HPLC 法测定泰脂安胶囊中5 种三萜类化学成分

侯俊杰， 石 静， 聂 晶*

(1. 湖北省食品药品监督检验研究院，湖北 武汉430064;2. 贵阳市环境监测站，贵州 贵阳550002)

泰脂安胶囊为女贞叶(leaf of Ligustri lucidum)乙醇提取物制成的胶囊，具有滋养肝肾的功效，用于肝肾阴虚、阴虚阳亢证所致的原发性高脂血症的治疗。女贞叶乙醇提取物主含三萜类成分，其中齐墩果酸和熊果酸具有护肝、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫功能等药理作用［1-2］。现行标准中采用薄层扫描法测定熊果酸的量［3-4］，该方法准确性、重复性较差。为有效控制产品质量，本实验选用高效液相色谱法，测定泰脂安胶囊中5 种三萜类化学成分量。

1 仪器、试剂与试药

HP-1100 型高效液相色谱仪(美国Agilent 公司)，G1314AVWD 紫外检测器，Agilent 1100 化学工作站。

熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110742-200415);齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110709-200304);19α-羟基熊果酸对照品、2α-羟基熊果酸对照品、3β-反式对羟基肉桂酰氧基-2α-羟基齐墩果酸(均为自制对照品，纯度均＞98%)。

泰脂安胶囊(三九黄石制药厂，批号分别为090101、 090102、 090203、 090401、 1008171Z、1010281Z、1012011Z、1012241Z、1101281Z);甲醇、乙腈为色谱纯;水为超纯水;其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 大连依利特Kromasil C18液相色谱柱(4.6 mm × 250 mm，5 μm);流动相为甲醇-乙腈-10 mmol/L 乙酸铵溶液(53 ∶27 ∶20);检测波长205 nm;体积流量1.0 mL/min;柱温15 ℃;进样量10 μL。理论板数按熊果酸峰计算应不低于5 000。

2.2 对照品溶液的制备 分别取5 种对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL 分别含19α-羟基熊果酸30 μg、2α-羟基熊果酸50 μg、3β-反式对羟基肉桂酰氧基-2α-羟基齐墩果酸8 μg、齐墩果酸140 μg、熊果酸300 μg 的混合溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取泰脂安胶囊内容物0.3 g，精密称定，置100 mL 量瓶中，加甲醇适量，超声处理 (功率250 W，频率33 kHz)10 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 取缺女贞叶乙醇提取物的阴性样品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。

2.5 专属性试验 分别取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，按上述色谱条件测定，结果见图1。阴性对照溶液色谱图中，在与19α-羟基熊果酸、2α-羟基熊果酸、3β-反式对羟基肉桂酰氧基-2α-羟基齐墩果酸、齐墩果酸、熊果酸峰相同保留时间处未见吸收峰，阴性样品无干扰。

2.6 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶液(19α-羟基熊果酸28.50 μg/mL、2α-羟基熊果酸49.44 μg/mL、3β-反式对羟基肉桂酰氧基-2α-羟基齐墩果酸8.11 μg/mL、齐墩果酸0.149 8 mg/mL、熊果酸0.345 5 mg/mL)2、5、10、15、20 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积，以进样量(μg)为横坐标、峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程分别为:19α-羟基熊果酸Y =574.1 X +3.2 (r =0.999 9);2α-羟基熊果酸Y =551.5 X- 4.1 (r=0.999 8);3β-反式对羟基肉桂酰氧基-2α-羟基齐墩果酸Y=882.9 X -54.5 (r =0.999 7);齐墩果酸Y =111.8X -54.5 (r =0.999 4);熊果酸Y =232.9X-90.5 (r =0.999 8)。结果表明19α-羟基熊果酸在0.057 ～0.570 μg、2α-羟基熊果酸在0.099 ～0.990 μg、3β-反式对羟基肉桂酰氧基-2α-羟基齐墩果酸0.016 ～0.160 μg、齐墩果酸在0.300 ～3.00 μg、熊果酸在0.691 ～6.91 μg 范围内线性关系良好。

