胎盘多肽对MDS患者骨髓病态造血的影响

2015-02-25 05:56王清丁倩黄竹芸
西部医学 2015年6期
关键词:骨髓细胞病态多肽

王清 丁倩 黄竹芸

(贵州省人民医院血液科, 贵州 贵阳 550002)

胎盘多肽对MDS患者骨髓病态造血的影响

王清 丁倩 黄竹芸

(贵州省人民医院血液科, 贵州 贵阳 550002)

目的 研究胎盘多肽对骨髓病态造血的影响。方法 选取2010年10月~2012年12月住院治疗的30例骨髓增生异常综合征(MDS)患者作为研究对象,另选取30例同期体检的健康人作为对照组。采用免疫组化方法检测其造血细胞[骨髓细胞(Bone marrow cell Fas ligand, Fas)和骨髓细胞配体(Bone marrow cell Fas ligand, FasL)]的表达。体外培养使用胎盘多肽,并观察其对两组造血功能以及造血细胞凋亡的影响。结果 MDS患者不同病种的Fas表达不同,幼红细胞性顽固性贫血(refractory anemia,erythroblastic,RAEB)患者明显低于难治性贫血(Refractory anemia,RA)患者,过量的幼红细胞性顽固性贫血(refractory anemia with excess blasts, RAEB-t)患者明显低于RAEB 患者,三者之间差异均具有统计学意义(均P<0.05)。MDS患者的CFU-GM 和CFU-E明显低于对照组(P<0.05),加入胎盘多肽对对照组的粒细胞-巨噬细胞集落单位(Granulocyte macrophage colony Generating units, CFU-GM) 和红细胞集落生成单位(Red cellsColony forming unit, CFU-E)无明显影响,但明显升高MDS患者的CFU-GM和CFU-E(P<0.05),浓度越大,升高越明显。MDS患者造血细胞凋亡明显高于对照组,加入胎盘多肽后明显降低MDS患者的细胞凋亡。结论 MDS患者的Fas和FasL的表达异常,胎盘多肽可能通过降低造血细胞凋亡从而促进正常造血。

胎盘多肽; MDS患者; 骨髓造血; 细胞凋亡

骨髓增生异常综合征(MDS)是一种造血系统恶性疾病,发病趋于老年化,60岁以上的患者占80%以上[1]。导致骨髓增生异常的原因较多,发病机制还不清楚,目前临床治疗比较困难,虽然有去甲基化药物和/或联合化疗等治疗方案,但预后仍较差,仍需要对疾病的发生机制及药物治疗开展广泛研究。胎盘多肽是一种新型的免疫分子,对骨髓造血细胞具有保护作用,可以促进造血功能,同时对白细胞也具有一定的保护作用。本文就胎盘多肽对MDS患者的骨髓病态造血影响进行研究,现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2010年10月~2012年12月期间在我院住院治疗的30例MDS患者为研究对象,男性16例,女性14例,年龄49~78岁,平均(61.35±9.23)岁。其中11例患者患有难治性贫血(RA),13例患有RA伴有过多的原始细胞(RAEB),6例患有转变中的RAEB(RAEB-t)。另选取30例同期到本院体检的健康人作为对照组,两组对象的性别、年龄差异无显著性(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法 采用免疫组化法检测Fas和FasL的表达,取患者骨髓细胞经过离心,加甲醛丙酮固作液以及碱性磷酸酶孵育15min,显微镜下观察,阳性部位出现红色标记物时,用PBS淋洗,苏木素复染10s后自来水淋洗,油镜下计数500个有核细胞,计算阳性率。采取单层琼脂法体外培养CFU-GM,甲基纤维素法体外培养CFU-E。于两种培养皿中分别加入10μg/ml和50μg/ml的胎盘多肽,显微镜下观察。≥40 个细胞为1 个CFU-GM 集落, 8~ 50个细胞组成的细胞团为1 个CFU-E 集落。采用德国Roche公司的Cell Death Detet ion ELIS-APLUS仪器检测细胞凋亡[3]。具体方法:将细胞悬液经过孵育、离心,在孵育后加入缓冲培养液250μl,每个孔再加入100μl的ABTS溶液作为底物,反应15min后在450nm波长下测定吸光度值。

