高效液相色谱法测定药用胶囊中铬含量

★ 肖俊辉 周玉生 郑自通

(南华大学附属第二医院药剂科 湖南 衡阳 421001)

自“毒胶囊”事件曝光以来，胶囊中铬含量的检测一直是社会关注的热点。胶囊中的铬主要来自不法企业的劣质明胶[1]，被人体吸收后，易导致湿疹、溃疡、气管炎等疾病，还将破坏血液系统，危害肝脏、肾脏器官，甚至可致癌[2]。

目前，我国对药用胶囊中铬含量的检测，主要按照《中国药典》2010版二部标准，采用原子吸收光谱法。该法虽精确灵敏，但存在检测时间长、前处理复杂等缺陷[3]。本实验建立反相高效液相色谱法测定胶囊中铬含量模型，以甲醇-磷酸盐缓冲液(15∶85)为流动相，于541nm波长处以外标法测定。使用设备实现自动化进样，操作方便简单，结果准确。

1 仪器与试剂

高效液相色谱仪(日本岛津公司LC-20A)；原子吸收分光光度仪(日本岛津公司AA6800型)；甲醇(色谱纯)，实验用水为去离子水，试液均采用分析纯原料，按照德国质量标准DIN53314方法配制。胶囊来源：市面随机购买五种药品胶囊。

2 方法

2.1 色谱条件 沙安莱科分析仪器有限公司专用分析级色谱柱(250mm × 4.6mm，5μm)，萃取保护柱(4.0mm × 10mm，3μm)，检测波长：541 nm，柱温：25℃，流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.72 g，加水溶解至1000 mL)(15∶85)，流速：1.0 mL·min-1，灵敏度：0.08 AUFS，进样量：20 μL。

2.2 对照品溶液的制备 取重铬酸钾标准品适量，精密称定，用甲醇制成0.1 mg·L-1的溶液，即得。对照品图谱见图1。

图1 对照品色谱图

2.3 供试品溶液的制备 取10mL 0.1mol·L-1磷酸氢二钾缓冲液加入20mL比色管中，通氮气5min，精密称取事先剪碎的胶囊样品0.500g加入管中，盖紧磨口塞，涡旋振荡30min至完全溶解，调pH值至7.5～8.0，过滤即得。供试品图谱见图2。

图2 供试品色谱图

2.4 干扰离子与流动相考察 各种金属离子中只有三价铁离子与二苯基卡巴肼反应，生成黄色络合物干扰试验结果[4]。本实验加入过量70%磷酸溶液与三价铁离子反应，生成无色产物，消除干扰。试验采用了多种流动相系统(甲醇-磷酸盐缓冲液，甲醇-水，甲醇-乙腈-水，甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液等)，其中以甲醇-磷酸盐缓冲液最好，流动相配比又以甲醇-磷酸盐缓冲液(15∶85)为好，在上述色谱条件下峰形好，不拖尾，tR=7.8min，与杂质峰可达基线分离。

3 结果

3.1 线性关系考察 取0.1 mL 70%磷酸溶液及1 mL二苯基卡巴肼丙酮溶液，精密加入铬标准溶液，制成浓度为0.00、0.10、0.50、0.50、1.00、2.00 mg·L-1对照品溶液，进样20 μL分析，以色谱峰面积(Y)对铬浓度(X)绘制工作曲线，其回归方程为Y=30692X-4531，线性相关系数为0.9995，表明铬在0.10～2.00 mg·L-1范围内与吸光度呈良好线性关系。

3.2 稳定性考察 取样品供试液，于1，2，4，8，16小时后测定，RSD为0.84%(n=5)表明本方法稳定性良好。

3.3 精密度考察 精密吸取0.1027 mg·L-1标准铬溶液20 μL，连续进样测定5次，RSD为0.31%(n=5)，表明本实验精密度良好。

3.4 重复性实验 精密称取同一批次样品5份，按“2.3”项下方法分别制备供试品溶液5份，测峰面积计算含量，铬平均含量为1.380±0.164 mg·kg-1，RSD为0.47%(n=5)，表明本实验重复性良好。

3.5 加样回收实验 取9份已测定含量的胶囊样本(铬含量1.380mg·kg-1)0.1g，精密加入不同剂量的0.1027 mg·L-1铬标准溶液1.1mL(80%)、1.3mL(100%)、1.5mL(120%)按“3.1”方法测定，计算回收率(结果见表1)，平均回收率为99.53%，RSD为1.44%。表明本方法安全可靠。

表1 加样回收实验

表2 高效液相色谱法与原子吸收光谱法结果对照

3.6 样品测定 取胶囊样品按“2.3”方法制备供试品溶液，按“3.1”方法测定峰面积，通过线性回归方程计算其样品铬含量。按药典2010版二部正文第二部分“胶囊用明胶”项下规定，采用原子吸收光谱法测定同一批次样品，与本实验测定结果比较。共检测5种样品胶囊(结果见表2)，根据统计学分析，两种方法无显著差异(n=5，

t=2.236，P>0.05)。

4 讨论

高效液相测定胶囊中铬含量具有三高一快的特点，即高效柱、高选择性、高灵敏度、分析速度快[5]。与药典规定的原子光谱法测定比较，两者结果无显著差异，所需仪器价格适中，稳定准确，重现性好。

[1]Yao LK.Effect of Quality of Pharmaceutical Gelatin on Safety of Capsules[J]. The Science and Technology of Gelatin, 2006,12(4): 204-206.

[2]肖俊辉,周玉生. 比色法快速检测药用胶囊铬限量[J].中南医学科学杂志,2012,40(6): 621-623.

[3]黄辉,李本涛,邵鸿飞. 微波消解-石墨炉原子吸收光谱法测定胶囊中的痕量铬[J].化学分析计量,2011,20(3): 30-32.

[4]许春树. 皮革六价铬含量的检测方法及改进[J].轻工标准与质量,2005(2): 34-35.

[5]Hossain M A, Kumita M, Michigami Y, et al. J Chromatogr Sci[J].2005, 43(2): 98-103.