D J-1在甲状腺肿瘤中的表达及其临床意义

郦秀芳，张海勇，吕艳婷，胡孟钧，魏建丽（诸暨市人民医院，浙江 诸暨 311800）

D J-1在甲状腺肿瘤中的表达及其临床意义

郦秀芳，张海勇，吕艳婷，胡孟钧，魏建丽（诸暨市人民医院，浙江 诸暨 311800）

目的探讨DJ-1蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法选择甲状腺肿瘤石蜡组织标本90例为研究对象，其中甲状腺癌60例和甲状腺腺瘤30例，另选择同期行非毒性结节性甲状腺肿瘤切除术中周边正常甲状腺组织40例。应用免疫组织化学EnVision法检测DJ-1蛋白的表达，分析DJ-1蛋白的表达与甲状腺癌的临床病理特征的关系。结果甲状腺癌中DJ-1阳性表达明显高于甲状腺腺瘤和正常甲状腺组织，差异有统计学意义（均P＜0.05），而不同类型甲状腺癌组织间DJ-1阳性表达的差异无统计学意义（P＞0.05）。从单因素分析中所得出的与DJ-1的表达密切相关的指标再进行多因素非条件Logistic回归分析，结果显示颈部淋巴结转移和TNM分期是DJ-1蛋白表达阳性的独立影响因素。结论DJ-1异常表达与甲状腺癌的发生、浸润、淋巴结转移等恶性潜能密切相关，DJ-1高表达的甲状腺癌组织具有更强的浸润和转移能力，可作为反映甲状腺癌恶性生物学行为的重要标记物之一。

甲状腺肿瘤；免疫组织化学；DJ-1

甲状腺肿瘤是内分泌系统最常见的肿瘤之一，其起病隐匿，患者多以发现无痛性甲状腺结节而就诊。由于甲状腺肿瘤良、恶性病变的生物学特征存在差异，治疗措施和患者预后也随之不同，因此鉴别诊断甲状腺良恶性肿瘤具有十分重要的意义[1]。目前，DJ-1作为一种多功能蛋白，在多种肿瘤中表达异常，并与恶性肿瘤的不良预后和淋巴结转移等过程密切相关，DJ-1有望成为一种肿瘤诊断和预后判断的理想标记物，也是抗肿瘤药物作用的重要靶分子[2-3]。目前尚未见DJ-1在甲状腺肿瘤中的表达及其与甲状腺癌临床病理特征的关系报道，现将DJ-1在60例甲状腺癌中的表达情况报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2009年8月～2014年3月本院行手术切除的甲状腺肿瘤石蜡组织标本90例（甲状腺癌60例，甲状腺腺瘤30例）为研究对象，入选病例排除合并其他肿瘤，其中男32例，女58例；年龄21～72岁，平均（40.5±4.6）岁；60例甲状腺癌中乳头状癌26例，滤泡状癌24例，未分化癌10例。另选择同期行非毒性结节性甲状腺肿瘤切除术中周边正常甲状腺组织40例，均经病理诊断证实为正常甲状腺组织。

1.2方法 采用SP法检测入选组织标本中DJ-1蛋白的表达，SP试剂盒购自福州迈新生物有限公司，DJ-1鼠抗人多克隆抗体购自Bioworld Technology公司。操作程序按说明书进行。结果判断：DJ-1蛋白主要在细胞核和细胞浆中表达，呈棕黄色颗粒状，随机选择5个高倍镜视野（400倍），计算阳性细胞占全部计数癌细胞的比率，阳性细胞＞10%为阳性表达。

1.3 统计学处理 应用SPSS 13.0统计软件进行统计学处理。计数资料采用χ2检验。

2 结果

2.1各种甲状腺组织中DJ-1的表达 甲状腺癌中DJ-1阳性表达明显高于甲状腺腺瘤和正常甲状腺组织，差异有统计学意义（均P＜0.05），而不同类型甲状腺癌组织间DJ-1阳性表达的差异无统计学意义（均P＞0.05），见表1。DJ-1在甲状腺乳头状癌细胞中的表达详见图1。

