子宫内膜异位症患者内膜组织中kiss-1及血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表达的意义

李 萍，王海波，牛海玲，赵金荣，李秀娟

(解放军第260医院，河北 石家庄 050041)

子宫内膜异位症患者内膜组织中kiss-1及血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表达的意义

李 萍，王海波，牛海玲，赵金荣，李秀娟

(解放军第260医院，河北 石家庄 050041)

目的 研究子宫内膜异位症患者内膜组织中kiss-1及血清和腹腔液中血管内皮生长因子可溶性受体(sflt-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、T细胞表达和分泌的调节性激活因子(RANTES)表达的意义。方法 选取子宫内膜异位症行腹腔镜手术患者256例作为观察组，根据病变部位、大小、粘连程度分为Ⅰ～Ⅱ期组76例，Ⅲ～Ⅳ期组180例。选取同期因卵巢良性肿瘤、卵巢系膜囊肿、宫颈病变等入院治疗的患者114例作为对照组。采用免疫组化法测定受检者子宫内膜组织标本kiss-1的表达情况，采用ELISA方法测定受检者血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表达情况。结果 观察组kiss-1阳性表达率明显低于对照组(P<0.05)。Ⅰ～Ⅱ期组kiss-1阳性表达率明显高于Ⅲ～Ⅳ期组(P<0.05)。观察组血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表达水平明显高于对照组(P均<0.05)。Ⅰ～Ⅱ期组血清和腹腔液中sflt-1、VEGF和RANTES表达水平低于Ⅲ～Ⅳ期组(P<0.05)。结论kiss-1、sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES水平与子宫内膜异位症发展密切相关，可能参与了其发病过程，可以作为子宫内膜异位症的辅助检测指标。

子宫内膜异位症；kiss-1；血管内皮生长因子可溶性受体；单核细胞趋化蛋白-1；血管内皮生长因子；T细胞表达和分泌的调节性激活因子

子宫内膜异位症多发于生育年龄女性，多表现为痛经、持续性下腹痛，经量增多、经期延长及卵巢功能减退和丧失、性交痛和不孕。临床研究表明，子宫内膜异位症生物标志物对患者的早期诊断、病情预测、疗效评估有重要作用[1]。kiss-1表达减弱可能与子宫内膜异位症的侵袭过程有关[2]。研究表明，子宫内膜异位症的发生可能与血管内皮生长因子(VEGF)-VEGFR-sVEGFR系统有关，而血管内皮生长因子可溶性受体(sflt-1)与子宫内膜异位症的发生呈负相关[3]。单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)能够参与机体的免疫炎症调节，而子宫内膜异位症的发生与患者全身免疫功能异常有关，研究表明，患者内膜组织中MCP-1水平明显高于正常者，且MCP-1水平在分泌期和增生期也不同[4]。T细胞表达和分泌的调节性激活因子(RANTES)，能够参与炎性反应并调控细胞的生长分化。本研究进一步探讨了子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中kiss-1及血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表达的意义，以期为临床提供更多的参考。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取我院2009年11月—2014年10月收治的子宫内膜异位症行腹腔镜手术患者256例作为观察组，均符合“子宫内膜异位症的诊断与治疗规范”[5]，且经病理证实，年龄15～46(36±9)岁；月经初潮年龄10～16(13±3)岁；月经周期24～30(27±4)d；月经持续时间4～8(7±3)d；孕次0～2(1.0±0.4)次；体质量指数(BMI)(23±4)kg/m2；CA125阳性173例(67.6%)；合并子宫肌瘤68例(26.6%)；痛经142例(55.5%)，非经期下腹痛46例(18.0%)，性交痛8例(3.1%)。观察组患者再根据病变部位、大小、粘连程度分为2组:Ⅰ～Ⅱ期组76例，年龄16～45(35±10)岁；月经初潮年龄10～15(12±3)岁；月经周期25～29(26±5)d；月经持续时间5～8(7±3)d；孕次0～2(0.9±0.5)次； BMI(22±4)kg/m2；CA125阳性40例(52.6%)；合并子宫肌瘤20例(26.3%)；痛经39例(51.3%)，非经期下腹痛14例(18.4%)，性交痛2例(2.6%)。Ⅲ～Ⅳ期组180例，年龄15～46(37±9)岁；月经初潮年龄10～16(13±4)岁；月经周期26～30(27±5)d；月经持续时间4～8(7±3)d；孕次0～2(1.1±0.4)次； BMI(24±4)kg/m2；CA125阳性133例(73.9%)；合并子宫肌瘤48例(26.7%)；痛经103例(57.2%)，非经期下腹痛32例(17.8%)，性交痛8例(3.3%)。选取同期因卵巢良性肿瘤、卵巢系膜囊肿、宫颈病变等入院治疗的患者114例作为对照组，年龄14～50(37±10)岁；月经初潮年龄9～16(12±3)岁；月经周期23～31(28±4)d；月经持续时间4～7(5±2)d；孕次0～2(2.5.±1.0)次；BMI(22±3)kg/m2；CA125阳性20例(17.5%)。3组年龄、月经初潮年龄、月经周期、月经持续时间、孕次、BMI比较差异均无统计学意义(P均>0.05),均排除恶性肿瘤者,服用性激素、免疫抑制剂或非甾体类抗炎药者,半年内有妊娠或哺乳史者,风湿、类风湿或其他免疫系统疾病者。本研究通过我院临床试验伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 kiss-1检测 取子宫内膜组织标本，包埋、切片备用。采用羊抗人kiss-1metastin多克隆抗体(英国ABCAM提供)，免疫组化试剂盒(北京瑞达医药科技有限公司),严格按照说明书进行操作。Kiss染色呈棕黄或棕褐色颗粒，定位于细胞质。根据染色强度分为4级：0分为无染色,1分为淡黄色,2分为中度黄色,3分为棕褐色。根据阳性细胞所占比例分为3级：≤10%为1级，10%～50%为2级，>50%为3级。根据阳性细胞的百分比和染色强度分为4个等级：(-)为0～1分,(+)为2～3分,()为4～5分,()为>5分。

