金鸡系列制剂质量的初步评价

黄 云，杨艳模，林 海*

（1.湖南食品药品职业学院，湖南 长沙410208；2.常德市第一人民医院，湖南 常德415003；3.湖南省中药不良成分快速检测及脱除工程技术研究中心，湖南 长沙410001；4.湖南省食品药品检验研究院，湖南 长沙410001）

现已上市的金鸡系列产品有胶囊、颗粒、分散片、薄膜片、糖衣片。 金鸡颗粒（冲剂）为金鸡系列制剂的原研药，由金樱根、功劳木、鸡血藤、两面针、千金拔、穿心莲6 味中药提取制得[1-2]。 经查阅国家食品药品监督管理总局数据库，《中华人民共和国药典》1977年版已有金鸡冲剂的处方及剂量的明确记载，其他制剂皆由冲剂简单改变而来。 据国家颁布的这5个品种的现行药品标准记载，仅分散片规定采用高效液相色谱法（HPLC）检测小檗碱，其他都只有薄层色谱（TLC）鉴别，尚无含量测定。 《中华人民共和国药典》2010年版一部中， 对功劳木中的盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的总量做出了规定， 用HPLC测定功劳木中的两种生物碱含量， 总量不得少于0.80%[3-6]。本实验通过TLC 鉴别、含量测定及特征谱图比对对金鸡系列制剂的5个品种质量进行了初步评价。

1 材料

1.1 仪器

Shimadzu LC-20A 高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Waters Alliance 高效液相色谱仪（美国沃特斯公司）；Dionex Ultimate 3000 高效液相色谱仪（美国戴安公司）；XP205 型电子分析天平（梅特勒公司）。

1.2 试药

药根碱(批号110733-101108)， 巴马汀(批号110732-201108)，小檗碱(批号110713-201212) 均购自中国药品生物制品检定所， 供含量测定用；硅胶薄层板(青岛海洋)，乙腈(色谱纯，Honeywell)，其他试剂为分析纯。 样品见表1。

2 方法和结果

2.1 TLC 鉴别

取相当于分散片5 片处方剂量下的各制剂，参照国家药品标准YPZ09402008 金鸡分散片 “鉴别”项下金樱根、 两面针的鉴别的薄层条件进行实验，结果显示： 各品种所有批次的色谱图基本一致，颗粒剂与薄膜衣片、 糖衣片的图谱主要斑点位置相同，胶囊剂和分散片图谱主要斑点位置相同。 结果见图1～2（见封三彩图）。

表1 金鸡系列制剂来源及批号

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 Agilent ZORBAX SB C18(150 mm×4.6 mm×5 μm)； 流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（磷酸调pH 3.2）=22∶78。 流速为0.8 mL/min；进样量为10 μL；柱温为30 ℃；检测波长345 nm。在上述色谱条件下，各成分分离度良好。 见图3。

2.2.2 对照品溶液制备 精密称取对照品药根碱、巴马汀、小檗碱适量于棕色量瓶中，加乙腈-水=3∶7溶液溶解定容，得对照品溶液储备液。 稀释混合成混合对照品溶液母液，备用。

图3 金鸡胶囊样品（A）、阴性样品（B）、对照品(C)的HPLC 图

2.2.3 供试品溶液制备 （1）金鸡胶囊：精密称取装量差异项下内容物1.5 g，置100 mL 具塞锥形瓶中，用70%甲醇-盐酸（100∶1）20 mL，冷浸，超声处理45 min，放冷，补足减少的质量，摇匀；高速离心10 min，精取上清液10 mL 加入中性氧化铝柱层析纯化。 无水乙醇洗脱，收集其中鲜黄色色带部分，蒸干，残渣加乙腈-水=3∶7 混合溶液溶解，移到10 mL量瓶中定容至刻度，0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液即得。 （2）金鸡分散片：精密称取片重差异项下粉末约0.3 g。 后续步骤同“金鸡胶囊”。 （3）金鸡颗粒：精密称取装量差异项下粉末约30 g。精密加入70%甲醇-盐酸（100∶1）混合溶液40 mL，称定质量。后续步骤同“金鸡胶囊”。 （4）金鸡薄膜衣片：精密称取片重差异项下粉末约1.0 g，后续步骤同“金鸡胶囊”。（5）金鸡糖衣片：精密称取片质量差异项下约0.5g。后续步骤同“金鸡胶囊”。

2.2.4 线性关系试验 以浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标， 得回归方程Y药根碱=5.59×104x-4 878 （R2=0.999 9，n=7），Y巴马汀=6.06×104x+2 320（R2=0.999 9，n=7），Y小檗碱=5.81×104x+1 783（R2=0.999 9，n=7），表明药根碱、 巴马汀和小檗碱分别在0.758 8～189.696 0，0.283 3～70.821 9，0.692 2～173.053 2 μg/mL 范围内均呈现良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10 μL，连续进样6 次测定。 结果药根碱、巴马汀和小檗碱峰面积的RSD 分别是0.67%、0.08%、0.47%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别于0、2、4、8、12、24 h 取样测定。结果药根碱、巴马汀和小檗碱的RSD 分别是0.60%、0.52%、0.63%（n=6），表明供试品溶液在24 h 内基本稳定。

