Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ在胃印戒细胞癌中的表达特点及临床意义

李雅 叶淑芳 汪剑波 施骅 周新木 涂朝勇

Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ在胃印戒细胞癌中的表达特点及临床意义

李雅 叶淑芳 汪剑波 施骅 周新木 涂朝勇

目的 探讨P-糖蛋白（Pgp）、谷胱甘肽转移酶π（GST-π）、拓扑异构酶Ⅱ（TOPO-Ⅱ）在胃印戒细胞癌中的表达特点及其临床意义。方法 以免疫组化检测64例胃印戒细胞癌组织中Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ的表达，并分析其特点及与患者临床病理特征间的关系。结果 Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ在胃印戒细胞癌中的阳性表达率分别为25.0%（16/64）、35.9%（23/64）、40.6%（26/64），在胃高-中分化腺癌中阳性表达率分别为10.9%（7/64）、37.5%（24/64）、60.9%（39/64）。Pgp在胃印戒细胞癌中阳性表达率高于高-中分化腺癌，TOPO-Ⅱ的阳性表达率则低于高-中分化腺癌，均有统计学差异（均P＜0.05），而GST-π阳性表达率与胃高-中分化腺癌比较无统计学差异（P＞0.05）。胃印戒细胞癌的Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ阳性表达率在不同临床分期、淋巴结转移患者间比较均有统计学差异（均P＜0.05），在不同年龄、性别患者间比较均无统计学差异（均P＞0.05）。结论 Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ的表达对治疗及预后判断具有一定的参考意义。

胃 印戒细胞癌 Pgp GST-π TOPO-Ⅱ 免疫组化

【 Abstract】 Objective To investigate the expression and clinicopathological significance of P-glycolprotein(Pgp), glutathione transferase(GST-π),type II DNA topoisomerase(TOPO-Ⅱ)in the gastric signet ring cell carcinoma. Methods The expression of Pgp,GST-π,TOPO-Ⅱwas detected with immunohistochemistry in 64 cases of gastric signet ring cell carcinoma and 64 cases of well or moderately differentiated gastric adenocarcinoma.The relationship between Pgp,GST-π, TOPO-Ⅱexpression and clinicopathologcal features was analyzed. Results The expression rates of Pgp,GST-π,TOPO-Ⅱin the gastric signet ring cell carcinoma were 25.0%(16/64),35.9%(23/64)and 40.6%(26/64),respectively,while the expression rates in the well and moderately differentiated gastric adenocarcinoma were 10.9%(7/64),37.5%(24/64)and 60.9% (39/64).The expression of Pgp in the gastric signet ring cell carcinoma was higher than that in well and moderately differentiation gastric carcinoma.There was no significant difference in the expression of GST-π between two types of gastric carcinoma.The expression of TOPO-Ⅱin the gastric signet ring cell carcinoma was lower than that of well and moderately differentiation gastric carcinoma.There were significant differences in Pgp,GST-π,TOPO-Ⅱ expression between gastric signet ring cell carcinomas with different clinical stages and lymph node metastasis status(P＜0.05),but no significant difference among patients with different age and gender(P＞0.05). Conclusion The expression of Pgp,GST-π and TOPO-Ⅱ is associated with clinicopathological features of gastric signet ring cell carcinoma and has certain reference value for treatment and prognosis.

近年来研究结果显示，胃癌的总体发病率已明显降低[1]，但弥漫型胃癌尤其是胃印戒细胞癌的发病率显著升高。胃印戒细胞癌是胃癌的一种特殊类型，发病率占原发性胃癌的3.4%～39.0%[2]。研究发现胃印戒细胞癌在发病年龄、性别、胃镜检查表现、临床病理特征、相关分子病理学机制以及预后等方面均有其特殊性[3]。本研究检测了64例胃印戒细胞癌组织中P-糖蛋白（Pgp）、谷胱甘肽转移酶π（GST-π）、拓扑异构酶Ⅱ（TOPO-Ⅱ）的表达，分析探讨其与患者临床病理特征之间的关系及临床意义。

