quality Standard of Compound Huanggen Granules(Sugar Free)

Tang Dezhi1,Lao Guangyao2,Yang Hui1
(1．Nanning Municipal Institute for Food and Drug Control,Nanning,Guangxi,China 530001; 2．Pingle County Hospital of Traditional Chinese Medicine,Guilin,Guangxi,China 542400)

Objective To establish the quality standard of Compound Huanggen Granules(sugar free)．M ethods Phyllanthus urinaria and Astragali radix in this preparation were identified by TLC and the content of gallic acid as the effective component in Phyllanthus urinaria was determined by HPLC．Results The TLC characteristics were distinctive without interference by the negative control and with strong specificity;the linear concentration range of gallic acid was 0．252-2．264 μg(r=0．999 9,n=6)and the average sample recovery rate was 100．88%，RSD=1．78%(n=6)．Conclusion The established standard can be used for the quality control of Compound Huanggen Granules(sugar free)．

Compound Huanggen Granule(sugar free);TLC;HPLC;quality standard

唐德智，男，副主任药师，主要从事中药制剂的分析研究，（电话）0771-3132340（电子信箱）tangdz7497＠163．com；杨辉(1963-)，男，副主任药师，主要从事药品检验、质量标准研究与提高方面工作，本文通讯作者，（电话）0771-3100835（电子信箱）yh07719001＠21cn．com。

2014-01-28；

2014-06-04)

χ广西壮族自治区卫生厅基金资助项目，项目编号：GZYZ-10-40。

R284．1；R286．0

A< class="emphasis_bold">文章编号：1

1006-4931(2015)03-0025-03