可乐丽菲露S3B O N D和可乐丽菲露S EB O N D应用于B e a g l e s犬直接盖髓术的组织学评价

张帅

（浙江中医药大学附属杭州口腔医院，浙江 杭州310006）

·实验研究·

可乐丽菲露S3B O N D和可乐丽菲露S EB O N D应用于B e a g l e s犬直接盖髓术的组织学评价

张帅

（浙江中医药大学附属杭州口腔医院，浙江 杭州310006）

目的比较可乐丽菲露S3BOND和可乐丽菲露SE BOND及氢氧化钙Ca（OH）2（VLC DYCAL）对体内牙髓细胞的毒性。方法选择6只Beagles犬共144颗健康牙齿，108颗在颊面制备Ⅴ类洞并在洞底做人工穿髓孔，然后分为3组，实验组分别用第五代自酸蚀牙本质黏结剂SE BOND，第7代牙本质黏结剂S3BOND，对照组用Ca（OH）2（VLC DYCAL）盖髓。剩余36颗牙齿作为空白对照组。所有实验牙齿分别在盖髓后的第7、30、90天拔出，并进行组织学评价。结果病理学评价显示：7天时，3组材料有不同程度的炎症反应和组织紊乱，比较差异无统计学意义（P＞0.05）；30天时，3组材料炎症反应有差异，其中SE BOND组与S3BOND组、Ca（OH）2组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），S3BOND与Ca（OH）2间差异无统计学意义（P＞0.05），3组材料组织紊乱比较差异无统计学意义（P＞0.05）；90天时，炎症反应经组内两两比较，SE BOND与S3BOND、Ca（OH）2差异有统计学意义（P＜0.05），S3BOND与Ca（OH）2间差异无统计学意义（P＞0.05），3组材料组织紊乱比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论S3BOND较SE BOND对牙髓的刺激性较小。

Beagles犬；直接盖髓术；牙本质黏结剂；细胞毒性

牙本质黏结剂是指用于牙本质表面的黏接剂，由牙本质处理剂、底涂剂、黏接剂3部分组成。从多瓶装到一瓶装，使用步骤从三步法到一步法，至今已发展到了第7代牙本质黏结剂，即单瓶装，一步法。其操作方便，黏结强度强，但对其细胞毒性少有研究。可乐丽菲露S3BOND是第7代牙本质黏结剂的代表产品，本实验通过动物实验比较S3BOND与临床常用的第五代牙本质黏结剂SE BOND及Ca（OH）2对牙髓细胞的毒性，以期对临床操作中牙本质黏结剂的选择起到指导作用。

1 材料与方法

1.1实验动物和分组 2012年9月30日由浙江中医药大学动物实验中心提供1周岁健康，体质量6kg纯系雄性 Beagles犬6只，动物合格证号：SYXK（浙）2010-4596，每条犬选用健康的切牙、前磨牙、磨牙24颗，6条犬共选择144颗，其中108颗作为实验组，剩余牙齿36颗为对照组。按照观察时间的不同，6条犬随机分为7天，30天，90天组。每条犬1个象限6颗牙齿使用1种黏结剂，形成1个实验组。每条犬 24颗牙形成 S3BOND，SE BOND，Ca（OH）23个实验组和空白对照组。

1.2手术方法 手术2周前对Beagles犬口内的实验用牙龈上洁治，手术当天，再次对实验所用牙齿进行洁治，并用3%H2O2及0.9%NaCl冲洗。于Beagles犬后肢静脉注射3%戊巴比妥麻醉后，口腔内用棉卷隔湿，碘伏消毒，用高速裂钻在实验用牙颊中1/3处备洞，透红后制备直径0.5mm的穿髓孔，肾上腺素棉球止血，生理盐水冲洗，干燥窝洞。分别用可乐丽菲露S3BOND，可乐丽菲露SE BOND及Ca（OH）2盖髓，最后所有窝洞均以可乐丽菲露AP复合树脂充填，打磨抛光。所有操作均由同一实验者完成。

1.3取材与切片制备 6条Beagles犬分别于术后第7、30、90天处死，用4%多聚甲醛通过双侧颈动静脉进行头颈部灌注3小时，后结扎颈动静脉。固定4天后拔出所有实验用牙齿，微波炉中浸入10% EDTA液中脱钙8小时，石蜡包埋，5滋m厚度切片，HE法染色。

1.4评价标准 对切片均按照以下的评价标准[1]进行病理学分级评价。细胞炎性反应的分级标准为0～3级，0级:穿髓孔对应处牙髓组织中没有或仅有个别炎性细胞；1级:多形性及单个核细胞轻度浸润；2级:冠髓有中度炎性细胞浸润；3级:冠髓有重度炎性细胞浸润或脓肿形成。组织紊乱的分级标准为0～3级，0级:正常组织；1级:成牙本质细胞层紊乱，中心牙髓组织正常；2级:全部牙髓组织失去正常形态；3级:牙髓坏死。硬组织形成的分级标准为0～3级，0级:无硬组织形成；1级:穿髓孔下有少量硬组织沉积；2级:穿髓孔下有中等量硬组织沉积；3级:穿髓孔下有大量硬组织沉积，牙本质桥形成。

1.5统计学处理 采用SPSS17.0统计软件进行统计分析。多个样本比较的秩和检验使用kruskalwallis法进行H检验。组内两两比较，使用配对资料秩和检验。

2 结果

2.1术后不同时间各组病理学评价，见表1。7天时，3组材料有不同程度的炎症反应和组织紊乱，炎症反应方面H=3.64＜H0.05=5.99，组织紊乱方面 H=2.87＜H0.05=5.99，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

