Sysmex XN-3000 全自动血细胞分析仪血小板计数性能评价分析

张琴，廖扬，石玉玲

广州军区广州总医院a.医学实验科；b.检验科；广东 广州 510010

血细胞分析仪现已是各实验室较为普遍的仪器,血小板（platelet，PLT）计数检测是临床血细胞计数检验中一项重要的分析指标。然而，血小板由于体积小，尤其是极易发生黏附、聚集和变性破坏反应，给计数带来了麻烦。我们采用Sysmex XN-3000血细胞分析仪计数血小板的电阻抗法（PLT-I）、光学法（PLT-O）和荧光色素染色法（PLT-F）进行血小板计数，以流式细胞仪为参考标准，从多个方面评价3种方法计数血小板的临床应用价值。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集本院2013年6～10月住院、门诊患者清晨空腹的血常规标本，用EDTA-K2抗凝。其中血小板＜50×109/L 为低值组，（50×109～125×109）/L 为低中值组，（126×109～350××109）/L为中值组，＞350××109/L为高值组。

1.2 仪器与试剂

Sysmex XN-3000 全自动血细胞分析仪及配套试剂；BD FACSCantoⅡ型流式细胞仪及配套试剂；藻红蛋白标记的抗CD61单克隆抗体（CD61-PE）。

1.3 重复性实验

取低值、低中值、中值和高值4 个水平组各1 份标本，进行10 次连续检测，计算PLT-I、PLT-O和PLT-F的变异系数（CV）。

1.4 线性实验

取高值标本（PLT＞600×109/L）1份，分别以原液、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256 稀释度，用PLT-I、PLT-O和PLT-F方法各做4次测试，取均值与稀释度理论值做直线回归分析，以稀释度理论值为x值，测试值为y值。

1.5 携带污染实验

取1 份高值标本（PLT＞600×109/L）连续3 次计数（记为H1、H2、H3），随机取1 份低值标本（PLT＜20×109/L）连续3 次计数（记为L1、L2、L3），以（L1-L3）/（H3-L1）×100%分别计算PLT-I、PLT-O和PLT-F 方法的携带污染率（n=7）。

1.6 红细胞碎片干扰实验

取1 份血小板计数正常的标本分装4 管，每管400μL，将第1管3600 r/min离心5 min后取压积红细胞层100μL，加入蒸馏水振荡摇匀后3600 r/min离心5 min，留取红细胞碎片层用稀释液反复洗3次后稀释至100μL，取40μL加入第2管中，作为高碎片浓度干扰组，再将剩下的红细胞碎片悬液60μL加稀释液至1 mL，取40μL 加入第3 管中，作为低碎片浓度干扰组。第4 管加40μL 稀释液作为阴性对照。用PLT-I、PLT-O和PLT-F 方法对上述第2、3、4 管进行检测，以第2、3 管PLT 测定值与第4 管测定值进行配对t检验（n=10）。

1.7 方法对比试验

取标本在BD FACSCantoⅡ型流式细胞仪上进行PLT计数，并与Sysmex XN-3000的PLT-I、PLT-O和PLT-F方法计数结果进行比较（n=28）。以流式细胞仪得到的PLT＜50×109/L 的标本为对象，与上述3种方法进行比较（n=13）。

1.8 统计学方法

测定数据用SPSS 13.0软件和Excel软件进行统计学分析。

2 结果

2.1 重复性试验

PLT-I、PLT-O、PLT-F 方法的CV 分别为1.1%～24.3%、2.1%～11.0%和0.0～3.5%。XN-3000 对PLT精密度设置要求为CV≤4.0%。见表1。

2.2 线性实验

PLT-I、PLT-O和PLT-F 等3 种方法的线性理论值与实测值具有良好的相关性，见图1。

2.3 携带污染实验

PLT-I、PLT-O和PLT-F 等3 种方法的平均携带污染率分别为0.25%、0.26%、0.09%，均符合XN-3000携带污染率PLT设置要求（≤1.0%）。见表2。

2.4 红细胞碎片干扰实验

以PLT-I、PLT-O和PLT-I 检测的高浓度组、低浓度组分别与自身对照组做配对t检验。结果表明，在高浓度红细胞碎片干扰的情况下，PLT-I、PLT-O测定值与对照组之间的差异有统计学意义（P＜0.05）；在低浓度红细胞碎片干扰的情况下，PLT-I测定值与对照组之间的差异有统计学意义（P＜0.05），而PLT-O 测定值与对照组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）；无论是在高浓度还是低浓度红细胞碎片干扰下，PLT-F 法测定值与对照组之间的差异均无统计学意义（均为P＞0.05）。见表3。