1.2.2 血清及腹腔液指标检测 ①血清：抽取患者空腹肘静脉血5mL，2500r/min离心15min，取上清液置于-70℃冰箱保存待测。②腹腔液：术中采用负压吸引，取无血液污染的患者腹腔液5mL，置于无菌离心管中，2500r/min离心15min，取上清置于-70℃冰箱保存待测。③操作：sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES均采用ELISA法进行测定(试剂盒均购自上海信然生物技术有限公司)，使用前将所有试剂充分混匀。加入稀释好后的标准品、待测样品50μL于反应孔内,然后立即加入50μL的生物素标记的抗体。盖上膜板，振荡混匀，37℃温育1h,洗板3次。加入亲和链酶素-HRP 37℃温育30min。洗板3次。每孔加入底物A、B各50μL，轻轻振荡混匀，37℃温育10min。加入终止液后立即在450nm波长处测定各孔的OD值，根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。

1.3 统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件进行统计处理，计数资料采用2检验，计量资料采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 kiss-1在子宫内膜组织中的阳性表达情况 观察组、Ⅰ～Ⅱ期组、Ⅲ～Ⅳ期组kiss-1阳性表达率明显低于对照组(P均<0.05)。Ⅰ～Ⅱ期组kiss-1阳性表达率明显高于Ⅲ～Ⅳ期组(P<0.05)。见表1。

表1 kiss-1在子宫内膜组织的阳性表达情况 例

注：①与对照组比较，P<0.05；②与Ⅰ～Ⅱ期组比较，P<0.05。

2.2 血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表达情况比较 观察组、Ⅰ～Ⅱ期组、Ⅲ～Ⅳ期组血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES水平明显高于对照组(P均<0.05)。Ⅲ～Ⅳ期组血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、和RANTES水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期组(P均<0.05),Ⅰ～Ⅱ期组和Ⅲ～Ⅳ期组血清和腹腔液中MCP-1水平比较差异均无统计学意义(P均 >0.05)。见表2。

