狼疮脑病患者脑脊液白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平及其临床意义

高爽，王高亚，欧阳苏珊，赵琦，王家宁，杨娉婷，肖卫国

（中国医科大学附属第一医院风湿免疫科，沈阳 110001）

·论著·

狼疮脑病患者脑脊液白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平及其临床意义

高爽，王高亚，欧阳苏珊，赵琦，王家宁，杨娉婷，肖卫国

（中国医科大学附属第一医院风湿免疫科，沈阳 110001）

目的探讨狼疮脑病患者脑脊液白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平及其在狼疮脑病中的临床意义。方法酶联免疫吸附方法检测15例狼疮脑病患者脑脊液中的IL-6、TNF-α水平，将15例慢性头痛但脑脊液常规检测正常患者作为对照组。收集狼疮脑病患者的临床相关资料，评价2种细胞因子在狼疮脑病中的临床意义。结果狼疮脑病组脑脊液IL-6的水平为（237.73±66.29）pg/mL，显著高于对照组的（4.67±2.50）pg/mL（P＜0.01）。TNF-α在狼疮脑病组和对照组水平分别为（39.07±24.48）pg/mL和（4.33±2.94）pg/mL，两者相比有统计学差异（P＜0.01）。Pearson相关分析显示，狼疮脑病患者中脑脊液IL-6和TNF-α的水平与患者血沉、血清免疫球蛋白、C反应蛋白、补体水平及系统性红斑狼疮疾病活动度评分等临床指标均无显著相关。结论IL-6和TNF-α可能成为狼疮脑病治疗的有效靶点，其增高机制值得探索。

狼疮脑病；白介素6；肿瘤坏死因子α

狼疮脑病是系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）的主要死因之一，严重影响SLE患者的预后。狼疮脑病可以发生在SLE的任何时期，其主要依靠临床症状、头MRI、脑脊液检查、脑电图及心理测试等检查综合判定［1，2］。狼疮脑病患者脑脊液常规检查常缺乏特异表现，诊断意义亦十分有限。国外研究提示白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）在狼疮脑病的诊断中具有重要意义［3～5］，而有关肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）在狼疮脑病患者脑脊液的水平的研究结论尚不一致。由于狼疮脑病患者脑脊液收集相对困难，国内尚未见到类似研究的报告。我们的前期研究表明，将IL-6或TNF-α注射至大鼠杏仁核均可引起大鼠条件反射建立及消退的异常，提示这2种细胞因子可能在狼疮脑病中发挥作用［6，7］。本研究通过检测狼疮脑病患者脑脊液中细胞因子IL-6和TNF-α水平的变化，探讨其在狼疮脑病中的临床意义。

1 材料与方法

1.1 患者分组

所有狼疮脑病患者均为来自2013年5月至2015年3月于中国医科大学附属第一医院风湿免疫科住院并确诊为狼疮脑病的患者。SLE患者15例，其中男2例，女13例，年龄（32.2±7.11）岁，均符合2009年美国风湿病学会SLE的分类标准。狼疮脑病的诊断依赖于临床症状和头影像学的综合判定，并在排除尿毒症、高血压、全身或中枢神经系统感染及其他原因引起的神经精神症状及甲泼尼龙冲击治疗和环磷酰胺治疗后明显缓解的基础上得以确诊。对照组为同期就诊于陆军总院以长期慢性头痛为主诉且脑脊液常规正常的患者15例，其中男2例，女13例，年龄（37.6±10.69）岁。对照组患者就诊时体格检查无明显神经系统阳性体征，脑脊液及相关辅助检查各项指标均在正常值范围内。狼疮脑病组与对照组患者在年龄及性别构成上无统计学差异。本研究获得了中国医科大学附属第一医院伦理委员会的批准，并获得了所有患者的知情同意。

1.2 标本采集

狼疮脑病患者脑脊液的收集在甲泼尼龙冲击治疗和环磷酰胺治疗前进行。2组患者均留取脑脊液1 mL，迅速冻于-80℃保存备用。

1.3 临床资料的收集

记录狼疮脑病患者在甲泼尼龙冲击治疗和环磷酰胺治疗前的血沉（erythrocyte sendimentation rate，ESR）、C反应蛋白（C-reaction protein，CRP）、免疫球蛋白A（immunoglobulin A，IgA）、IgG、IgM、补体3（component 3，C3）、C4和SLE疾病活动度评分（systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI）。

