振脾汤对溃疡性结肠炎模型大鼠的形态学及组织病理学的影响疗效观察

王爱磊 张学明

(河北省唐山市中医医院肛肠科，河北 唐山 063000)

1 河北省唐山工人医院肛肠科，河北 唐山 063000

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种病因尚不十分清楚的直肠及结肠的慢性非特异性炎症性疾病，以腹泻、黏液脓血便及腹痛为主要临床表现，病情易反复，不易根治，并伴有多种肠外变现及全身表现［1］。本实验研究以三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇建立的大鼠UC动物模型为研究对象，观察自拟中药方剂振脾汤对UC的模型大鼠的形态学及组织病理学的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 Wistar大鼠48只(由河北医科大学实验动物中心提供)，体质量200～250 g，雌雄各半，分笼饲养。动物合格证号:905013。

1.1.2 药物 振脾汤(药物组成:黄芪20 g，党参20 g，茯苓20 g，炒白术 15 g，桂枝 10 g，炒白芍药 30 g，炙甘草10 g，煨葛根 30 g，胡黄连 10 g，吴茱萸 5 g，干姜 5 g，败酱草20 g)由河北省唐山市中医医院中药房提供;柳氮磺吡啶片(上海三维制药有限公司，国药准字H31020450，批号:060501);

1.1.3 主要仪器与试剂 TNBS(日本东京化成工业株式会社);SW-CJ-1F超净工作台(苏州净化设备有限公司);Leica RM2135切片机［德国徕卡(Leica)仪器有限公司］;双目生物显微镜(日本奥林巴斯株式会社);BM-Ⅱ型病理组织包埋机(安徽电子科学研究所);切片漂烘温控仪(安徽电子科学研究所)。

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型制备 将48只Wistar大鼠随机分为4组:正常组、模型组、振脾汤组及柳氮磺胺吡啶片组，每组大鼠12只。全部大鼠禁食(不禁水)24 h后，采用乙醚麻醉，正常组不灌肠，模型组、振脾汤组及柳氮磺胺吡啶片组分别采用直径2 mm的硅胶管插入距大鼠肛门约8 cm结肠处，用含20 mg TNBS的0.5 mL 30%乙醇灌肠，结束后，使大鼠平躺，保留15 min，自然清醒，自由饮食。正常组大鼠神态安逸，活动敏捷，被毛光泽，饮食量较大，体态正常，大便颗粒状，肛周洁净;模型组、振脾汤组及柳氮磺胺吡啶片组大鼠在造模第2 d后出现腹泻，肛周污秽，大便次数增多，软便或稀便，大便末端有黏液或脓点等表现，提示造模成功。

1.2.2 给药方法 全部大鼠于造模成功2周后(14 d)开始灌胃给药。振脾汤组予振脾汤2 mL(含生药17 g)灌胃，每日1次;柳氮磺胺吡啶片组予柳氮磺吡啶片溶液2 mL(含药0.25 g)灌胃，每日1次;正常组及模型组均予等容积的蒸馏水灌胃，每日1次。各组大鼠均自由饮食，连续灌胃2周。

1.3 观察方法及指标

1.3.1 一般情况 每日观察各组大鼠的精神状态、进食、活动、排便及体质量等情况，并做记录。

1.3.2 各组大鼠均在给药前及给药1、2周后，以2%戊巴比妥钠(3 mL/kg)麻醉后，每组分别处死4只，并留取结肠标本待检。

1.3.2.1 大体形态学观察 将大鼠结肠标本采用福尔马林溶液固定后肠黏膜层向上平铺于硬纸板上，用大头针固定，并保持在0.9%氯化钠注射液中，观察黏膜损伤程度，并对大鼠结肠黏膜损伤进行评分［2］。

1.3.2.2 组织病理学观察 将大鼠结肠标本常规石蜡包埋、切片、苏木精-伊红(HE)染色，做成组织切片，在显微镜下观察标本组织学改变，并按Dieleman等提出的评分标准进行评分［3］。

1.4 统计学分析 用SPSS 10.0统计软件进行统计学分析，计量资料用均数±标准差(±s)表示，采用单因素方差分析，方差齐时用最小显著差法作两两比较，方差不齐时采用Tamhance T2作两两比较及χ2检验。以P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠给药前后体质量变化比较 见表1。