2.2.7 重复性试验 药根碱、巴马汀和小檗碱的平均质量分数（μg/粒）分别为54.79、35.09、30.80，RSD分别为0.56%、0.64%、1.62%（n=6）， 表明方法重复性良好。

2.2.8 加样回收试验 精密称取已知含量的金鸡胶囊样品约0.75 g，共6 份，精密称定。 按照50%的取样量+余下50%含量的对照品平行做6 份的方法， 各精密加入药根碱、 巴马汀和小檗碱对照品适量，按“2.2.3”项下制备供试品溶液，进样测定。 结果药根碱、 巴马汀和小檗碱的加样回收率分别为98.02%、98.68%、98.31%，RSD 分别为1.08%、1.17%、1.41%（n=6）。 表明方法回收率良好。

2.2.9 样品测定 分别采用外标法计算金鸡制剂中药根碱、巴马汀和小檗碱的量。 结果见表2。

表2 金鸡系列制剂样品含量测定结果 （±s，μg）

表2 金鸡系列制剂样品含量测定结果 （±s，μg）

剂 型胶囊（粒）颗粒（袋）分散片（片）糖衣片（片）薄膜衣片（片）生产厂家广西A广东A广东B广西A湖南A广东B广东A广西A广西A批次8 2 2 3 5 4 2 2 6巴马汀均值62.59±24.06 34.42±10.66 74.88±0.10 26.83±14.44 523.36±33.44 35.37±6.21 97.06±3.03 41.74±10.11 83.88±6.00药根碱均值95.24±27.83 79.19±17.87 117.24±6.27 41.91±17.01 526.78±26.94 34.39±5.18 158.48±0.50 64.76±20.53 119.83±6.15小檗碱均值45.61±17.22 27.81±0.40 47.33±3.73 25.42±12.77 2101.39±16.11 27.70±4.11 91.31±3.48 39.83±7.36 78.66±6.86

2.3 金鸡系列制剂样品的特征图谱

采用二极管阵列200～400 nm 扫描，在265 nm处生物碱主要成分盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、盐酸药根碱均有较强的吸收，检测到其他色谱峰特征性强的成分响应值也较好。 采集此波长下60 min 色谱图作为特征图谱，结果见图4～8。

3 讨论

图4 金鸡胶囊色谱图

图5 金鸡分散片色谱图

图6 金鸡颗粒色谱图

图7 金鸡薄膜衣片色谱图

图8 金鸡糖衣片色谱图

3.1 金鸡系列制剂每次服用剂量为： 颗粒剂1 袋、胶囊剂4 粒，其余糖衣片、薄膜衣片、分散片均为6片，日服3 次。 含量检测发现，同一厂家（广西A）的4 种剂型中，单次供患者服用总生物碱量，以颗粒剂94.16 mg 最低， 而薄膜衣片高达1 694.22 mg，两者相差近20 倍， 糖衣片877.98 mg 与胶囊剂813.76 mg 较接近。 在排除生产投料、饮片质量差异及人员操作的因素外， 可推断提取工艺不同。 由于这些制剂是在原研药颗粒剂的基础上通过简单改剂型而来， 批准生产前没有进行临床验证，其疗效是否跟原研药一致，有待于进一步确证。

3.2 特征图谱显示，颗粒剂与薄膜衣片、糖衣片所含成分基本一致；而胶囊剂和分散片的色谱图中，少了一个特征峰。 同一厂家，其饮片来源应是一致的，若采用相同的生产工艺，其特征图谱应基本一致，由此可以初步推断，金鸡分散片、金鸡胶囊与颗粒剂、薄膜衣片和糖衣片的提取工艺存在质的差异。

3.3 统计学分析

将不同剂型之间的生物碱含量， 应用SPSS 16.0 统计学软件进行H 检验，验证不同剂型之间所测生物碱含量差异，进一步确定不同剂型之间质量存在明显差异。 以剂型和厂家为变量名，建立数据文件。 其统计结果见表3。

表3 金鸡系列制剂生物碱含量的H 检验结果

故按α=0.05 水准可认为5 种剂型所测生物碱含量差异大， 验证了提取工艺明显不一致的结论。故有必要将含量检测订入各品种质量标准。

3.4 本文选取的指标仅限于化学成分，故不免存在一定的局限性。 若能结合采用药效和临床研究，其方法和结果会更全面而客观。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S]一部.北京：人民卫生出版社，1977：771.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S]一部.北京：中国医药科技出版社，2010：296；79.

[3]刘士旺.金鸡冲剂质量研究[J].中成药，1992，14(4)：9-10.

[4]张火旺. HPLC 法测定金鸡片中原儿茶酸的含量[J]. 中国药房，2012，23(16)：1 525-1 526.

[5]Dkless K，Schlottfeldt JL，Pasqual M，et al. Inhibition of invitrolymphocyte tansformation by the isoquinoline alkaloid berberine [J]. Pham Pharmacol，1995（47）：1 092-1 031.

[6]黄毅婷，游勇基.功劳木药材特征图谱研究和生物碱含量测定[J].海峡药学，2012，24(1)：68-70.