绵羊BMP15基因特征、组织表达及其与产羔数性状的关联性分析

刘世佳，潘香羽，李发弟,，王维民,,李廷福

(1.甘肃农业大学动物科学技术学院，甘肃 兰州　730070；2.甘肃省肉羊繁育生物技术

工程实验室，甘肃 民勤　733300)

绵羊BMP15基因特征、组织表达及其与产羔数性状的关联性分析

刘世佳1，潘香羽1，李发弟1,2，王维民1,2,李廷福2

(1.甘肃农业大学动物科学技术学院，甘肃 兰州730070；2.甘肃省肉羊繁育生物技术

工程实验室，甘肃 民勤733300)

摘要：为了解绵羊BMP15基因序列特征和组织表达特征，SNP筛查及其与产羔数性状关联性分析，采用生物信息学方法分析绵羊BMP15基因序列特征；利用qRT-PCR检测BMP15基因在‘湖羊’下丘脑、垂体、心等13个组织中mRNA的分布；通过测序验证了绵羊BMP15基因B2突变位点并与产羔数进行关联性分析.结果表明：绵羊BMP15基因ORF全长1 377 bp，编码393个氨基酸残基，包括transforming growth factor-beta (TGF-beta) 家族和低复杂性区段(low complexity region).Protfun分析结果显示，绵羊BMP15基因作为激素参与生物学过程的可能性最高.绵羊BMP15基因在公羊十二指肠中表达量最高，显著高于其他组织(P<0.05)，而在母羊中，卵巢组织的表达量最高，且显著高于其他组织(P<0.05).B2突变位点于BMP15基因编码区外显子Ⅱ的第718 bp处，该突变为C→T突变.绵羊产羔数相关联分析结果显示：该位点与产羔数呈显著相关，其中G+型绵羊产羔数为(2.00±0.78)，显著高于++型绵羊产羔数(P<0.05)，为(1.38±0.54).绵羊BMP15基因B2突变位点与绵羊产羔数呈显著相关，可用作为提高绵羊产羔数性状的分子标记应用于育种.

关键词：绵羊； BMP15；基因特征；基因表达；产羔数

第一作者：刘世佳(1988-)，男，硕士研究生，研究方向为草食动物生产.E-mail：450110252@qq.com

Characteristics and expression ofBMP15 gene

and its association with litter size in sheep

LIU Shi-jia1，PAN Xiang-yu1，LI Fa-di1,2，WANG Wei-min1,2，Li Ting-fu2

(1.College of Animal Science and Technology,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China;2.Engineering

Laboratory of Sheep Breeding and Reproduction Biotechnology in Gansu Province,Minqin 733300,China)

Abstract：This study was performed to comprehend the sequence and tissue expression characteristics of BMP15 gene,and the relationship between mRNA expression level of BMP15 gene in different tissues and litter size in sheep.The sequence of BMP15 gene in sheep was obtained from NCBI.The tissue distributions of BMP15 were detected by RT-PCR in 13 tissues such as the heart,hypothalamus and pituitary in sheep.The sheep's BMP15 gene SNP loci were searched by sequencing,and their correlation with the litter size were analyzed.The results showed that the ORF length of BMP15 gene was 1 377 bp,encoding 393 amino acids which included some typical domains such as transforming growth factor-beta (TGF-beta) family and low complexity region.The result of Protfun showed that the possibility of BMP15 gene in sheep act as hormone in biological processes was the highest.RT-PCR assays revealed that BMP15 highly expressed in the hypothalamus tissue in ram(P<0.05) and highly expressed in the ovary of ewe(P<0.05).The BMP15 gene polymorphism was associated with the litter size which showed that the litter size of G+ was 2±0.773 4,the litter size of ++ was 1.380 5±0.541 3,and the allele G could increase 0.62 average litter size.The BMP15 gene was involved as hormone in the process that regulating the sheep breeding,it could be used as a molecular marker for raising sheep litter size.