表1 3种PLT检测方法的重复性

表2 3种PLT检测方法的携带污染率（%）

图1 3种血小板计数方法的线性理论值与实测值的相关性

2.5 方法对比试验

PLT-I、PLT-O、PLT-F 检测方法与流式细胞仪检测的相关系数r分别为0.995、0.997和0.997（图2），其中PLT＜50×109/L 的低值标本的相关系数r依次为0.917、0.920和0.929（图3）。

3 讨论

血小板由骨髓中成熟的巨核细胞分化产生，具有黏附、聚集、分泌三大功能，在生理性止血及纤溶系统中起重要的作用，因而血小板计数对出血性疾病、放疗、化疗患者的疗效监测具有重要意义，也是血液系统疾病诊断的一个重要指标。但因其体积小、无色、易黏附，及易受小红细胞、红细胞碎片、血小板聚集和免疫复合物等干扰，计数往往不能精确反映实际数量。因此，外周血中血小板的准确计数一直是临床上的难题之一。

表3 红细胞碎片对3种PLT检测方法的干扰效果

世界卫生组织（WHO）推荐的血小板计数方法，是以10 g/L 的草酸铵溶液作为溶血稀释液，在相差显微镜下用血细胞计数板肉眼计数[1-2]。该方法容易受到充池、血小板在计数板上的分布、技师的主观判断等误差因素影响，重复性较差且费时，已不适用于临床工作的需求[3]。血小板计数的参考方法是国际血液学标准委员会（ICSH）推荐的使用抗CD61 抗体和抗CD41抗体的流式细胞术[4-5]。该法简便迅速，敏感性和特异性高，尤其适用于低值血小板标本的测定，但须使用专用抗体，成本较高，不适合临床常规标本测定。

现今的全自动化血液分析仪一般PLT-I和PLT-O 法计数血小板。PLT-I 是根据血细胞相对非导电的性质，悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒在通过计数小孔时引起电阻的变化，以此为基础对血细胞进行计数。PLT-O采用半导体流式细胞检测原理，对每个血小板从高低角度进行二维激光扫描，即用前向散射光检测血小板体积，由荧光强度提供核酸信息进行内部结构的确认和计数。Sysmex XN-3000 全自动血液分析仪使用的PLT-F 是利用能给血小板染色的荧光色素给血小板染色，采用流式细胞术检测前向散射光和侧向散射光，根据检测数据绘制出二维散点图进行计数。

图2 3种血小板计数方法与流式细胞仪方法的相关性（n=28）

图3 低值标本血小板计数与流式细胞仪方法的相关性（n=13）

我们参照ICSH、美国临床和实验室标准协会和中国实验室国家认可委员会制定的评价标准[6-8]，对Sysmex XN-3000 全自动血液分析仪的PLT-I、PLTO和PLT-F 等3 种测试方法进行了性能评价。重复性实验中，PLT-I、PLT-O和PLT-F 在中值组和高值组的CV 均低于4.0%；而PLT-I和PLT-O 在低值组和低中值组的CV＞4.0%，PLT-F 的CV＜2.0%；并且PLT-F 在各组血小板浓度计数的CV 均比其他2 种方法低。可见，PLT-F 的精确度较高，PLT-I和PLTO 的精确度较差，尤其在低血小板计数时。线性实验中，PLT-I、PLT-O和PLT-F 的相关系数分别为0.999、1.000、0.999，3 种方法线性理论值与实测值具有良好的相关性。携带污染实验中，PLT-F 的平均携带污染率最小，PLT-O 的最大，PLT-I 介于两者之间，但均≤1%，符合PLT携带污染率设置要求。红细胞碎片干扰实验中，PLT-I 的抗干扰能力一般，轻度溶血时即可影响其血小板的测定；PLT-O 检测血小板的能力优于PLT-I，轻度溶血时不影响，但重度溶血时其检测血小板的结果不可信[9-10]；PLT-F 具有较强的抗干扰能力，不易受标本溶血的影响。另外，与使用抗CD61 抗体的流式细胞术比较，PLT-I、PLTO、PLT-F 方法均具有良好的相关性；在低值血小板中，PLT-I、PLT-O和PLT-F 的相关 系数分别为0.917、0.920和0.929，PLT-F 与流式细胞术的相关性良好，准确性较高。所以，对于PLT 减少的患者，如再生障碍性贫血、急性白血病、原发性血小板减少性紫癜、弥散性血管内溶血等情况下，用PLT-F法进行检测可得到更可靠的结果。

综上所述，临床工作中，常规标本可以使用Sysmex XN-3000全自动血液分析仪的PLT-I和PLT-O法，当血小板计数、形态异常或溶血时，建议使用PLT-F 通道复查，必要时用镜检法或流式细胞术复查和确认，这样在节约试剂成本的同时保证血小板计数结果的可靠性，更有利于指导临床，为临床提供更可靠的信息。

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