1 对象和方法

1．1 对象 以2006年1月至2013年12月间手术切除后经病理确诊、且资料较完整的64例胃印戒细胞癌患者标本作为研究对象，均按WHO《消化系统肿瘤病理学和遗传学（2003版）》[4]的诊断标准确诊，经2位以上资深病理医师复诊，其中男31例，女33例，年龄31～75岁，中位年龄50岁。另随机选取同期64例胃高-中分化腺癌标本，其中男34例，女30例；年龄32～76岁，中位年龄51岁。同时随机选取同期正常胃黏膜组织标本30例作为对照，其中男17例，女13例，年龄33～78岁，中位年龄52岁。

1.2 方法 采用免疫组化En Vision二步法。Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ抗体试剂均购自北京中杉生物试剂有限公司。标本经10%中性甲醇固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，常规脱蜡水化后，采用高压锅进行抗原修复。用3%过氧化氢室温孵育10min，洗涤3次后分别滴加抗体Pgp（1∶50稀释）、GST-π（1∶50稀释）和TOPO-Ⅱ（1∶50稀释），37℃孵育130min，洗涤后DBA显色剂显色，苏木素染核，封片，镜检。同时用PBS代替一抗作阴性对照，用已知的阳性切片作阳性对照。

1.3 结果判定 Pgp蛋白阳性表达为在细胞膜和胞质内出现棕色颗粒，GST-π阳性表达在细胞质内，TOPO-Ⅱ阳性表达在细胞核。高倍镜下取10个高倍视野，每个视野计数100个细胞，共计数1 000个细胞，阳性细胞比例≥25.0%为阳性表达。

1.4 统计学处理 应用SPSS 17.0统计软件，用χ2检验或精确概率法分析不同组别间Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ表达的差异。

2 结果

2.1 Pgp的表达 64例胃印戒细胞癌组织中Pgp阳性表达共16例（图1A），阳性表达率25.0%；64例胃高-中分化腺癌组织中阳性表达共7例，阳性表达率10.9%；30例正常胃黏膜组织中有1例阳性表达，阳性表达率3.3%。Pgp在胃印戒细胞癌中的阳性表达率高于胃高-中分化腺癌和正常胃黏膜组织，均具有统计学差异（χ2=6.7、14.6，均P＜0.05）。

2.2 GST-π的表达 64例胃印戒细胞癌组织中GST-π阳性表达共23例（图1B），阳性表达率35.9%；64例胃高-中分化腺癌组织中阳性表达共24例，阳性表达率37.5%；30例胃正常黏膜组织中阳性表达共5例，阳性表达率16.7%。胃印戒细胞癌中阳性表达率与胃高-中分化腺癌比较无统计学差异（χ2=0.254，P＞0.05）；但高于正常胃黏膜组织（χ2=7.7，P＜0.05）。

2.3 TOPO-Ⅱ的表达 64例胃印戒细胞癌组织中TOPO-Ⅱ阳性表达共26例（图1C），阳性表达率40.6%；64例胃高-中分化腺癌组织中阳性表达共39例，阳性表达率60.9%；30例胃正常黏膜组织中阳性表达2例，阳性表达率6.7%。胃印戒细胞癌中阳性表达率明显低于胃高-中分化腺癌，而高于正常胃黏膜组织，均有统计学差异（χ2=11.7、13.7，均P＜0.05）。

图1 Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ在胃印戒细胞癌组织中的表达（A：Pgp；B：GST-π；C：TOPO-Ⅱ；免疫组化En Vision二步法染色，×100）

2.4 Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ表达与胃印戒细胞癌患者临床病理特征的关系 胃印戒细胞癌的Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ阳性表达率在不同临床分期、淋巴结转移患者间比较均有统计学差异（均P＜0.05），在不同年龄、性别患者间比较均无统计学差异（均P＞0.05），见表1。

3 讨论

胃印戒细胞癌是胃黏液癌中的特殊类型，属于低分化癌，好发于年轻女性、侵袭力强、预后差[5]，就诊时患者大多已属中晚期，失去手术机会，化疗成为主要的治疗手段。而胃癌化疗的疗效很大程度上受到肿瘤细胞多药耐药（MDR）的影响。MDR是指肿瘤细胞长期接触一种化疗药物，不仅对该化疗药物产生耐药性，而且对结构和功能不同的多种药物产生交叉耐药性，是造成肿瘤化疗失败的主要原因。胃癌MDR的产生与化疗药物代谢以及细胞增殖有关，其中Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ3种耐药基因对于胃癌的发生、发展及化疗反应起着重要作用，这些细胞内物质是恶性肿瘤产生MDR的主要物质基础。本研究通过免疫组化方法检测这3种基因在胃印戒细胞癌、胃高-中分化腺癌以及正常胃黏膜组织中的表达，并分析其表达与患者临床病理特征间的相关性，以期能为临床上胃印戒细胞癌患者的治疗和预后判断提供理论和实验依据。