1.3 观察指标 观察MDS患者不同病种的Fas和FasL表达,对比MDS患者与正常人的CFU-GM、CFU-E以及加入胎盘多肽后的变化情况,统计MDS患者和正常人的造血细胞凋亡情况,并观察加入胎盘多肽后细胞凋亡的变化情况。

1.4 统计学处理 应用SPSS 11.5统计软件进行处理,多组间均数比较采用方差分析,阳性率采用Fisher精确检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同病种患者的Fas和FasL表达 MDS患者不同病种的Fas表达不同, RAEB患者明显低于RA患者,RAEB-t患者明显低于RAEB 患者,三者间差异均有统计学意义(均P<0.05),见表1。

2.2 MDS患者与对照组的CFU-GM和CFU-E统计情况 MDS患者的CFU-GM 和CFU-E明显低于对照组(P<0.05);加入胎盘多肽后对对照组的CFU-GM 和CFU-E无明显影响,但明显升高MDS患者的CFU-GM 和CFU-E(P<0.05),见表2。

表1 不同病种的Fas和FasL的表达结果

注:与RAEB相比,①P<0.05;与RAEB-t相比,②P<0.05

表2 MDS患者和对照组的CFU-GM和CFU-E统计

2.3 MDS患者与对照组造血细胞凋亡情况 MDS患者造血细胞凋亡明显高于对照组(P<0.05);加入胎盘多肽后,明显降低MDS患者的细胞凋亡(P<0.05),但对对照组患者无明显影响(P>0.05),见表3。

表3 MDS患者与对照组造血细胞凋亡情况统计

注:与对照组相比,①P<0.05;与未加入胎盘多肽相比,②P<0.05

3 讨论

骨髓增生异常综合征(MDS)是一种造血系统恶性疾病,临床上以外周血一系至三系血细胞减少、骨髓无效造血以及向白血病转化的高风险为特征。发病趋于老年化,60岁以上的患者占80%以上[1]。导致骨髓增生异常的原因较多,发病机制还不是很清楚,MDS患者骨髓病态造血现象是MDS 的一个主要特征,也是临床诊断MDS 的一个主要依据。胎盘多肽是一种新型的免疫分子,部分已经在实验室进行试验研究。目前临床上对骨髓肿瘤的常规治疗是放疗和化疗。而MDS就是骨髓肿瘤的一种,其临床主要特征是无效造血、细胞减少、造血细胞及其前提细胞性质异常等[4]。病态造血患者造血细胞的异常性,大多数学者认为其根本原因是遗传物质发生质变影响到基因表达造成的。而实验研究表明,胎盘多肽作为一种抗癌药物,同时也是一种免疫抑制剂,可以影响骨髓细胞的基因表达,对人体的外周血细胞以及骨髓产生明显的抑制作用[5]。

目前对于MDS 的诊断及分型尚未完全清晰,仍然存在着挑战性。早在2008年WHO就已经提出,对于髓系肿瘤的诊断以及分型强调骨髓细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学的综合检查,对于不伴外周血、骨髓原始细胞增高的患者要格外注意,并重点强调了骨髓细胞病态造血现象的重要性。但是经过临床研究,其骨髓细胞病态造血现象并不是MDS特异性的改变,出现病态造血现象有很多种因素,例如药物、毒素、生长因子的作用,感染,营养缺乏等等。我们的研究表明,MDS患者不同MDS疾病类型的Fas表达情况不同,RA患者是Fas表达最明显,Fas表达越明显造成阳性细胞的凋亡越多,说明难治性贫血是造血细胞最容易凋亡的骨髓肿瘤。MDS患者CFU-GM和CFU-E明显低于正常人,但加入胎盘多肽后CFU-GM和CFU-E明显增加,浓度越大增加越明显[6]。胎盘多肽能够促进MDS患者的CFU-GM和CFU-E明显增加的原因,在于它是一种可靠稳定的保护骨髓细胞以及白细胞的药物,明显抑制白细胞数量的下降,还可以抑制骨髓中性粒细胞和红细胞的下降以及骨髓淋巴细胞的升高,因此促进CFU-GM和CFU-E的明显增加。据国外研究报道,胎盘具有造血功能,含有多项造血因子,可以减少骨髓造血细胞的凋亡。本研究结果与国外该项研究的结果相似[7,8]。

