HPLC-ELSD测定补中益气颗粒中黄芪甲苷含量

陈晓虎

(重庆市食品药品检验所 重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121)

中药工业

HPLC-ELSD测定补中益气颗粒中黄芪甲苷含量

陈晓虎*

(重庆市食品药品检验所 重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121)

目的建立补中益气颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法。方法采用Diamonsil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-水(35∶65)，流速为1.0 mL·min-1，柱温30 ℃，蒸发光散射检测器，漂移管温度110 ℃，气体流速为3.0 L·min-1。结果黄芪甲苷浓度在2.682～21.456 μg内线性关系良好(r=0.999 9)；平均回收率为98.3%，RSD=1.0%。结论该方法灵敏、准确，可用于补中益气颗粒的质量控制。

HPLC；ELSD；补中益气颗粒；黄芪甲苷

补中益气颗粒由黄芪、党参、甘草等10味中药组成，具有补中益气，升阳举陷的功效，用于脾胃虚弱，中气下陷，体倦乏力，食少腹胀，久泻、脱肛、子宫脱垂等症[1-2]。黄芪为方中君药，有补气升阳，固表止汗的功效，而黄芪甲苷为黄芪中特征性成分。本实验参考《中国药典》2010年版一部黄芪含量测定方法及相关文献[3-4]，建立HPLC-ELSD测定补中益气颗粒中黄芪甲苷含量的方法，可更全面地控制本品质量。

1 仪器与试剂

Waters 2695高效液相色谱仪；黄芪甲苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110781-201001，含量测定用)；补中益气颗粒(北京汉典制药有限公司，规格：3 g/袋，批号：110301，111001，110502)；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18色谱柱(200 mm ×4.6mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(35∶65)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；蒸发光散射检测器条件：漂移管温度110 ℃，氮气流速3.0 L·min-1；进样量10 μL。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品10袋，混合均匀，研细，取约8 g，精密称定，精密加入甲醇100 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50 mL，蒸干，残渣加水25 mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次25 mL，弃去乙醚液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取5次(30，30，20，20，20 mL)，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次40 mL，正丁醇液回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并转移至2 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。

2.4 专属性试验

分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，结果见图1。供试品色谱中，在与对照品相应位置上有色谱峰，主峰与其他成分分离良好，阴性对照对黄芪甲苷峰无干扰。

A.黄芪甲苷对照品 B.补中益气颗粒 C.缺黄芪阴性对照品图1 补中益气颗粒HPLC图

2.5 线性关系考察

分别精密吸取浓度为0.536 4 mg·mL-1的黄芪甲苷对照品溶液2，5，10，15，20，40 μL进样，测定峰面积，以黄芪甲苷的进样量(μg)的自然对数为横坐标，以峰面积的自然对数为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=1.220 4X+11.771(r=0.999 9)，表明黄芪甲苷进样量在2.682～21.456 μg线性关系良好。

2.6 精密度试验

取同一黄芪甲苷对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积，测得RSD=1.5%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液(批号：110502)，分别于0，1，2，4，8，12 h测定，结果RSD=0.8%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.8 重复性试验

取同一批号样品(批号：110502)，依法分别制备6份供试品溶液，测定含量，结果RSD=1.8%，表明方法重复性良好。

2.9 回收率试验

取补中益气颗粒样品(批号：110502，含量为0.229 4 mg·g-1)约4.0 g，精密称定，平行做6份，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液(0.536 4 mg·mL-1)5 mL，再按供试品溶液制备方法处理，测定含量，并计算回收率，结果见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收试验

注：黄芪甲苷对照品加入量均为0.976 0 mg

2.10 检测限和定量限

在选定的色谱条件下，将黄芪甲苷对照品溶液进行稀释，进样，当信噪比为3时，黄芪甲苷进样量为检测限，当信噪比为10时，黄芪甲苷进样量为定量限。结果表明黄芪甲苷检测限和定量限分别为0.075，0.25 μg。

2.11 样品含量测定

取3批补中益气颗粒(批号：110301，111001，110502)，按上述方法测定黄芪甲苷的含量，结果分别为0.83，0.86，0.71 mg/袋。

3 讨论

黄芪中特征性成分黄芪甲苷无紫外吸收，无法用常规的紫外检测器检测，故参考《中国药典》2010年版一部黄芪项下黄芪甲苷测定方法，选用通用型质量检测器ELSD[5-6]，结果响应值良好。

分别考察了甲醇-水，乙腈-水等流动相，结果采用乙腈-水(35∶65)，黄芪甲苷色谱峰保留时间合适，峰形对称，分离度好。

分别考察了甲醇、乙醇、50%甲醇、50%乙醇等提取溶剂，结果甲醇提取效率最高；分别考察了加热回流和超声提取两种提取方式，结果相同时间下回流提取方式所得黄芪甲苷含量高于超声提取方式；分别考察了水饱和正丁醇提取次数、正丁醇饱和的水洗涤次数，结果采用上述方法，黄芪甲苷基本提尽，杂质干扰最小。

此方法提取步骤较多，目标成分容易损失，尤其是在萃取过程中，切忌振摇过于剧烈，产生乳化现象时，可采用适当加热的方式破除，或放置较长时间使自然分层。

上述方法学实验结果表明，采用HPLC-ELSD法测定补中益气颗粒中黄芪甲苷的含量，准确可靠，重复性好，专属性强，可用于补中益气颗粒中黄芪甲苷的定量分析。

[1] 徐家骝，张诚光，刘广南.补中益气颗粒剂与汤剂、丸剂药理作用比较研究[J].中药药理与临床，1998，14(1)：14-16.

[2] 唐艳，陈冬梅.补中益气丸预防盆腔炎复发62例疗效观察[J].中成药，2011，33(1)：189-190.

[3] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：283.

[4] 吴宏华，宋剑锋.RP-HPLC法测定补中益气颗粒中橙皮苷含量[J].海峡药学，2012，24(6)：54-56.

[5] 陈乃江.HPLC-ELSD法测定肝速康胶囊中齐墩果酸的含量[J].中国现代中药，2008，10(10)：34-36.

[6] 崔丽娜，孙佳明，张辉.HPLC-ELSD法测定血栓心脉宁胶囊中胆酸的含量[J].吉林中医药，2011，31(2)：165-167.

DeterminationofAstragalosideⅣinBuzhongYiqiGranulesbyHPLC-ELSD

CHENXiaohu*

(ChongqingInstituteforFoodandDrugControl，ChongqingengineeringresearchcenterforPharmaceuticalprocessandqualitycontrol，Chongqing401121，China))

Objective：To establish HPLC-ELSD method for determination of Astragaloside Ⅳ in Buzhong Yiqi Granules.MethodsDiamonsil C18column(200 mm×4.6 mm，5 μm)was adopted and mobile phase consisted of acetonitrile-water(35∶65).The flow rate was 1.0 mL·min-1.The column temperature is 30 ℃.The ELSD inlet heater was set at 110 ℃，and the flow rate of N2is 3.0 L·min-1.ResultsThe linear range was 2.682～21.456 μg(r=0.999 9).The average recovery rate was 98.3%(RSD=1.0%).ConclusionThe method is sensitive，accurate，and can be used for the quality control of Buzhong Yiqi Granules.

HPLC；ELSD；Buzhong Yiqi Granules；Astragaloside Ⅳ

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陈晓虎，主管中药师，研究方向：药品质量；Tel：(023)65072753，E-mail：chenxiaohu78@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.03.014

2013-09-10)