Key words：sheep;BMP15;genetic characteristics;gene expression;litter size

绵羊产羔数是重要的经济性状，决定舍饲养羊的效益[1].影响绵羊产羔数的主效基因成为了国内外学者的研究重点之一.有文献报道，绵羊骨形态发生蛋白15 (bone morphogenetic protein 15，BMP15)基因是影响产羔数的主效基因之一[2-4].BMP15基因有2个外显子和1个内含子，外显子1长324 bp，外显子2长855 bp，中间隔着5 400 bp的内含子，编码393个氨基酸残基前蛋白，其成熟活性肽为125个氨基酸[5-6].1991年首先在‘Romney’羊上发现的BMP15被称为GDF-9B(growth differentiation factor 9B，GDF-9B)，是TGF(transforming growth factor，TGF)家族成员之一，位于绵羊X染色体上，在卵巢内仅在卵母细胞中特异性表达，其编码产物在卵母细胞发育过程中起着重要作用[7-8].BMP15是由卵母细胞分泌的生长因子，对早期卵泡的生长和分化起着重要的调节作用[9-16].BMP15基因编码区外显子Ⅱ第718 bp处发生了C→T突变，这一突变在卵巢内通过使颗粒细胞早熟及卵泡体积变小增加排卵数，是造成产羔数增加的一个重要基因[12].Hanrahan等将BMP15基因外显子Ⅱ第718处碱基突变(C→T)命名为B2突变；同时将Belclare绵羊的BMP15基因1 100处的碱基突变(G→T)命名为B4突变.储明星等[17-18]采用PCR-RFLP技术检测低繁殖力绵羊品种(‘陶赛特羊’‘特克塞尔羊’‘德国肉用美利奴羊’)中的单核苷酸多态性，同时研究BMP15基因B2突变对小尾寒羊高繁殖能力的影响，结果表明BMP15基因的B2突变对小尾寒羊高繁殖能力的影响作用十分显著.以上研究报道表明，BMP15基因在母畜繁殖过程中起重要作用，但目前有关绵羊BMP15基因结构和组织表达分布的研究尚未见报道，且其对产羔数遗传特性的机理有待进一步研究.本研究拟采用RT-PCR的方法分离绵羊BMP15基因，利用生物信息学软件分析其结构并对功能结构域进行预测，利用real-time PCR方法分析绵羊BMP15基因在不同组织中的表达差异，利用PCR-RFLP方法对BMP15基因进行与产羔数性状关联性的分析，以期为研究影响绵羊高繁殖力的机理提供基因素材.

1材料与方法

1.1用于组织表达谱分析的组织样

用于组织表达谱研究的组织样取自民勤中天羊业有限公司勤锋滩种羊场的各3只成年‘湖羊’公羊和母羊，组织样包括心、肝、脾、肺、肾、瘤胃、十二指肠、肌肉、脂肪、下丘脑、垂体、睾丸、卵巢等13种组织.

1.2用于性状关联分析的DNA样品

用于性状关联分析的试验羊群是由我室与民勤中天羊业有限公司合作组建的，包括‘湖羊’(85只)、‘小尾寒羊’(345只)、‘美利奴’(♂)ב湖羊’(♀)(48只)，共478只.收集单胎产羔记录.试验羊只的单胎产羔数均来自第1和第2胎.采集血液，按酚/氯仿法提取基因组DNA.

1.3组织总RNA提取与RT-PCR反应

采用TransZol(TransGen Biotech)提取组织总RNA，具体操作方法见说明书.采用TransScript One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix试剂盒(TransGen Biotech)对总RNA 进行反转录，反转录产物在-80 ℃冰箱中保存备用.

RT反应体系为20 μL：2 μL RNA，1 μL oligo(dT)18，10 μL 2×TS Reaction Mix，1 μL TS Enzyme Mix，1 μL gDNA Remover，5 μL RNase-free Water，轻轻混匀后于PCR仪上进行反转录，反应条件为42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 min，获得cDNA第1链.全程操作在冰上进行.

PCR反应体系为25 μL：12.5 μL 2×EasyTaqPCR Super Mix，上下游引物各0.8 μL(10 μmol/L，表1)，1 μL cDNA，10 μL ddH2O.反应条件为94 ℃预变性3 min；94 ℃变性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35个循环；最后72 ℃延伸7 min.进行PCR扩增时，同时以不加模板的体系作对照，以排除试剂污染和基因组DNA污染引起假阳性的可能.1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物.