2.2甲状腺癌组织中DJ-1表达与其临床病理特征的关系 在60例甲状腺癌组织中，DJ-1的表达与是否有颈部淋巴结转移、包膜完整性以及TNM分期密切相关（P＜0.01），详见表2。将单因素分析中得出的与DJ-1表达密切相关的3个指标进行多因素非条件Logistic回归分析，结果显示有颈部淋巴结转移和TNM分期进入回归模型，详见表3。

表1 DJ-1在各型甲状腺组织中的表达

图1 DJ-1在甲状腺乳头状癌细胞中呈胞浆和胞核阳性

表2 甲状腺癌组织中DJ-1与临床病理特征的关系

表3 Logistic回归分析结果

3 讨论

目前影像学、细胞学甚至病理学诊断对甲状腺肿瘤性质的鉴别诊断仍存在一定误差，可能导致甲状腺癌误漏诊。因此，寻找辅助鉴别甲状腺良恶性肿瘤的分子诊断标志物，并进一步探讨甲状腺良恶性肿瘤在形成和转移、浸润演变过程的分子机制已成为临床研究甲状腺肿瘤的热点[4]。

DJ-1最早是1997年由Nagakubo.D发现并报道的一种新的丝裂原依赖性癌基因，它在进化上高度保守。人类DJ-1/PARK7基因位于染色体1P36.2-P36.3，全长约24Kb。野生型的DJ-1在溶液中都是以二聚体的形式存在的，通过N末端的螺旋结构和C末端的两个螺旋结构所形成的疏水区相互连接[5-6]。DJ-1蛋白广泛表达于人体各种组织，并在胚胎组织中有表达，尤其在睾丸、肝脏、胰腺、肾脏、心脏、骨骼肌等组织中呈高表达[7]。DJ-1的具体功能及调控机制还并不是非常明确，目前发现体内野生型DJ-1蛋白以二聚体形式参与人体中多种病理生理过程的调控，其中包括细胞转化、抗凋亡、抗氧化应激、分子伴侣活性及负性调节等，这些调控功能均可能在促进肿瘤的发生发展具有重要意义[8-9]。在原发性非小细胞肺癌细胞中，DJ-1的表达高于正常细胞，并发现DJ-1高表达与患者预后和复发风险相关[10]。在黑色素瘤、食道癌、前列腺癌、子宫颈癌、乳腺癌和喉癌中，发现DJ-1的表达水平随癌细胞的恶性程度升高而增加，且DJ-1表达高的肿瘤细胞呈高转移潜能[11-13]。

本研究结果发现，甲状腺癌中DJ-1阳性表达明显高于正常甲状腺组织和甲状腺腺瘤 （均P＜0.05），表明DJ-1蛋白的异常表达参与了甲状腺癌的发生过程，可以作为早期鉴别诊断甲状腺肿瘤良恶性的辅助参考指标。本组中不同类型甲状腺癌组织间DJ-1蛋白阳性表达差异无统计学意义 （P＞0.05），提示DJ-1蛋白在各种类型甲状腺癌的形成过程中所起的作用可能相同，均可促进癌细胞更具有浸润和转移性。本文从单因素分析中所得出的与DJ-1的表达密切相关的指标再进行多因素非条件Logistic回归分析，结果显示颈部淋巴结转移和TNM分期进入回归模型，证明DJ-1异常表达与肿瘤浸润、淋巴结转移密切相关，DJ-1高表达的癌组织具有更强的浸润和转移能力，可作为反映甲状腺癌恶性生物学行为的重要标记物之一。本结论为进一步探讨甲状腺癌发生、转移、浸润的分子机制开辟新思路，为早期诊断甲状腺癌、判断甲状腺肿瘤生物学行为，以及为其预后及靶向分子治疗研究提供了新方向。

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