4 结论

胎盘多肽可以减少骨髓增生异常综合征患者造血细胞的凋亡,对促进骨髓细胞造血有一定的帮助,值得临床深入研究。

[1]黄莉,吴小曼,纪宇,等.柱前衍生高效液相色谱法测定胎盘多肽注射液中的氨基酸[J].中国生化药物杂志,2012,33(4):373-380.

[2]吴兴茂,汪海源,杨振宇,等.胎盘多肽对重症呼吸机相关性肺炎老年患者免疫功能的影响[J].中国老年学杂志,2013,33(10):2240-2242.

[3]王宗春,张洪,姜俊勇.鲎试剂方法检测胎盘多肽注射液中细菌内毒素[J].湖北大学学报,2011,33(2):190-192.

[4]张云楚,纪宇.双辛可宁酸法测定胎盘多肽注射液中低浓度多肽的含量[J].中国生化药物杂志,2010,31(6):402-404.

[5]伍柏青,陈世林,张水生.112例骨髓增生异常综合征FAB和WHO分型细胞形态学观察[J].检验医学,2010,25(8):612-614.

[6]李云龙,张曦,陈幸华,等.CEAG方案治疗低增生性MDS-RAEB和AML的临床观察[J].西部医学,2010,22(7):1219-1220.

[7]何爱丽,白菊. 多发性骨髓瘤的蛋白质组学研究[J].西部医学,2013,25(7):964-967.

[8]Ptak J,Lochman J.Immunoabsorption therapy and complement activation[J].Transfus Apher Sci,2005,32(2):263-267.

Pilot study on influences of placenta polypeptide to marrow hemopoiesis for MDS patients

WANG Qing, DING Qing, HUANG Zhuyun

(DepartmentofHematology,GuizhouProvincialPeople'sHospital,Guiyang550002)

Objective To study the influences of placenta polypeptide to marrow hemopoiesis. Methods 30 patients with myelodysplastic syndrome (MDS) were selected as the research objects, and another 30 healthy people who had physical examinations in our hospital in the corresponding period were selected as the control group. Immunohistochemical method was used to detect and compare the expression of Chinese name (Bone marrow cell Fas ligand Fas Fas) and (Bone marrow cell Fas ligand FasL) expression. in hematopoietic cells. Placenta polypeptide was cultured in vitro and its influences to hematopoietic function and hematopoietic cell apoptosis for the two groups needed to be observed. Results The expression of Fas in different diseases entities for MDS patients was different; the expression for RAEB patients was significantly lower than that of Chinese name (Refractory anemia,RA) patients, while the expression for Chinese name (refractory anemia with excess blasts RAEB-t ) patients was obvious lower than that of RAEB patients; the differences among these were of statistical significance (P<0.05). For MDS patients, their Chinese names (Granulocyte macrophage colony Generating units CFU-GM) and (Red cellsColony forming unit CFU-E)were significantly lower than that of the control group, and there existed no obvious influence to CFU-GM and CFU-E for people in the control group when adding placenta polypeptide, while the CFU-GM and CFU-E for MDS patients were obviously higher, and if the concentration was greater, the higher would be more obvious. The apoptosis of hematopoietic cell for MDS patients was significantly higher than that of the control group, and adding the placenta polypeptide had reduced the apoptosis significantly for MDS patients. Conclusion The expressions of Fas and FasL for MDS patients were abnormal; and the placenta polypeptide could strength the hemopoiesis of MDS patients through reduce the apoptosis.

Placenta Polypeptide; MDS Patients; Marrow Hemopoiesis; Apoptosis

R 733.73

A

10.3969/j.issn.1672-3511.2015.06.035

2014-04-16; 编辑: 母存培)

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