1.4引物设计

根据绵羊BMP15基因序列(NC_019484.1)，采用Primer Premier 5.0软件设计引物，以混合DNA为模板的PCR扩增产物由上海桑尼生物科技有限公司测序，测序结果与NCBI中BMP15基因序列(NC_019484.1)进行比对，用于RFLP分析；根据绵羊BMP15基因mRNA序列(NM_001114767.1 )，用于Real-time qPCR分析；以看家基因GAPDH(NM_001190390)作为内参基因.所有引物均由上海桑尼生物科技有限公司合成(表1).

表1　绵羊BMP15和GAPDH基因特异性引物的参数

1.5SNP筛查与基因型检测

1.5.1SNP位点筛查为研究绵羊BMP15基因多态性，根据其DNA序列(NC_019484.1)设计引物(表1)，扩增‘湖羊’和‘杜泊羊’2个品种的基因组DNA.每个品种选取8个个体的混合DNA进行PCR反应，然后将PCR产物纯化回收直接送上海桑尼生物技术公司进行测序并参考文献中BMP15基因外显子Ⅱ第718处碱基(C→T)的突变设计SNP位点.

1.5.2基因型检测用上述表1中的引物进行PCR反应.扩增体系如下：2×TaqPCR Mastermix 12.5 μL，上下游引物(10 pmol/μL)各0.8 μL，ddH2O 9.9 μL，DNA模板1 μL.用2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物.限制性内切酶为BsiEⅠ，酶切体系如下：酶切反应体系为15 μL，其中PCR产物5 μL，10×buffer 1.5 μL，10 U/μLBsiEⅠ限制性内切酶1.0 μL，去离子水7.5 μL.振荡、短暂离心(12 000 r/min)，酶切反应条件为60 ℃恒温孵育30 min.取酶切产物用3%琼脂糖凝胶电泳检测，观察结果并拍照.

1.6基因型与产羔数性状关联分析

本研究进行的关联分析所用的是SAS(视窗V8版)软件中的广义线性模型(general linear model，GLM)程序，并采用方差分析的最小二乘分析法进行分析的.具体的线性模型：

Yijkl=μ+Genotypei+Breedi+Pk+Si+Combinationm+εijklm

式中，Yijkl是性状观察值，μ为总体平均数，Genotypei为基因型效应，Breedj为品种效应，Pk为胎次效应，Si为季节效应，Combinationl为组合的效应，εijkl为随机误差，假定εijkl相互独立，服从N(0，σ2)分布.

1.7BMP15基因编码蛋白的序列分析

BMP15基因编码产物开放阅读框采用NCBI的ORF Finder程序分析；理化性质采用DNAStar分析软件预测；多序列比对及进化树分析采用DNAMAN软件分析，其中用于比对的编码区序列来源于美国国家生物信息中心(NCBI)，GenBank登录号分别为：牛(NM_001031752.1)、鸡(NM_001006589.2)、家犬(XM_003640274.2)、人(NM_005448.2)、绵羊(NM_001114767.1)、家鼠(NM_009757.4)、野猪(NM_001005155.1)、山羊(XM_005700729.1)、猕猴(XM_001083980.2)、黑猩猩(XM_529247.2)、斑马鱼(NM_001020484.1)；功能结构域预测采用SMART程序(http://smart.embl-heidelberg.de/)，功能预测采用Protfun分析软件.

1.8Q-PCR分析

使用Roche LightCycler480Ⅱ荧光定量PCR仪进行定量分析每个样品的BMP15基因的表达，使用GAPDH作为内参对照.使用20 μL的扩增体系：10 μL SYBR Premix ExTaqⅡ，0.4 μL上游引物(10 μmol/L)，0.4 μL下游引物(10 μmol/L，表1)，1 μL cDNA，8.2 μL ddH2O，混合样品.扩增条件为： 95 ℃预变性30 s；95 ℃变性5 s，63 ℃退火15 s， 72 ℃延伸15 s，45个循环；熔解曲线条件为：95 ℃ 5 s，65 ℃ 60 s；阴性对照用1 μL ddH2O代替模板.试验对每个样品检测进行4个技术重复.

1.9数据处理

2结果与分析

2.1绵羊BMP15基因编码区序列分析

2.1.1绵羊BMP15基因开放阅读框分析(open reading frame，ORF) 本研究采用NCBI的ORF Finder程序，寻找出1条长1 377 bp的ORF(图1)，起始密码子位于1 bp处，终止密码子位于1 181 bp处，编码393个氨基酸残基.