1.4 检测方法

ELISA法检测2组患者脑脊液中IL-6、TNF-α的水平。检测步骤严格按照R&D公司ELISA试剂盒说明书进行。每个标本均复孔检测，误差控制在10%以内，结果以2次平均值计算。

1.5 统计学处理

2 结果

2.1 狼疮脑病组脑脊液常规检查结果

狼疮脑病患者脑脊液常规检测在狼疮诊断中缺乏特异性表现。所有慢性头痛患者的脑脊液均为正常水平，其中脑脊液压力增高（＞200 mmH2O）11例，细胞数增高（＞10/μL）6例，蛋白增高（＞0.45 g/L）13例，葡萄糖异常（2.5～4.5 mmol/L）3例，氯化物异常（119～129 mmol/L）2例，具体数值未列出。

2.2 脑脊液IL-6和TNF-α水平

狼疮脑病组和对照组脑脊液IL-6的水平分别为（237.73±66.29）pg/mL和（4.67±2.50）pg/mL，TNF-α的水平分别为（39.07±24.48）pg/mL和（4.33±2.94）pg/mL，两组相比均有统计学差异（均P＜0.01）。

2.3 脑脊液IL-6和TNF-α的水平与各临床指标的相关性分析

Pearson分析显示，狼疮脑病患者组脑脊液IL-6和TNF-α的水平与治疗前患者的血沉、CRP、血清IgA、IgG、IgM、C3、C4、SLEDAI均无明显相关。

表1 细胞因子水平与各临床指标的相关系数Tab.1 Correlation efficient between cellular factor level and each clinical index

3 讨论

本研究着眼于狼疮脑病患者脑脊液细胞因子水平的变化，发现IL-6和TNF-α在狼疮脑病患者的脑脊液中显著增高，提示细胞因子在狼疮脑病发病过程中可能扮演重要角色。

众所周知，狼疮脑病是SLE诊治的难点。由于狼疮脑病患者脑脊液常规检测特异性较差，很难与感染等其他疾病相鉴别，所以常规脑脊液检测对狼疮脑病的诊断意义十分有限。我们的研究结果提示，除了蛋白和细胞数在狼疮脑病患者脑脊液高于正常上限外（蛋白增高更为显著），并无其他特征性改变。而事实上，除了抗磷脂综合征导致的血栓与狼疮的病情活动不相关外，其他所有形式的狼疮脑病都是狼疮高度活动的表现，炎症一定是其发病的重要病理学基础，所以探索狼疮脑病患者脑脊液中细胞因子水平的变化十分必要。

有研究显示，IL-6在狼疮脑病患者的脑脊液中显著增高，在狼疮脑病的诊断具有较好的特异性［3］。而有关TNF-α在狼疮脑病脑脊液中水平的结论并不一致。我们调查了国内相关文献，未能发现有关中国人的相关报道。在本研究中，我们首次在国内证实IL-6和TNF-α在中国人狼疮脑病患者的脑脊液中均显著增高，为探索这2种细胞因子在狼疮脑中的作用提供了有意义的依据。

分析以上2种细胞因子增高的原因可能有两个方面。首先，在狼疮脑病的发病机制中，血脑屏障的破坏可能是关键环节［8］。所以我们有理由推测，伴随着血脑屏障的破坏，SLE患者外周血中增高的IL-6和TNF-α进入脑脊液可能是导致其检测水平增高的机制之一［9］。此外，脑脊液高水平的IL-6及TNF-α亦可能由脑内具有免疫潜能的胶质细胞所产生［10，11］。除神经元细胞外，脑内80%以上细胞成分是胶质细胞，它们主要由星形胶质细胞和小胶质细胞组成，而两者都能在免疫激活状态下释放细胞因子及趋化因子。胶质细胞在多发性硬化的研究相对较多，而在狼疮脑病中研究尚属空白。明确胶质细胞的激活对脑局部IL-6和TNF-α的贡献是一个非常值得探讨的问题。

本研究中我们也探讨了IL-6和TNF-α与SLE患者其他临床指标和SLEDAI的相关性，但结果未显示以上2种细胞因子与ESR、血清免疫球蛋白水平、CRP及SLEDAI之间明显相关。这恰恰从另外一个侧面提示脑局部免疫激活在脑脊液细胞因子水平的变化及狼疮脑病的发病机制中可能具有关键作用。

总之，我们的研究揭示了IL-6和TNF-α在狼疮脑病中可能扮演的角色，为应用临床IL-6或TNF-α拮抗剂治疗难治性狼疮脑病提供了有利的依据。本研究的例数较少，我们将增加样本量进一步评价以上2种细胞因子在狼疮脑病中的临床意义。

［1］Brey RL，Holliday SL，Saklad AR，et al.Neuropsychiatric syndromes in lupus：prevalence using standardized definitions［J］.Neurology，2002，58（8）：1214-1220.