3 讨 论

子宫内膜异位症多发于育龄期女性，虽然本病属于良性疾患，但其具有远处转移和种植的恶性特征，可导致患者不孕、慢性疼痛等，严重影响其正常生活工作。目前其发病机制不明，有多种学说阐述其发病病因，病理改变为异位内膜组织随激素水平变化发生周期性出血，同时伴有周围组织增生和粘连，在病变区可见紫褐色斑点或小泡，最后可发展为紫蓝色实质性结节或包块。研究表明，子宫内膜异位症的发病与基因、炎性递质、血供有关[6-8]。

表2 各组血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES水平比较

注：①与对照组比较，P<0.05；②与Ⅰ～Ⅱ期组比较，P<0.05。

王伟等[9]和钱燕萍等[10]研究表明，kiss-1及其表达产物可以影响机体的神经内分泌系统，其可以促进下丘脑促性腺激素释放激素分泌，并可以抑制肿瘤细胞的转移，而子宫内膜异位症患者多有远处种植现象。申庆文等[11]研究表明，kiss-1在子宫内膜异位症的表达降低，同时发现不同临床分期中kiss-1表达不同，但差异无统计学意义(P>0.05)。但本研究发现子宫内膜异位症组、Ⅰ～Ⅱ期组、Ⅲ～Ⅳ期组kiss-1阳性表达率明显低于对照组,Ⅰ～Ⅱ期组kiss-1阳性表达率明显高于Ⅲ～Ⅳ期组。这一结论与金海鸿等[12]的研究结果一致，可能与患者入选的标准或调查样本大小有关。

目前，血管形成是子宫内膜异位症的研究热点，而VEGF和sflt-1可以促进子宫内膜间质细胞的增殖。王春红等[13]对34例子宫内膜异位症患者进行研究发现，VEGF表达在分泌期和增生期失去了正常的周期性变化，均呈现高水平表达。同时，子宫内膜异位症患者异位组织中微血管密度明显升高[14]。本研究证实，子宫内膜异位症组sflt-1和VEGF水平均较对照组高，且Ⅲ～Ⅳ期水平高于Ⅰ～Ⅱ期。说明sflt-1和VEGF可能参与了子宫内膜异位症的发病过程。

MCP-1的研究较为广泛，其参与机体多种生理或病理性活动，主要参与机体免疫炎症调控，同时可以上调VEGF的表达水平，通过诱导内皮细胞迁移，参与到血管生成中[15]。RANTES主要作用是激活T细胞，趋化、激活多种白细胞。研究表明，RANTES与子宫内膜异位症患者组织炎症、痛经评分呈正相关(P均<0.05)，说明RANTES可能与子宫内膜碎片逆流进入腹腔后导致的炎症反应有关[15-16]。本研究表明，子宫内膜异位症组MCP-1和RANTES水平均高于对照组，且Ⅲ～Ⅳ期组RANTES水平高于Ⅰ～Ⅱ期组，而Ⅰ～Ⅱ期组和Ⅲ～Ⅳ期组MCP-1比较差异无统计学意义。

综上所述，kiss-1、sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES水平与子宫内膜异位症发展密切相关，可能参与了其发病过程，可以作为子宫内膜异位症的辅助检测指标。

[1] 汪沙，段华.子宫内膜异位症生物标志物的研究进展[J].中华妇产科杂志，2014,49(5):392-394

[2] 牛慧彦，王丹波，张淑兰，等.Kiss-1和MMP-9在裸鼠子宫内膜异位症模型中的表达及意义[J].中国医科大学学报，2004,33(6):487-489

[3] 史淑红，高秀娟，李艳芳，等.sflt-1、VEGF在子宫内膜异位组织中的表达及意义[J].山东医药，2014,54(36):30-32

[4] 丁琳，周建梅，倪衡建.MCP-1在子宫内膜异位症在位内膜的表达[J].齐齐哈尔医学院学报，2012,33(5):563-565

[5] 中华医学会妇产科学分会子宫内膜异位症协作组.子宫内膜异位症的诊断与治疗规范[J].中华妇产科杂志，2007,42(7):645-648

[6] 林还珠，苏小锋，何美清，等.kiss-1mRNA和GPR54mRNA在子宫内膜异位症中的表达及意义[J].临床和实验医学杂志，2012,11(6):401-402