图1　绵羊BMP15基因序列的ORF分析

2.1.2BMP15编码产物序列同源性及进化树分析同源比对发现，绵羊BMP15基因编码区核苷酸序列与人、黑猩猩、家鼠、家犬、猪、山羊和牛等哺乳动物的一致性分别为81.57%、81.73%、77.83%、87.34%、90.30%、99.07和98.31%，但与斑马鱼的一致性仅为47.70%，说明哺乳动物BMP15基因核苷酸序列比较保守.

绵羊BMP15基因编码蛋白含有393个氨基酸残基(图2)，与人、黑猩猩、家鼠、家犬、猪、山羊和牛等哺乳动物的一致性分别为73.16%、73.42%、68.45%、81.98%、87.31%、98.48%和97.97%，但与斑马鱼的一致性仅为28.57%，可见哺乳动物BMP15蛋白比较保守.

红色双下划线标记(从292位至393位)表示transforming growth factor-beta (TGF-beta) 家族.

2.1.3绵羊BMP15基因功能结构域预测 采用SMART程序对绵羊BMP15基因编码序列进行功能结构域预测，结果表明：在绵羊BMP15基因氨基酸序列的2～16位和292～393位分别发现了低复杂性区段(low complexity region)和Transforming growth factor-beta (TGF-beta)家族.

2.1.4绵羊BMP15基因功能预测本研究通过Protfun分析软件预测BMP15编码产物的功能，从结果分析可知(表2)，该蛋白主要作为激素，应激反应和生长因子的功能，可能性分别为1.05,0.802,0.65，由此推断BMP15可能作为生长因子在生长发育过程中发挥重要作用.

图3　绵羊BMP15基因编码序列功能结构域预测

GO功能类别几率激素1.050应激反应0.802生长因子0.650信号传感器0.487转录调控0.475免疫反应0.445转录0.401受体0.375运载体0.225离子通道0.215结构蛋白0.181金属离子转移0.020

2.2绵羊BMP15基因的PCR-RFLP与产羔数性状关联性分析

2.2.1PCR扩增由图4可见，在100 bp附近有1条特异性片段，与预期扩增片段大小一致，可以进行RFLP分析.

2.2.2SNP筛查由图5可知，在G+基因型中箭头所指处出现了C和T 2种碱基的双峰.由此可以推测在BMP15基因上发现了g.718C>T突变位点.

2.2.3绵羊BMP15基因的PCR-RFLP用HinfI限制性内切酶对BMP15基因的PCR扩增产物进行酶切，试验结果表明，不同个体的结果表现出2种不同的基因型，分别为G+，++.

M:DL2000 Marker；1～10：BMP15基因PCR扩增

图4BMP15基因PCR扩增结果

Fig.4PCR amplification of BMP15 gene

图5　绵羊BMP15基因的混合DNA测序结果

M:DL2000 Marker；3～4：G+型；2、5、6、7：++型.

图6绵羊BMP15基因PCR-RFLP电泳图谱

Fig.6PCR-RFLP Electrophoresis pattern of

BMP15gene of sheep

2.2.4绵羊BMP15基因不同基因型与产羔数的最小二乘分析绵羊BMP15基因不同基因型与产羔数的最小二乘平均数及标准误见表3.

表3　绵羊BMP15基因不同基因型与产羔数的最小二乘均值及标准误

*代表显著(P<0.05)，**代表极显著(P<0.01).

2.3绵羊BMP15基因的组织表达谱分析

采用RT-PCR 技术对湖羊心、肝、脾、肺、肾、瘤胃、十二指肠、下丘脑、睾丸、卵巢、脂肪、背最长肌、垂体等13 个组织BMP15基因mRNA 的表达情况进行了分析，结果发现BMP15基因在湖羊这13个组织中均有表达(图7～8).灰度分析发现绵羊BMP15基因在公羊十二指肠中表达水平最高，显著高于羊心、肝、肺、脾、肾、瘤胃、十二指肠、下丘脑、睾丸、脂肪、背最长肌、垂体组织(P<0.05)，在母羊卵巢中表达水平最高，显著高于羊心、脾、瘤胃、十二指肠、脂肪、背最长肌、垂体组织(P<0.05).