表1 各组大鼠给药前后体质量变化比较g，±s

表1 各组大鼠给药前后体质量变化比较g，±s

与正常组同期比较，*P＜0.05;与模型组同期比较，△ P＜0.05

给药前(n=4)给药1周后(n=4)给药2周后(n=4)245.05 ±8.43 253.05 ±9.03 260.31 ±9.38模型组 229.05 ±6.43* 232.40 ±6.83* 238.33 ±8.45*振脾汤组 228.33 ±5.97 237.76 ±8.29 249.00 ±8.56△柳氮磺胺吡啶片组 227.68 ±7.01 235.42 ±7.41 245.05 ±8.31正常组△

由表1可见，模型组大鼠体质量与正常组同期比较差异均有统计学意义(P＜0.05);给药1周后，振脾汤组及柳氮磺胺吡啶片组大鼠体质量与模型组同期比较差异均无统计学意义(P＞0.05);给药2周后，振脾汤组及柳氮磺胺吡啶片组大鼠体质量与模型组同期比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，但2组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.2 各组大鼠结肠黏膜大体形态学损伤评分比较 见表2。

表2 各组大鼠结肠黏膜大体形态学损伤评分比较分，±s

表2 各组大鼠结肠黏膜大体形态学损伤评分比较分，±s

与正常组同期比较，*P＜0.05;与模型组同期比较，△ P＜0.05

给药前(n=4)给药1周后(n=4)给药2周后(n=4)正常组000模型组 8.47 ±1.31* 4.81 ±1.08* 4.01 ±0.67*振脾汤组 8.56 ±0.79 4.28 ±0.57 0.75 ±0.71△柳氮磺胺吡啶片组 8.44 ±1.41 4.47 ±0.96 1.28 ±0.49△

由表2可见，模型组大鼠结肠黏膜大体形态学损伤评分与正常组同期比较差异均有统计学意义(P＜0.05);给药1周后，振脾汤组及柳氮磺胺吡啶片组大鼠结肠黏膜大体形态学损伤评分与模型组同期比较差异均无统计学意义(P＞0.05);给药2周后，振脾汤组及柳氮磺胺吡啶片组大鼠结肠黏膜大体形态学损伤评分与模型组同期比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，但2组间比较差异无统计学意义(P ＞0.05)。

2.3 各组大鼠结肠黏膜组织病理学损伤评分比较 见表3。

表3 各组大鼠结肠黏膜组织病理学损伤评分比较分，±s

表3 各组大鼠结肠黏膜组织病理学损伤评分比较分，±s

与正常组同期比较，*P＜0.05;与模型组同期比较，△ P＜0.05

给药前(n=4)给药1周后(n=4)给药2周后(n=4)正常组000模型组 9.56 ±1.31* 6.28 ±1.11* 4.01 ±0.95*振脾汤组 9.46 ±1.79 5.45 ±0.57 0.55 ±0.34△柳氮磺胺吡啶片组 9.49 ±1.41 5.67 ±0.87 1.09 ±0.56△

由表3可见，模型组大鼠结肠黏膜组织病理学损伤评分与正常组同期比较差异均有统计学意义(P＜0.05);振脾汤组及柳氮磺胺吡啶片组给药前及给药1周后大鼠结肠黏膜组织病理学损伤评分与模型组同期比较差异均无统计学意义(P＞0.05);振脾汤组及柳氮磺胺吡啶片组给药2周后大鼠结肠黏膜组织病理学损伤评分与模型组同期比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，但2组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

UC是世界难治性疾病之一，近年来发病率呈上升趋势，并且随着病程延长癌变可的能性也在增加［4］。柳氮磺吡啶在UC治疗初期可以取得良好的疗效，但是随着病程以及治疗时间的延长，一半以上的患者不得不因副作用停止治疗或者寻求新的治疗药物［5］。近年来，大量临床资料报道中，中药治疗UC具有独特的优势，开发针对UC有效的中药成为临床的热点［6］。