[7] 熊苗，屠菊红，赵爱民.趋化因子及其受体与子宫内膜异位症的关系[J].中国妇幼健康研究，2006,17(6):516-518

[8] 王彦，郭维婵.血管生成在子宫内膜异位症形成中的研究进展[J].医学综述，2014,20(22):4111-4114

[9] 王伟，王世银，甘尚权，等.Kisspetins/GPR54神经内分泌系统对哺乳动物生殖活动的调控[J].中国细胞生物学学报，2014,36(8):1200-1206

[10] 钱燕萍，毛熙光.kiss-1在妇科恶性肿瘤转移抑制中的作用研究新进展[J].西南军医，2014，16(2):228-232

[11] 申庆文，凌斌，席玉玲，等.KISS-1及MMP-9在子宫内膜异位症患者异位及在位内膜的表达及意义[J].现代妇产科进展，2007,16(11):843-845

[12] 金海鸿，单梅，李秀荣，等.kiss-1在子宫内膜异位症及子宫腺肌症异位组织中的表达及意义[J].中国实验诊断学，2013,17(10):1837-1838

[13] 王春红，魏静波，曲银娥，等.血管内皮生长因子及其受体在子宫内膜异位症中的表达和意义[J].中国免疫学杂志，2013,29(6):605-609

[14] 何勤径.血管生成素-2、血管内皮生长因子与微血管密度在子宫内膜异位症中的表达及临床意义[J].河北医药，2014,36(7):1025-1027

[15] 林敏，王溢，董克，等.子宫内膜异位症患者腹腔液中NF-κB和趋化因子MCP-1、RANTES的表达[J].实用医学杂志，2014,30(4):577-579

[16] 陈小平，陈靓芬，黄丽萍.活血化瘀中药联合腹腔镜对轻型子宫内膜异位症不孕患者血清MCP-1、RANTES的影响[J].中国实验方剂学杂志，2013,19(4):319-322

Significance of the expression of kiss-1in endomentrial tissue and the expression of sflt-1, VEGF,MCP-1, RANTES in serum and peritoneal fluid in the patients with endometriois

LI Ping, WANG Haibo, NIU Hailing, ZHAO Jinrong, LI Xiujuan

(The 260th Hospital of the PLA, Shijiazhuang 050041, Hebei, China)

Objective It is to study the significance of the expression of kiss-1in endomentrial tissue and the expression of sflt-1, VEGF, MCP-1, RANTES in serum and peritoneal fluid in the patients with endometriois.Methods 256cases of patients with endometriosis undergoing laparoscopic surgery were selected as observation group, in which according to the lesion, the size of adhesions there were 76cases of stage Ⅰ-Ⅱ (Ⅰ-Ⅱ stage group), Ⅲ-Ⅳ of 180cases (Ⅲ-Ⅳ stage group).114cases of patients admitting to hospital because of ovarian tumor, mesosalpinx cyst, cervical lesions were selected as control group.The expression of kiss-1endomentrial tissue was detected by immunohistochemistry, and the expression of sflt-1, VEGF, MCP-1, RANTES in serum and peritoneal fluid were detected by ELISA.Results The positive rate of the expression of kiss-1in observation group was significantly lower than that in the control group(P<0.05), and the rate in Ⅰ-Ⅱ stage group was significantly higher than that in Ⅲ-Ⅳ stage group(Pall<0.05).The levels of the expression of sflt-1, VEGF, MCP-1, RANTES in serum and peritoneal fluid were significantly higher than those in the control group(P<0.05).The levels in Ⅰ-Ⅱstage group were significantly lower than those in Ⅲ-Ⅳ stage group (Pall<0.05).Conclusion The levels of kiss-1, sflt-1, VEGF, MCP-1, RANTES are closely related with the development of endometriosis, which may be involved in its pathogenesis, and can be used as auxiliary determing indexes of endometriosis.

endometriosis; kiss-1; soluble vascular endothelial growth factor receptor; monocyte chemoattractant protein-1; vascular endothelial growth factor; T cell expressed and secreted regulatory activator

李萍，女，主治医师，硕士，主要从事子宫内膜异位症的研究。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.14.007

R473.71

A

1008-8849(2015)14-1501-03

2014-12-14