［2］Malagold S，Casas Parera I.The prevalence of neuropsychiatric syndromes in systemic lupus erythematosus［J］.Neurology，2002，58（12）：1867.

［3］Hirohata S，Kanai Y，Mitsuo A，et al.Accuracy of cerebrospinal fluid IL-6 testing for diagnosis of lupus psychosis.A multicenter retrospective study［J］.Clin Rheumatol，2009，28（11）：1319-1323.

［4］Efthimiou P，Blanco M.Pathogenesis of neuropsychiatric systemic lupus erythematosus and potential biomarkers［J］.Mod Rheumatol，2009，19（5）：457-468.

［5］Okamoto H，Kobayashi A，Yamanaka H.Cytokines and chemokines in neuropsychiatric syndromes of systemic lupus erythematosus［J］. J Biomed Biotechnol，2010，2010：268436.

［6］Hao Y，Jing H，Bi Q，et al.Intra-amygdala microinfusion of IL-6 impairs the auditory fear conditioning of rats via JAK/STAT activation［J］.Behav Brain Res，2014，275（12）：88-95.

［7］Jing H，Hao Y，Bi Q，et al.Intra-amygdala microinjection of TNF-α impairs the auditory fear conditioning of rats via glutamate toxicity［J］.Neurosci Res，2015，91（2）：34-40.

［8］Efthimiou P，Blanco M.Pathogenesis of neuropsychiatric systemic lupus erythematosus and potential biomarkers［J］.Mod Rheumatol，2009，19（5）：457-468.

［9］McCarthy EM，Smith S，Lee RZ，et al.The association of cytokines with disease activity and damage scores in systemic lupus erythematosus patients［J］.Rheumatology（Oxford），2014，53（9）：1586-1594.

［10］Meeuwsen S，Persoon-Deen C，Bsibsi M，et al.Cytokine，chemokine and growth factor gene profiling of cultured human astrocytes after exposure to proinflammatory stimuli［J］.Glia，2003，43（3）：243-253.

［11］Ransohoff RM，Brown MA.Innate immunity in the central nervous system［J］.J Clin Invest，2012，122（4）：1164-1171.

（编辑 陈 姜）

Expression ofInterleukin-6 and Tumor Necrosis Factorαin CerebrospinalFluid ofPatientswith Lupus Encephalopathy and Their ClinicalSignificance

GAO Shuang，WANG Gao-ya，OUYANGSu-shan，ZHAOQi，WANGJia-ning，YANGPing-ting，XIAOWei-guo
（DepartmentofRheumatology and Immunology，The FirstHospital，China MedicalUniversity，Shenyang110001，China）

ObjectiveTo evaluate the expression levels of interleukin 6（IL-6）and tumor necrosis factor α（TNF-α）in cerebrospinal fluid（CSF）of patients with lupus encephalopathy（LE），and explore their clinical significance.MethodsCSF were collected from 15 patients with LE and 15 patients with chronic headache.The CSF routine examinations in patients with chronic headache were allnormal.The expression levels ofIL-6 and TNF-α were measured by enzyme-linked immunosorbent assay.Clinical features and laboratory data were collected from the patients with LE.ResultsThe levels of IL-6（237.73±66.29 pg/mL vs 4.67±2.50 pg/mL）and TNF-α（39.07±24.48 pg/mLvs 4.33±2.94 pg/mL）were significantly different between the patients with LE and those with chronic headache（both P＜0.01）.No significant correlations were found between the levels of IL-6 or TNF-α and erythrocyte sendimentation rate，serum immunoglobulin levels，serum C-reaction protein level，serum component levels，complete levels as well as SLE disease activity index.ConclusionIL-6 and TNF-α could be the new targets in the treatment of LE.The mechanisms of the increased expression ofIL-6 and TNF-αin CSF ofpatientswith LEis worthy to be investigated.

lupus encephalopathy；interleukin-6；tumor necrosis factor-α

R593.24

A

0258-4646（2015）09-0783-03

国家自然科学基金（81271324）；辽宁省医学高峰建设工程重点科研项目（2010006）；辽宁省自然科学基金（201202250）

高爽（1984-），女，主治医师，硕士研究生.

杨娉婷，E-mail：yangpingtingting@163.com

2015-05-06

网络出版时间：