表1 术后不同时间各组病理学评价

30天时，三个实验组炎症程度比较差异有统计学意义，其中SE BOND组与S3BOND组、Ca（OH）2组比较差异有统计学意义 （P＜0.05），S3BOND与Ca（OH）2间差异无统计学意义（P＞0.05）；组织紊乱方面H=3.76＜H0.05=5.99，差异无统计学意义（P＞0.05）。

90天时，炎症反应方面H=6.32＞H0.05=5.99，P＜0.05。经组内两两比较，其中 SE BOND组与S3BOND组查 T界值表 P＜0.05；SE BOND组与Ca（OH）2组查T界值表P＜0.05，差异有统计学意义。S3BOND与Ca（OH）2差异无统计学意义（P＞0.05）；组织紊乱方面H=2.59＜H0.05=5.99，差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2空白对照组 空白对照组的牙髓组织各层细胞清晰可见，排列整齐，表明本实验中标本制备，固定及染色技术有效可行。

2.3术后不同时间各组病理学评价 如图1～3所示，7天时，S3BOND组和SE BOND组均有中度炎性细胞浸润，牙髓形态基本正常。Ca（OH）2组有轻度炎性细胞浸润，牙髓形态基本正常。如图4～6所示，30天时，S3BOND组和Ca（OH）2组均有轻度炎性细胞浸润，牙髓形态基本正常。SE BOND组有中度炎性细胞浸润，牙髓形态基本正常。如图7～9所示，90天时，S3BOND组 和Ca（OH）2组均有轻度炎性细胞浸润，牙髓形态基本正常。SE BOND组有中度炎性细胞浸润，牙髓组织部分紊乱。

图1 S3BOND组7天牙髓的组织学反应（HE×100），有中度炎性细胞浸润，牙髓形态基本正常。

图2 SE BOND组7天牙髓的组织学反应（HE×100），有中度炎性细胞浸润，血管充血，牙髓形态基本正常。

图3 Ca(OH)2组7天牙髓的组织学反应（HE×100），有轻度炎性细胞浸润，牙髓形态基本正常。

图4 S3BOND组30天牙髓的组织学反应（HE×100），轻度炎性细胞浸润，牙髓形态基本正常。

图5 SE BOND组30天牙髓的组织学反应 （HE×100），中度炎性细胞浸润，牙髓组织部分紊乱。

图6 Ca(OH)2组30天牙髓的组织学反应（HE×100），轻度炎性细胞浸润，牙髓形态基本正常。

图7 S3BOND组90天牙髓的组织学反应（HE×100），轻度炎性细胞浸润，牙髓形态基本正常。

图8 SE BOND组90天牙髓的组织学反应 （HE×100），中度炎性细胞浸润，牙髓组织部分紊乱。

图9 Ca(OH)2组90天牙髓的组织学反应（HE×100），轻度炎性细胞浸润，牙髓形态基本正常。

3 讨论

牙本质黏结剂提高了树脂与牙体间的黏结力，但是，不足之处是治疗后往往有牙髓激惹症状。引起牙髓刺激症状的原因一般有以下几点：（1）有聚合产热后刺激牙髓[2]；（2）残留未聚合单体刺激牙髓；（3）聚合收缩造成边缘细菌性微渗漏引起炎性反应，激惹牙髓[3]。其中残留未聚合单体对牙髓细胞的刺激作用是引起牙髓激惹症状的主要原因[4]。第7代牙本质黏结剂，底胶与黏结剂混为一瓶，具有高效、快速、简便等优点[5]，可形成高强度的均质界面，提高了黏结强度，达到了树脂和牙面的有机结合[6]。

牙釉质为人体中最坚固的组织，它含有大量无机钙盐，所以，一般常规脱钙处理需要2～3个月才能达到完全脱钙的目的。而酸类溶液对牙髓等软组织损害程度随脱钙时间的延长而加重，且对苏木素着色不利[7]。在脱钙标本时，采用微波加EDTA脱钙法。微波辐射能引起标本内部的分子振动，使脱钙液面积增加，接触界面不断更新，只需6～7小时就可达到切片要求[8]。

本实验发现，牙髓对两种牙本质黏结剂均有炎症反应，这可能因为牙本质黏结剂中含有的单体成分如HEMA、BPA、TEGDMA、GMA，树脂基质类成分BIS-GMA、UDMA等均可对成纤维细胞系产生毒性。

随着时间的延长，各组的炎性反应和组织紊乱均呈现出减轻的趋势，这可能由于时间的延长，牙髓组织的自我修复越来越完善。30天和90天组S3BOND炎症反应均较SE BOND轻，与Ca（OH）2无明显差异，Ca（OH）2与牙本质黏结剂相比存在很多缺陷，其与牙本质表面的附着不牢固，因此边缘封闭性不佳，凝固时间不易掌握。Ca（OH）2能促进诱导成牙本质细胞分化的TGF-β从牙本质中释放，因此能够刺激修复性牙本质的形成；黏结剂的处理剂也能促进TGF-β从牙本质中释放，但除了EDTA外，其他处理剂的这种作用均弱于氢氧化钙[9]。对于三组都没有硬组织形成的结果，作者推测如果延长观察时间，随着炎症反应和组织紊乱的减轻，可能会有牙本质桥出现。

[1] 陆玉，刘天佳，皮根莉，等.可乐丽菲露 S E BO N D应用于Beagles犬直接盖髓术的组织学评价，华西口腔医学杂志，2005，23（5）：438

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