非小细胞肺癌患者K-ras基因突变与预后的相关性分析

刘晖群，刘敏知，熊林楷

江西省肿瘤医院 内二科，江西 南昌 330029

非小细胞肺癌（non small cell lung cancer，NSCLC）是目前临床上最常见的肺癌类型。诸多研究表面，分子生物学因素如癌基因、抑癌基因、肿瘤细胞DNA含量、肿瘤黏附分子、肿瘤血管生成等，对NSCLC的生物学行为可以产生巨大的影响，从而决定着NSCLC的形态特征、生长方式、恶性程度、转移、复发等，并进一步影响着患者的预后[1-3]。本研究即旨在探讨NSCLC患者K-ras基因突变与预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 研究对象

2006年3月～2008年7月江西省肿瘤医院收治的92例患者。纳入标准：①经病理检查确诊为NSCLC；②临床资料完整，相关检查得到完善。排除标准：①随访丢失的患者；②治疗方案不规范的患者。包括男性61例、女性31例；年龄42～75岁，平均（59.9±8.1）岁；病理分型腺癌79例、鳞癌8例、其他类型5例；有吸烟史患者62例，从未有过吸烟史患者30例。

1.2 治疗方案

严格按照美国国立综合癌症网络（NCCN）提供的NSCLC治疗指南给予研究对象综合治疗。92例患者中，34例采用以手术为主的综合治疗，余58例因丧失手术机会而采用以化疗为主的综合治疗。

1.3 K-ras基因突变检测

采用蝎形探针扩增阻遏突变系统（amplifica⁃tion refractory mutation system，ARMS）法对研究对象组织学标本行K-ras基因突变检测，试剂盒由英国Delivering Pharmacogenomics公司生产，检测K-ras基因第12、13位密码子的7种突变，包括Gly12Cys（GGT＞TGT）突 变 、Gly12Val（GGT＞GTT）突 变 、Gly12Ala（GGT＞GCT）突变、Gly12Arg（GGT＞CGT）突变 、Gly12Asp（GGT＞GAT）突 变 、Gly12Ser（GGT＞AGT）突变、Gly13Asp（GGC＞GAC）突变。

1.4 随访方式

对所有研究对象进行随访，随访方式包括门诊就诊、电话、电子邮件等方式，记录每个患者的生存情况。本研究中末次随访时间为2014年2月，所有研究对象均得到有效随访。

1.5 统计学分析

采用SPSS17.0统计学软件，计量资料用x±s表示，计量资料比较采用成组设计t检验，计数资料百分率比较采用四格表χ2检验，生存分析采用Log rank检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSCLC患者K-ras基因突变率及其突变类型

92例NSCLC患者中有11例K-ras基因突变阳性，阳性率为11.96%。突变类型包括Gly12Cys（GGT＞TGT）突变 3例、Gly12Val（GGT＞GTT）突变 2例、Gly12Ala（GGT＞GCT）突变 2例、Gly12Arg（GGT＞CGT）突 变 2 例 、Gly12Cys（GGT＞TGT）突 变 与Gly12Val（GGT＞GTT）突变并存1例、Gly12Cys（GGT＞TGT）突变与Gly12Ala（GGT＞GCT）突变并存1例。

2.2 K-ras基因突变阳性组与阴性组之间临床病理特征的比较

K-ras基因突变阳性组与阴性组之间的患者性别、年龄、病理类型、吸烟史相比，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.3 K-ras基因突变阳性组与阴性组之间中位生存期的比较

K-ras基因突变阳性组包括Ⅰa～Ⅱb期患者2例，总生存时间17～24个月；Ⅲa～Ⅳ期患者9例，总生存时间6～35个月，中位生存期10个月。K-ras基因突变阴性组包括Ⅰa～Ⅱb期患者22例，总生存时间15～67个月，中位生存期25个月；Ⅲa～Ⅳ期患者59例，总生存时间7～28个月，中位生存期19个月。Log rank检验显示K-ras基因突变阳性组Ⅲa～Ⅳ期患者中位生存期显著低于K-ras基因突变阴性组Ⅲa～Ⅳ期患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

20世纪80年代以来，诸多研究者对肺癌，尤其是NSCLC的病因、诊断、治疗、预后进行了大量分子生物学研究，从而认识到NSCLC的发生、发展、转移、侵袭、多药耐药等生物学行为与机体内细胞基因功能或结构异常有关，如抑癌基因的突变与失活、原癌基因的突变与失活、端粒酶相关的细胞永生性激活、宿主抗肿瘤免疫基因的破坏、基因不稳定性、转移抑制相关基因异常、旁分泌与自分泌生长因子的激活、肿瘤血管生长因子的激活等[4-5]。随着研究的深入，目前已初步形成了NSCLC分子诊断、分子分期、分子治疗、分子预后等新的理论[6]，各种NSCLC分子生物学标志物逐步应用于临床。