2.7 精密度试验 精密吸取“2.6”项配好的混合对照品溶液，重复进样6 次，测定峰面积，计算得19α-羟基熊果酸、2α-羟基熊果酸、23β-反式对羟基肉桂酰氧基-2α-羟基齐墩果酸、齐墩果酸、熊果酸的RSD 分别1.2%、0.9%、1.5%、1.0%、1.1%。

2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液 (批号1012241Z)，分别于配置后0、2、4、8、12、24 h进样测定，测得19α-羟基熊果酸、2α-羟基熊果酸、3β-反式对羟基肉桂酰氧基-2α-羟基齐墩果酸、齐墩果酸、熊果酸峰面积的RSD 分别为0.9%、1.0%、1.4%、1.2%、0.9%，结果表明，供试品溶液在24 h 内基本稳定。

2.9 重复性试验 取同一批样品 (批号1012241Z)6 份，按供试品溶液制备方法制备，依法测定，样品中19α-羟基熊果酸平均含有量为7.79 mg/g，RSD 为1.0%;2α-羟基熊果酸平均含有量为19.1 mg/g，RSD 为1.3%;3β-反式对羟基肉桂酰氧基-2α-羟基齐墩果酸平均含有量为1.19 mg/g，RSD 为1.5%;齐墩果酸平均含有量为38.2 mg/g，RSD 为1.1%;熊果酸平均含有量为75.5 mg/g，RSD 为1.3%。结果表明，本方法重复性良好。

2.10 回收率试验 精密称取批号1012241Z 的供试品6 份，各约0.15 g，精密加入混合对照品溶液(19α-羟基熊果酸0.115 mg/mL、2α-羟基熊果酸0.288 mg/mL、3β-反式对羟基肉桂酰氧基-2α-羟基齐墩果酸0.018 0 mg/mL、齐墩果酸0.553 mg/mL、熊果酸1.11 mg/mL)10mL，加甲醇适量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)10 min，放冷，加甲醇至刻度，依法测定，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收试验结果Tab.1 Results of recovery tests

2.11 样品测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定9 批样品，结果见表2。

表2 样品测定结果(mg/g)Tab.2 Results of sample determination (mg/g)

3 讨论

薄层扫描法难以将齐墩果酸和熊果酸二者有效分离，且其展开显色后极不稳定，褪色较快，难以得到较好的测定结果。本实验通过建立HPLC 法测定泰脂安胶囊中齐墩果酸与熊果酸等5 种三萜类成分的量，在所选用条件下齐墩果酸与熊果酸能够得到较好的分离，所测结果重复性、精密度较好，能够有效地对泰脂安胶囊的质量进行控制，可以作为本品的成分定量测定控制方法。

分别取齐墩果酸与熊果酸对照品溶液，于200 ～400 nm 扫描，确定最大吸收波长均在203 ～206 nm，综合考虑采用205 nm 为检测波长。由于齐墩果酸和熊果酸为同分异构体，性质相似，给分离带来较大困难，曾以甲醇-水、乙腈-水等系统［5-8］，并在流动相中加入磷酸、冰醋酸、乙酸铵等试剂，通过调整比例，最后选用甲醇-乙腈-10 mmol/L 乙酸铵溶液(53 ∶27 ∶20)作为流动相，色谱峰峰形对称，基线平直，分离效果较好。柱温对齐墩果酸与熊果酸的分离影响很大，温度越低分离度越高，当柱温为15 ℃时，其分离度大于3.0。泰脂安胶囊内容物为女贞叶乙醇提取物，通过试验比较，当用甲醇超声10 min 以上时，5 种三萜类成分提取率基本不再增高，故提取方法采用甲醇超声10 min。

不同批号泰脂安胶囊中5 种三萜类化学成分的总量差异较小，质量较为稳定，分析其原因可能与其生产原料女贞叶乙醇提取物制备工艺稳定、质量控制较好有关。

［1］ 国家食品药品监督管理局国家药品标准:新药转正标准第三十七册［S］. 2004:15.

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