大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）质量控制程序

秦霄雯，李凤霞，胡方峥

（山东省计量科学研究院，山东济南250014）

大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）质量控制程序

秦霄雯，李凤霞，胡方峥

（山东省计量科学研究院，山东济南250014）

浮游菌和沉降菌是医院洁净手术部和临床实验室的空气质量控制指标之一。为了细化浮游菌和沉降菌的测试方法，加强对微生物培养基的质量控制，避免误操作引起的生物污染，保障检测过程中的人员健康，本文给出了大豆酪蛋白琼脂培养基的质量控制程序，希望有助于微生物检测工作的同行们更好的开展工作。

大豆酪蛋白琼脂培养基；检测；质量控制

GB 50333-2013《医院洁净手术部建筑技术规范》和GB 50591-2010《洁净室施工及验收规范》中均要求检测空气中的浮游菌和沉降菌的含量，作为判定合格与否的指标之一。标准中虽然给出了浮游菌和沉降菌的检测方法，但过程不甚细致，尤其是对毫无微生物基础的检测人员而言，往往无法完成对该项指标的测试。为了加强对微生物培养基的质量控制，避免因不适当操作而引起的生物污染，保障检测过程中工作人员的健康，本文详细给出了大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）制备过程中使用的仪器设备﹑材料和制备程序，与广大检测工作者共享。

1 质量控制程序

1.1 仪器和设备

高压消毒锅：使用时应严格按照仪器说明书操作；电子天平：必须经过计量检定合格；容量瓶: 必须经过计量检定合格；恒温培养箱：必须经过计量校准合格；培养皿：一般采用90 mm×15 mm的硼硅酸玻璃培养皿。

1.2 大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）培养基配方

酪蛋白胰酶消化物 15 g；大豆粉木瓜蛋白酶消化物 5 g；氯化钠 5 g；琼脂 15 g；蒸馏水或离子交换水1000 ml。因自来水或井水中含有钙和镁，会与蛋白胨或牛肉浸膏中的磷酸盐发生反应，生成磷酸钙和磷酸镁等沉淀，影响培养基的质量。

1.3 制备方法

1.3.1 称量

按培养基配方比例依次推确地称取酪蛋白胰酶消化物﹑大豆粉木瓜蛋白酶消化物﹑氯化钠﹑琼脂放人烧杯中。

1.3.2 溶化

在上述烧杯中先加入少量纯化水，用玻棒搅匀，然后在石棉网上加热使其溶解，将完全溶解后，补充水至1000 ml。在溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影晌细菌生长。

1.3.3 调 pH

在未调 pH前，先用精密 pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入NaOH，边加边搅拌，并随时用 pH试纸测其 pH，直至 pH达7.3±0.2。反之，用HCL调节。

1.3.4 分装

将培养基分装至三角瓶内，瓶内分装量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

1.3.5 加塞

培养基分装完毕后，在试管口或三角烷瓶口上塞上棉塞，加塞时的棉塞的总长度的 3/5应在口内，2/5在口外。

1.3.6 包扎

加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称﹑组别﹑配制日期。

1.3.7 灭菌

将上述培养基以 0.103 MPa，121 ℃，20 min高压蒸汽灭菌。

1.3.8 无菌操作下倒平板

同时预先将洁净工作台﹑酒精灯﹑喷壶﹑封口膜﹑平面皿等采取紫外线灭菌30 min。待灭菌后的培养基冷至60℃后，开启洁净工作台，点燃酒精灯，用酒精灯擦拭双手，将三角瓶口端捆在玻棒或其他合适高度的器具上，将培养基倒入无菌平皿，每个培养皿约20 ml培养基。

1.3.9 无菌捡查

将灭菌后培养基平皿放人 37 ℃的恒温培养箱中培养

24～48 h，检查灭菌是否彻底。若无微生物生长，则培养基制备合格，否则应废弃重新配置。制备好的培养基平皿宜在2～8 ℃保存，使用期限一般以一周为宜。

2 讨论

在做培养基的灭菌检查时，如果培养基的容器较大，需相应延长灭菌时间。对有特殊需求的培养基，应严格按

TQ460.8+2

C

1002-2376（2015）12-0033-02

2015-11-06