K-ras基因属于原癌基因，定位于人染色体12p12.1，编码一种定位于细胞膜上的p21-ras偶联蛋白，其功能主要是将细胞生长、分化信号从激活受体传导至蛋白激酶。K-ras基因突变后，其编码的蛋白会丧失灭活的功能，从而刺激细胞自发性生长、分化，在各种恶性肿瘤如NSCLC、胰腺癌、结直肠癌、乳腺癌等的发生及发展过程中发挥重要作用[7]。目前国内外有关K-ras基因突变与NSCLC的研究报道较多。Meng等[1]报道，20%～30%的NSCLC患者K-ras基因突变阳性，其中以腺癌最为常见，K-ras基因突变可以缩短NSCLC患者尤其是早期腺癌患者的总生存期。Garassino等[8]报道，NSCLC患者的药物敏感性、肿瘤生物学行为受K-ras基因突变类型的影响。

表1 K-ras基因突变阳性组与阴性组之间临床病理特征的比较

在本研究中，我们对92例NSCLC患者进行了K-ras基因突变检测，有11例患者K-ras基因突变阳性，其中9例为单位点突变，2例为多位点突变，K-ras基因突变阳性率为11.96%，略低于前述20%～30%的比例，这可能是由于地域差异、抽样误差等因素所致。其次，通过分析K-ras基因突变与NSCLC患者临床病理特征的关系可知，K-ras基因突变与NSCLC患者的性别、年龄、病理类型、吸烟史等临床资料无关，这与Baykara等[9]报道一致，说明K-ras基因突变不受NSCLC患者的一般临床病理特征所影响。最后，我们还分析了K-ras基因突变对NSCLC患者中位生存期的影响，由于K-ras基因突变阳性组Ⅰa～Ⅱb期患者病例数过少，无法求出中位生存期，因此仅对K-ras基因突变阳性组Ⅲa～Ⅳ期患者与K-ras基因突变阴性组Ⅲa～Ⅳ期患者中位生存期做了比较，结果显示前者中位生存期显著低于后者，说明K-ras基因突变对NSCLC患者预后可以产生负性影响。综上所述，在NSCLC患者的临床诊治过程中，K-ras基因突变检测具有一定的临床应用价值。

[1]Meng D,Yuan M,Li X,et al.Prognostic value of K-RAS mutations in patients with non-small cell lung cancer:a sys⁃tematic review with meta-analysis[J].Lung Cancer,2013,81(1):1-10.

[2]Li H,Xie L,Lai R S.Association of EGFR mutations with low BRCA1 gene expression in non-small cell lung cancer[J].Mol Clin Oncol,2013,1(1):195-199.

[3]Bi Jian-Wei,Mao Yi-Min,Sun Yu-Xia,et al.Expression lev⁃els of ERCC1 and RRM1 mRNA and clinical outcome of ad⁃vanced non-small cell lung cancer[J].Pak J Med Sci,2013,29(5):1158-1161.

[4]Oak C H,Wilson D,Lee H J,et al.Potential molecular ap⁃proaches for the early diagnosis of lung cancer(review)[J].Mol Med Rep,2012,6(5):931-936.

[5]Perlikos F,Harrington K J,Syrigos K N.Key molecular mech⁃anisms in lung cancer invasion and metastasis:a comprehen⁃sive review[J].Crit Rev Oncol Hematol,2013,87(1):1-11.

[6]Pendharkar D,Ausekar B V,Gupta S.Molecular biology of lung cancer-a review[J].Indian J Surg Oncol,2013,4(2):120-124.

[7]Ishida M,Igarashi T,Teramoto K,et al.Mucinous bronchio⁃loalveolar carcinoma with K-ras mutation arising in type 1 congenitalcystic adenomatoid malformation:a case report with review of the literature[J].Int J Clin Exp Pathol,2013,6(11):2597-2602.

[8]GarassinoM C,MarabeseM,RusconiP,etal.Different types of K-Ras mutations could affect drug sensitivity and tu⁃mour behaviour in non-small-cell lung cancer[J].Ann Oncol,2011,22(1):235-237.

[9]Baykara O,Tansarikaya M,Demirkaya A,et al.Association ofepidermalgrowth factorreceptorand K-Rasmutations with smoking history in non-small cell lung cancer patients[J].Exp Ther Med,2013,5(2):495-498.