高效毛细管电泳法测定盐酸马尼地平片中盐酸马尼地平的含量

宋群立，王 蕾，郝永伟，张超峰，史进进，张红岭#

1)许昌幼儿师范学校 许昌 461700 2)郑州大学药学院 郑州 450001

钙通道拮抗剂[1-3]是一种重要的、临床常用的心血管治疗药物，广泛用于冠心病、心绞痛、高血压、心律失常、心力衰竭等的临床治疗。目前临床常用的钙通道阻滞剂主要有两种，分别为二氢吡啶类和非二氢吡啶类。盐酸马尼地平为二氢吡啶类钙通道拮抗剂，对心脏无抑制作用，不影响心率，具有一定抗动脉粥样硬化作用，对肾脏具有保护作用，不良反应少，对于高血压合并2型糖尿病或者糖耐量降低的患者以及老年患者均有良好的降压作用[4]。目前，测定盐酸马尼地平含量的方法有HPLC法[5-6]和液相色谱-质谱联用法(LC-MS)[7-8]。与上述方法相比，毛细管电泳法具有不使用有机溶剂、经济、高效分离等优点，目前在药物制剂、蛋白质及食品的分析检测中已广泛应用。作者建立了采用高效毛细管电泳法测定盐酸马尼地平片中盐酸马尼地平含量的方法，报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料 P/ACE MDQ毛细管电泳仪(美国Beckman公司)，熔融石英毛细管(河北永年光导纤维厂)，Starter 3C酸度计与CP214分析天平(美国奥豪斯公司)，超纯水器(美国Millipore公司)。盐酸马尼地平对照品(纯度 ＞99.0%，批号:20110218)、内标物苯磺酸氨氯地平对照品(纯度＞99.0%，批号:20110309)均购自湖北远成药业有限公司，盐酸马尼地平片(10 mg/片，郑州大学新药研究中心提供，批号:20110625、20110709、20110728)，实验所用其他试剂均为分析纯，缓冲液和样品溶液配制用水均为超纯水。

1.2 所需溶液的制备 ①运行缓冲液:称取无水醋酸钠1.23 g，溶于500 mL超纯水中，得到30 mmol/L醋酸钠溶液，用1 mol/L醋酸溶液调节pH为4.5。②对照品溶液:精密称取盐酸马尼地平对照品适量，加水定容于100 mL容量瓶中，配成1.0 g/L对照品溶液。③内标溶液:精密称取苯磺酸氨氯地平适量，加水定容于100 mL容量瓶中，配成1.0 g/L内标溶液。④样品溶液:取供试品盐酸马尼地平片3批，每批20片，精密称重，置干燥洁净的研钵中研磨均匀，精密称取适量(约相当于盐酸马尼地平10 mg)，各3份，置100 mL容量瓶中，加适量水充分溶解，再加水定容至刻度，摇匀，以0.45 μm滤膜过滤，取续滤液即为供试品溶液。

1.3 电泳条件 以熔融石英毛细管柱(45 cm×75 μm，有效长度 37 cm)为固定相，压力进样(3.4 kPa×5 s)，工作电压 25 kV，柱温 25 ℃，检测波长228 nm，运行缓冲液:30 mmol/L醋酸盐缓冲液(pH 4.5)。每次运行前用0.1 mol/L氢氧化钠溶液、超纯水、运行缓冲液依次冲洗毛细管5、3、3 min，2次运行之间以缓冲液冲洗3 min。

1.4 方法学考察

1.4.1 标准曲线的绘制 分别精密吸取对照品溶液 0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50 mL，置 10 mL容量瓶中，各加入内标溶液1.0 mL，加水定容至刻度，摇匀，得到含内标物0.1 g/L，对照品质量浓度分别为 0.025、0.050、0.100、0.150、0.200、0.250 g/L的溶液;按1.3中实验条依次进样，以对照品的质量浓度(g/L)为X轴，对照品与内标物峰面积的比值为Y轴，进行线性回归。

1.4.2 精密度实验 精密量取对照品溶液、内标溶液各1.0 mL，置10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，配制成0.1 g/L对照品溶液(内标浓度0.1 g/L)，按1.3中实验条件连续重复进样6次，记录色谱图并计算对照品与内标物峰面积比值及迁移时间。