用荧光实时定量PCR法对绵羊BMP15基因在12个组织中表达量进行定量分析，熔解曲线如图9，目的基因与内参基因的扩增产物的Tm值非常均一，熔解曲线上呈明显单峰，表明在Q-PCR过程中，荧光强度来源于特异性的扩增产物，该基因及内参基因没有产生非特异性扩增及引物二聚体.Q-PCR结果显示，绵羊BMP15基因在公羊十二指肠组织中的表达量显著高于其他组织的表达量(P<0.05，图10),在母羊卵巢组织中的表达量极显著高于心、脾、瘤胃、十二指肠、脂肪、背最长肌、垂体组织的表达量(P<0.05，图11).

1：心；2：肝；3：脾；4：肺；5：肾；6：瘤胃；7：十二脂肠；8：下丘脑；9：睾丸；10：肌肉；11：脂肪；12：垂体.

图7绵羊公羊BMP15基因在12种

组织的RT-PCR电泳图谱

Fig.7RT-PCR Electrophoresis pattern of BMP15

gene in 12 tissues of sheep in ram

1：心；2：脾；3：肺；4：肾；5：瘤胃；6：下丘脑；7：十二脂肠；8：脂肪；9：肌肉；10：卵巢；11：肝；12：垂体.

图8绵羊母羊BMP15基因在12种组织

的RT-PCR电泳图谱

Fig.8RT-PCR Electrophoresis pattern of BMP15

gene in 12 tissues of sheep in ewe

图9　绵羊BMP15基因和内参基因的熔解曲线

3讨论

3.1关于绵羊BMP15基因结构与功能预测分析

本研究通过NCBI中ORF Finder 分析，找到1条1 377 bp的ORF[19].通过与人、小鼠、牛、牦牛、山羊等11个物种的BMP15基因编码的氨基酸序列进行了序列同源性分析，发现绵羊BMP15基因与山羊BMP15基因同源性最高，该基因在物种间高度保守.利用SMART软件在绵羊BMP15基因编码的氨基酸序列的2～16位和292～393位分别发现了低复杂性区段(low complexity region)和Transforming growth factor-beta (TGF-beta)家族.Transforming growth factor-beta (TGF-beta)是一种在许多细胞类型中控制细胞增殖、分化和其他功能的一种多功能肽.TGF-beta-1是一种由前体蛋白在氮端裂解产生的有112氨基酸残基的肽[20].许多蛋白质都与TGF-beta-1有关[21-22].来自TGF-beta家族的蛋白只有在作为同质或异质二聚体时有活性.调节因子TGF-beta发挥抑制肿瘤的作用，还能调控细胞入侵和免疫调节[23].TGF-beta的错误调控会导致肿瘤的发展.通过Protfun软件进行功能预测的结果显示，该蛋白主要具有激素、应激反应和生长因子的功能，与上述功能结构域预测中所得到的TGF-beta 结构域的功能是一致的.因此，推测绵羊BMP15基因可能作为激素和生长因子参与免疫、应激和生长发育等调控过程.

绵羊12种组织BMP15基因mRNA相对表达水平，相同小写字母表示差异不显著，不同小写字母表示显著(P<0.05).

图10绵羊BMP15基因在公羊各组织的表达

Fig.10The mRNA expression profile of BMP15

gene in various tissues of ram

绵羊12种组织BMP15基因mRNA相对表达水平，相同小写字母表示差异不显著，不同小写字母表示显著(P<0.05).

图11绵羊BMP15基因在母羊各组织的表达

Fig.11The mRNA expression profile of BMP15

gene in various tissues of ewe

3.2关于绵羊BMP15基因在不同组织中的表达

Galloway等证实BMP15基因的mRNA仅在卵母细胞中表达，BMP15蛋白在卵母细胞发育过程中是不可缺少的蛋白[12,14].Otsuka等报道了BMP15的2个重要功能：通过抑制颗粒细胞上的促滤泡生长激素(FSH)受体表达，BMP15抑制了促卵泡素的表达；BMP15能够促进颗粒细胞的增殖，在卵泡发育早期起着非常重要的作用[24].该基因在未成熟卵母细胞中表达水平较低，在培养12 h其表达丰度达到峰值，并与卵丘扩展时间相一致，随后下降，推测BMP15可能在山羊卵丘细胞扩展中发挥重要作用.从而验证了BMP15基因在山卵母细胞成熟发育过程中发挥着重要的作用.该基因在公畜中未见研究报道.本研究利用Q-PCR技术，探讨了BMP15基因在公羊与母羊不同组织中mRNA表达差异，结果显示该基因在十二指肠组织和卵巢的表达量显著高于其他组织，表明绵羊BMP15基因可能在十二指肠和卵巢中发挥功能，其具体的作用机制有待进一步研究.