表1 Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ阳性表达率与胃印戒细胞癌患者临床病理特征的关系[例（%）]

Pgp为含1 280个氨基酸的一种膜转运蛋白，具有通道蛋白的功能，在三磷酸腺苷（ATP）的参与下可与多种药物结合，并以主动转运的方式将细胞内的亲脂类药物泵出细胞外，从而使细胞内药物浓度降低，最终造成耐药现象。Pgp高表达时提示对蒽环类、长春碱类及紫杉醇类药物耐药。凌斌勋等[6]报道Pgp在胃癌中阳性表达率为79.9%，与本研究结果相符。本研究发现Pgp在印戒细胞癌组织中呈高表达，提示其对亲脂性抗癌药物易耐药；其次肿瘤细胞分化程度越低、临床分期越高、有淋巴结转移者Pgp表达程度越高，提示其可能与恶性肿瘤细胞侵袭性有关。

GST是一组多功能药物代谢酶，许多药物都在GST催化下通过与谷胱甘肽（GSH）结合而解毒,与细胞内解毒密切相关，其中GST-π活性最高，与肿瘤MDR关系最密切。GST-π表达增加主要介导烷化剂、铂类、丝裂霉素类等药物耐药[7]。GST-π在胃癌中的表达明显增高，可高达80.0%[8-9]。本研究发现胃印戒细胞癌中GST-π阳性表达率明显增高，高于正常胃黏膜组织，且有统计学差异，与胃高-中分化癌无统计学差异，且所有患者在取材前均未接受放化疗，说明GST-π高表达可能与胃癌原发性耐药密切相关，提示通过检测GST-π的表达情况可了解患者对化疗药物的耐受情况，有利于制定更为有效的化疗方案，进而获得满意的化疗效果。其次临床分期越高，有淋巴结转移者GST-π表达程度越高，提示GST-π可能与恶性肿瘤细胞侵袭性有关，可作为预后判断指标之一。

TOPO-Ⅱ是一种重要的DNA限制酶，参与DNA的转录、翻译、复制等过程，TOPO-Ⅱ能够作为抗癌药物的靶点，这类药物主要包括胺丫啶、蒽环类和鬼臼霉素等[7]。TOPO-Ⅱ的质和量改变所致的MDR，与肿瘤的恶性程度有关。本研究结果与刘丽梅等[10]研究结果相符，胃印戒细胞癌中TOPO-Ⅱ阳性表达率高于正常胃黏膜组织，明显低于胃高-中分化腺癌，提示肿瘤恶性程度越低，TOPO-Ⅱ表达程度越高。细胞内TOPO-Ⅱ水平直接影响TOPO-Ⅱ抑制剂的抗肿瘤活性，TOPO-Ⅱ表达程度越高，对抗癌药物的敏感性越高。TOPO-Ⅱ含量和活性的降低可导致肿瘤细胞的耐药产生，这可能是印戒细胞癌对化疗不敏感的原因之一。

综上所述，本研究结果与吕春燕等[11]的研究结果一致，提示联合检测Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ3种耐药基因的蛋白表达有利于判断肿瘤耐药情况、指导临床化疗药物的选择，对预后判断具有一定的参考意义。因此在临床上可联合检测Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ，籍此指导治疗及评估预后，但影响胃癌预后的综合因素很多，仍需进一步研究明确。

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[11]吕春燕,张莉,徐华,等.胃印戒细胞癌的临床病理特征及耐药基因表达特点分析[J].山东医药,2012,52(31):38-40.

（本文编辑：胥昀）

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本刊编辑部

Expression of Pgp,GST-π,TOPO-Ⅱ in gastric signet ring cell carcinoma and their clinicopathological significance

LI Ya,YE Shufang,WANG Jianbo,et al.
Department of Gastroenterology,the Central Hospital of Lishui,Lishui 323000,China

Stomach Gastric signet ring cell carcinoma Pgp GST-π TOPO-Ⅱ Immunohistochemistry

2014-11-03）

323000 丽水市中心医院消化科

李雅，E-mail:liya9210@163.com