1.4.3 最低检测限与最低定量限 分别取信噪比为3∶1时盐酸马尼地平溶液的质量浓度为最低检测限，取信噪比为10∶1时盐酸马尼地平的质量浓度为最低定量限。

1.4.4 加样回收率实验 取同一批号已知含量的盐酸马尼地平片20片，精密称量，计算平均片重，置研钵中研磨均匀，精密称取该粉末9份(相当于平均片重)，置于100 mL容量瓶中，分别精密加入盐酸马尼地平对照品适量、内标溶液10 mL，加入适量水充分溶解，再加水定容至刻度，混匀，以0.45 μm滤膜过滤，取续滤液，按1.3中实验条件进样检测。

1.5 样品含量测定 分别精密吸取不同批号的样品溶液4.0 mL及内标溶液1.0 mL，置10 mL容量瓶中，加水定容至刻度。按1.3中实验条件进样检测。

2 结果

2.1 毛细管电泳图 见图1。

2.2 方法学考察结果 该法标准曲线回归方程为:Y=12.086X+0.00689，r=0.9994。由此可知，在内标浓度为0.1 g/L时，马尼地平含量在0.025～0.250 g/L时线性关系良好。马尼地平的最低检测限为0.0025 g/L，最低定量限为 0.008 g/L。精密度实验中，峰面积比RSD为1.67%，迁移时间RSD为0.79%。加样回收率实验结果见表1。

图1 对照品(A)及样品(B)毛细管电泳图

表1 加样回收率实验结果

2.3 样品含量测定结果 3批样品马尼地平相对标示含量分别为 99.32%、99.28%、99.57%。

3 讨论

缓冲液的pH值对样品峰的分离有较大的影响。溶液pH值对毛细管表面特性及柱壁与溶质的电荷差异有较大影响，可改变其相互作用，影响各峰之间的分离度。实验考察多种 pH值(3.5、4.0、4.5、5.0、6.0)对分离度的影响，结果表明，随着缓冲液pH值的增高，电渗流增大，样品的保留时间缩短，但峰形亦随之变差。综合考虑后，选用pH值为4.5的醋酸盐缓冲液，样品分析时间短，且有较好的分离度。

分离电压主要对分离度和分析时间产生影响。当分离电压增加，毛细管轴向的电场强度同时增强，柱效增大，分离时间缩短。分别选择分离电压15、20、25 kV进行实验，结果显示，25 kV时迁移时间短，同时盐酸马尼地平和苯磺酸氨氯地平有较好的分离度。

缓冲液的浓度在一定程度上影响峰形和迁移时间。随着离子浓度增大，电渗流减小、迁移时间延长、色谱峰变宽。分别选择30、50、70 mmol/L的醋酸盐缓冲液，当缓冲液浓度为30 mmol/L时，电流较小，产生的热较小，马尼地平和氨氯地平能得到较好的分离。

加入内标可提高毛细管电泳的准确度。该研究结果显示，加入内标后，回归方程线性相关系数r=0.9994，RSD=1.67%。

该方法和HPLC[2]法相比，具有样品保留时间短、分析速度快的优点。该方法样品保留时间为3 min;HPLC法样品保留时间为11 min。此外，样品制备及分析过程中，HPLC法用到有机溶剂，污染大，该方法未用到有机溶剂，更加环保。

总之，该方法简便、快速、经济、重复性好，可用于盐酸马尼地平片中盐酸马尼地平含量的测定。

[1]罗琼，禢婉玲，席芳，等.二氢吡啶类钙通道拮抗剂抗心肌肥厚作用依赖于其对N-型钙通道的阻断能力[J].南方医科大学学报，2010，30(4):755

[2]韩秀珍，孙妍.心肌病治疗的新进展[J].实用儿科临床杂志，2011，26(13):981

[3]蔡广研，寇佳，陈香美.高血压肾损害诊治新认识[J].中国实用内科杂志，2013，33(3):173

[4]钱岳晟，王谷亮，张伟忠，等.盐酸马尼地平片治疗轻、中度高血压的有效性和安全性研究[J].中国新药杂志，2013，22(15):1793

[5]兰为民，徐炳欣，安卫平，等.HPLC法测定盐酸马尼地平片中主药的含量[J].中国药房，2011，22(29):2767

[6]于波涛，杜晓琳，金伟华，等.马尼地平固体分散体的制备及体外溶出试验[J].西南国防医药，2013，23(9):933

[7]Todeschini V，Sangoi Mda S，Volpato NM.Delapril and manidipine measurements by liquid chromatography-tandem mass spectrometry in a pharmaceutical formulation[J].Eur J Mass Spectrom(Chichester，Eng)，2011，17(3):287

[8]Jing J，Ren W，Chen X，et al.Determination and pharmacokinetics of manidipine in human plasma by HPLC/ESIMS[J].Biomed Chromatogr，2007，21(8):836