3.3关于绵羊BMP15基因与产羔数性状的关联分析

杨燕燕等以蒙古羊单羔群体(18只)、多胎类型小尾寒羊(30只)为对照组对蒙古羊双羔群体(50只)进行了BMP15基因的遗传多态性分析，采用PCR-RFLP技术对BMP15的FecXI位点突变进行多态性分析；采用单核苷酸多态性标记PCR-SSCP技术对BMP15的B1位点进行多态性分析，结果表明：BMP15的FecXI位点不是影响‘蒙古羊’和‘小尾寒羊’多胎性状的主效基因；在3种群体中存在相应的B1突变28～30 bp(CTT缺失)，并发现了3种基因型，‘蒙古羊’双羔群体3种基因型频率分别0.020(++)，0.940(B+)，0.040(BB)；‘蒙古羊’单羔群体只检测到了两种基因型，基因型频率分别是0.722(++)，0.278(BB)；小尾寒羊群体中3种基因型频率分别是0.300(++)，0.667(B+)，0.033(BB).B+基因型‘蒙古羊’平均产羔数比++基因型多0.83只，差异极显著(P<0.01)，推断BMP15的B1突变有可能是控制‘蒙古羊’多胎性能的主效基因；‘小尾寒羊’群体中3种基因型母羊平均产羔数差异不显著(P>0.05)[25].Galloway等研究发现BMP15基因的突变(V31D和Q23Ter)与‘Inverdale’和‘Hanna’2个绵羊品种杂合携带母羊的高排卵数和纯合子不育相关联[12].Hanrahan等研究发现‘Belclare’和‘Cambridge’绵羊的B2突变纯合子是不育的；当BMP15基因野生纯和时，‘Belclare’母羊排卵数为(1.92±0.28)枚(n=11),‘Cambridge’母羊排卵数为(2.27±0.49)枚(n=10)；当BMP15基因突变为杂合子时，‘Belclare绵羊’和‘Cambridge绵羊’排卵数都增加，B2突变(C→T)杂合型‘Belclare绵羊’和‘Cambridge绵羊’排卵数分别为(2.69±0.48)枚(n=4)、(3.11±0.44)枚(n=15)[26].由此推测，BMP15基因可能是影响绵羊产仔数的候选基因，其基因效应与绵羊品种有关.品种间基因组的碱基变异位点可能成为种群间的多态位点，这对于动物育种及其生产有重要意义.本研究在绵羊BMP15基因发现的B2突变位点，性状关联分析结果显示：该位点与产羔数呈显著相关(P<0.05)，G+型最小二乘平均数及标准误为(2.00±0.77)，++型为(1.38±0.54)，G+型个体的产羔数显著高于++个体(P<0.05).因此，绵羊BMP15基因可作为提高母羊产羔数的分子标记.

4结论

功能结构域预测显示，绵羊BMP15基因作为激素的几率最高，推测该基因可能作为一种重要的生长因子参与调控机体的生物学过程.

绵羊BMP15基因在公、母羊中表达量最高的组织分别为十二指肠和卵巢，推测在母羊中卵巢可能是BMP15基因作用的主要靶器官之一.

绵羊BMP15基因多态性与绵羊产羔数相关联分析显示，BMP15基因B2突变与产羔数呈显著相关，可作为提高母羊产羔数的分子标记应用于育种.

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(责任编辑李辛)

收稿日期：2014-04-28；修回日期：2014-06-04

基金项目：农业部现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-39)；十二五国家科技支撑计划项目(2011BAD28B05);甘肃省科技重大专项(1102NKDH023).

通信作者：王维民，男，讲师，主要从事绵羊遗传育种与繁殖.E-mail：wangwm@gsau.edu.cn

中图分类号：Q 78

文献标志码：A

文章编号：1003-4315(2015)03-0040-09