中医学认为，UC属泄泻、痢疾、便血、肠风、脏毒等范畴，主要病变在脾、胃、肠，因感受外邪、饮食所伤、情志失调等导致脏脾虚弱而致病［7］。我们认为，UC发病过程中脾虚为发病之本，湿热为发病之标，血瘀为局部病理变化，其治疗原则应为健脾益气，清热燥湿，凉血解毒，祛腐生肌，涩肠止泻。振脾汤中的黄芪补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌;党参润肺生津，健运中气;茯苓、白术健脾利湿助运;桂枝、吴茱萸、干姜温中和脾，助阳止泻;胡黄连、败酱草清热燥湿，凉血解毒;葛根、白芍药活血化瘀止痛，收敛涩肠;甘草调和诸药。全方补脾益肾以固本，清热燥湿以去邪，标本兼治，药性平和，没有猛烈之药，适用于久泄、久痢之人长久服用。现代药理研究表明，黄芪是一种免疫调节剂，可增强机体免疫功能，还具有抗炎、抗菌作用［8］。党参提取液对正常小鼠的免疫增强作用并不显著，但对用环磷酰胺造成免疫抑制状态的小鼠，能明显增强淋巴细胞转化及抗体形成，提高血清抗体滴度水平，增强免疫力［9］。

本实验研究中，大鼠经TNBS/乙醇处理后出现的大体形态学和组织病理学表现类似于人类UC，比较适合防治药物的筛选和研究。给药1周后，振脾汤组及柳氮磺胺吡啶片组大鼠精神状态开始好转，大便由完全稀便逐渐变为软便，黏液减少，食量渐增，2组大鼠体质量较模型组虽有所增加，但比较差异无统计学意义(P＞0.05);2组大鼠结肠黏膜形态学表现为充血水肿、糜烂、溃疡形成，虽较模型组有所减轻，但其损伤评分比较差异无显著意义(P＞0.05);2组大鼠结肠黏膜组织病理学检查显示病变主要位于黏膜层及黏膜下层，以中性粒细胞浸润为主，亦可见数量不等的巨噬细胞及嗜酸性粒细胞，另可见增生的纤维母细胞，其病理损伤评分虽较模型组减轻，但比较差异无统计学意义(P＞0.05)。给药2周后，振脾汤组大鼠大便呈颗粒状，肛周洁净，食量正常，柳氮磺胺吡啶片组大鼠大便呈软颗粒状大便，肛周洁净，食量较好，2组大鼠体质量均较模型组明显增加(P＜0.05)，振脾汤组虽较柳氮磺胺吡啶片组体质量增加略多，但比较差异无统计学意义(P＞0.05);2组大鼠结肠黏膜大体形态学表现逐渐恢复正常，溃疡已愈合，其损伤评分较模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，均明显降低;2组大鼠结肠黏膜组织病理学检查显示组织形态逐渐恢复正常，溃疡已愈合，结缔组织增生并纤维化，其病理损伤评分与模型组组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，均明显降低。

本实验结果表明，振脾汤方治疗UC模型大鼠临床效果可靠，可以明显改善大鼠一般情况，增加大鼠体质量，改善微循环，抑制炎症反应，修复溃疡，从而达到治疗UC的效果，且安全可靠，无毒副作用，更适用于 UC的维持治疗。

［1］陈灏珠.实用内科学［M］.11版.北京:人民卫生出版社，2001:1785.

［2］朱峰，钱家鸣，潘国宗.细胞免疫反应性炎症性肠病动物模型的建立［J］.中国医学科学院学报，1998，20(4):271-278.

［3］Dieleman LA，Palmen MJ，Akol H，et al.Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium(DSS)is characterized by Th1 and Th2 cytokines［J］.Clin Exp Immunol，1998，114(3):385-391.

［4］彭黎明，王曾礼.细胞凋亡的基础与临床［M］.北京:人民卫生出版社，2000:13-15.

［5］姜敏，石丽红，宋苏华.柳氮磺胺吡啶联合金双歧治疗溃疡性结肠炎的临床研究［J］.中国中医药咨讯，2012，4(3):234-235.

［6］罗云坚，张北平，杨小波.溃疡性结肠炎的中医药治疗特色与优势［J］.中国消化内镜杂志，2008，2(4):21-24.

［7］邓长生，夏冰.炎症性肠病［M］.北京:人民卫生出版社，1998:314-319.

［8］苗明三.法定中药药理与临床［M］.西安:世界图书出版公司，1998:1050-1056.

［9］贾宁，王汉，郑晶.复方党参提取物对环磷酰胺处理小鼠免疫功能的调节作用［M］.中国实验方剂学杂志，2011，17(17):206-209.